辣椒再生體系的建立及FaNES1基因轉化辣椒.pdf

1、辣椒抗蟲基因工程發(fā)展的最大障礙是辣椒離體再生困難,以致轉化率太低。本研究以6個辣(甜)椒品種為試材,分別就基因型、外植體類型、苗齡、培養(yǎng)基成分等對辣椒離體再生的影響進行了較為系統(tǒng)的探討,建立了辣椒的再生體系。在前人研究的基礎上,通過對外源基因轉化辣椒的轉化培養(yǎng)條件的摸索,建立辣椒的遺傳轉化體系。通過農桿菌介導的方法將FaNES1導入辣(甜)椒,經過PCR檢測,初步證實目的基因已整合到辣椒基因組中。主要結果如下:
　　 1不同的辣

2、(甜)椒品種在不同的培養(yǎng)基中其分化頻率有較大差別。其中IAA0.5mg/L+6-BA5mg/L對蘇椒五號和Shakira的誘導頻率最高,分別達到89.34％和82.37％; IAA0.5mg/L+6-BA6mg/L對Dallas的誘導頻率最高,達74.16％;IAA0.8mg/L+6-BA5mg/L,對Fiesta的誘導頻率最高,達73.06％;IAA0.8mg/L+6-BA4mg/L對Polara的誘導頻率最高,達70.06％；IAA

3、1.0mg/L+6-BA5mg/L對Olympus的誘導頻率最高,達65.98％。
　　 2培養(yǎng)基中添加AgNO3對辣(甜)椒外植體不定芽的誘導與伸長都沒有影響；但是能有效地抑制外植體培養(yǎng)過程中的褐化現象。
　　 3 GA3的添加有利于不定芽的伸長,但是抑制不定芽的分化。不定芽的伸長頻率隨著GA3濃度的增加而增加,但當GA3濃度增加到3.0 mg/L時反而抑制不定芽的伸長,GA3的適合濃度為1.0～2.0 mg/L,能有

4、效的促進不定芽的伸長。
　　 4在培養(yǎng)基中添加6-BA(0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L)與IAA(0、0.2、0.5 mg/L),或ZT(0.5、1.0 mg/L)與GA3(0、0.5、1、1.5、2.0、3.0 mg/L)進行配組,結果表明Zt1.0mg/L+GA32.0mg/L對不定芽伸長效果最好。
　　 5設置卡那霉素(km)濃度為0mg/L、70～110mg/L,結果表明110mg/L的Km可完全抑制蘇

5、椒五號不定芽分化。
　　 6農桿菌感染前辣椒轉化外植體進行預培養(yǎng),感染后共培養(yǎng)及共培養(yǎng)后的延遲培養(yǎng)有利于子葉遺傳轉化效率的提高,在預培養(yǎng)階段設置1d,2d,3d,4d,延遲培養(yǎng)設置0～4d,結果顯示共培養(yǎng)最佳時間分別為2 d,延遲培養(yǎng)的時間也為2 d。
　　 7在轉化苗的生根階段,Km明顯的抑制根系的生長,選擇不使用Km進行篩選為宜。
　　 8將橙花叔醇合酶基因FaNES1轉化辣椒,得到轉化植株。對部分轉化植株提