豬繁殖與呼吸綜合癥病毒E+M雙基因重組腺病毒載體的構建.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合癥是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。PRRSV含有8個開放閱讀框，其中GP5蛋白（EP）和膜蛋白（MP）具有很強的免疫原性，一直是重組疫苗的研究熱點。 本實驗利用復制缺陷型腺病毒載體首次成功構建了同時攜有EP和MP的重組腺病毒。在構建重組腺病毒的試驗

2、中，首先用反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）的方法分別擴增出豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5和ORF6，將ORF5和ORF6用口蹄疫病毒2A序列串聯(lián)，再將連接好的E+2A+M基因亞克隆入腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV，經(jīng)篩選獲得了重組穿梭質粒pAdTrack-CMV/E+2A+M；然后在大腸桿菌BJ5183內將此重組穿梭質粒和腺病毒骨架載體pAdEasy進行同源重組，獲得了插有外源基因的重組腺病毒質粒pAd/E+2A+M；最后，經(jīng)