湖南省豬群主要疫病病原分子流行病學調查與分析.pdf

1、近年來，我國豬群疫病呈大面積流行態(tài)勢，給各地的養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的威脅和重大經濟損失，湖南省作為傳統(tǒng)養(yǎng)豬大省也未能幸免。為解決豬群疫病防治問題，我國各級政府、研究單位投入了巨大的資金、人力、物力開展疫病病因的界定、防治技術研究。通過對15個省（自治區(qū)、直轄市）發(fā)病豬群連續(xù)不斷的調查、檢測，初步確定豬瘟(CSF)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)、豬圓環(huán)病毒感染(PCI)是造成各地豬群發(fā)病的主要病因。為進一步了解湖南省豬群主要疫病病因、病原分

2、子流行病學本底及演化規(guī)律，為制定湖南省豬群主要疫病防控規(guī)劃提供參考依據(jù)，2006年7月-2007年6月，本研究對來自湖南省16地市的249份發(fā)病豬樣品進行了上述三種病原的RT-PCR/PCR檢測、病原分離鑒定及分子流行病學分析。
　　 1.試驗一通過RT-PCR/PCR方法對收集的249份病料進行CSFV、PRRSV、PCV2病原檢測。結果:CSFV核酸陽性66份，檢出率為26.5％; PRRSV核酸陽性106份，檢出率42.5

3、8％; PCV2核酸陽性72份，檢出率28.9％;三種病原以PRRSV的檢出率最高。單一感染CSFV28份、PRRSV55份、PCV231份;雙重感染CSFV-PRRSV21份、PRRSV-PCV224份、CSFV-PCV211份;三重感染6份。可以推測，PRRSV可能是湖南省豬群最主要的病原，在防控方面應予以重視。
　　 2.實驗二根據(jù)地域及種群代表性原則，挑取部分經RT-PCR檢測CSFV核酸呈陽性的病料接種PK-15細胞，

4、獲得了30株CSFV地方流行株，對其E2基因片段(272bp)進行克隆、測序。結果:分離株E2基因與國內外流行毒株GXWZ020406、CH01 TWN、Brescia等E2基因核苷酸同源性為76.9％-99.6％，差異較大，說明湖南省CSFV正向著不同方向進化;與疫苗毒株(HCLV)核苷酸同源性在76.9％-96.7％之間，其中同源性低于85％的有23株，僅有HUN280一株與其同源性較高(96.7％);各分離株之間同源性在76.9％

5、-100％之間，這說明當前湖南省CSF地方流行毒株可能已經形成，且朝著遠離疫苗株的方向進化。同時，目前沒有發(fā)現(xiàn)周邊其他國家地區(qū)發(fā)現(xiàn)的基因3型毒株。
　　 3.試驗三根據(jù)地域及種群代表性原則，挑取部分經RT-PCR檢測PRRSV核酸呈陽性的病料接種Marc-145細胞，獲得了50株PRRSV流行毒株，對分離株ORF5基因克隆、測序，得到603bp的目的基因片段。核苷酸同源性分析表明分離株ORF5基因之間的核苷酸同源性為95.5％～

6、100％;與VR-2332國外美洲型毒株和BJ-4、CH-1a、HB-1、HB-2國內美洲型毒株的ORF5基因核苷酸同源性為88.1％～98.4％;遺傳進化分析表明，分離株和CH-1a、YA、HB-2株屬于同一分支，而與VR-2332、MLV、HB1等遺傳關系較遠。表明，全部分離株均屬美洲型PRRSV，來自該省16個地市的50個PRRSV分離株間無明顯地域差異。
　　 4.實驗四據(jù)地域及種群代表性原則，挑取部分經PCR檢測PCV

7、2核酸呈陽性的病料接種PK-15細胞，獲得了22株流行毒株，對分離株全基因進行克隆、測序，得到1768bp的目的基因。對22株PCV2分離株全基因序列進行同源性比較分析，結果表明我國PCV2流行毒株之間有非常高的同源性(96.3％～99.8％)，與國內外PCV2流行毒株之間也有很高的同源性（95.5％～99.9％）。從系統(tǒng)發(fā)生進化樹可以看出，我國PCV2流行毒株與美洲、歐洲和亞洲等地的PCV2都有很近的親緣關系。這說明PCV2沒有明顯的