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文檔簡介
1、目的：構(gòu)建攜帶人超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道4（HCN4）基因的重組腺病毒載體，獲得重組腺病毒 rAd-HCN4，為進(jìn)一步在細(xì)胞和動物水平研究 HCN4基因的功能奠定基礎(chǔ)。
方法：根據(jù)細(xì)菌內(nèi)同源重組的方法使用AdEasy腺病毒包裝系統(tǒng)，將人HCN4基因克隆到腺病毒穿梭載體質(zhì)粒pshuttle-CMV中，腺病毒穿梭質(zhì)粒pshuttle-CMV-HCN4線性化后與腺病毒載體 pAdEasy發(fā)生同源重組獲得重組腺病毒質(zhì)粒 pAd
2、Easy-HCN4后，通過脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染 HEK293細(xì)胞，產(chǎn)生重組腺病毒rAd-HCN4，鑒定正確后進(jìn)行擴(kuò)增、純化和滴度測定。
結(jié)果：通過酶切鑒定和DNA測序鑒定，結(jié)果證明重組腺病毒載體 pAdEasy-HCN4構(gòu)建成功；重組腺病毒rAd-HCN4進(jìn)行PCR鑒定可見到陽性擴(kuò)增條帶，測定重組腺病毒rAd-HCN4滴度高達(dá)1×109 Tu/ml。
結(jié)論：構(gòu)建了攜帶HCN4基因的重組腺病毒載體，并成功包裝出重組腺病毒rAd
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