辣椒再生體系的建立及FaNES1基因轉(zhuǎn)化辣椒.pdf

1、辣椒抗蟲基因工程發(fā)展的最大障礙是辣椒離體再生困難,以致轉(zhuǎn)化率太低。本研究以6個(gè)辣(甜)椒品種為試材,分別就基因型、外植體類型、苗齡、培養(yǎng)基成分等對(duì)辣椒離體再生的影響進(jìn)行了較為系統(tǒng)的探討,建立了辣椒的再生體系。在前人研究的基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)外源基因轉(zhuǎn)化辣椒的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)條件的摸索,建立辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將FaNES1導(dǎo)入辣(甜)椒,經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè),初步證實(shí)目的基因已整合到辣椒基因組中。主要結(jié)果如下:
　　 1不同的辣

2、(甜)椒品種在不同的培養(yǎng)基中其分化頻率有較大差別。其中IAA0.5mg/L+6-BA5mg/L對(duì)蘇椒五號(hào)和Shakira的誘導(dǎo)頻率最高,分別達(dá)到89.34％和82.37％; IAA0.5mg/L+6-BA6mg/L對(duì)Dallas的誘導(dǎo)頻率最高,達(dá)74.16％;IAA0.8mg/L+6-BA5mg/L,對(duì)Fiesta的誘導(dǎo)頻率最高,達(dá)73.06％;IAA0.8mg/L+6-BA4mg/L對(duì)Polara的誘導(dǎo)頻率最高,達(dá)70.06％；IAA

3、1.0mg/L+6-BA5mg/L對(duì)Olympus的誘導(dǎo)頻率最高,達(dá)65.98％。
　　 2培養(yǎng)基中添加AgNO3對(duì)辣(甜)椒外植體不定芽的誘導(dǎo)與伸長(zhǎng)都沒(méi)有影響；但是能有效地抑制外植體培養(yǎng)過(guò)程中的褐化現(xiàn)象。
　　 3 GA3的添加有利于不定芽的伸長(zhǎng),但是抑制不定芽的分化。不定芽的伸長(zhǎng)頻率隨著GA3濃度的增加而增加,但當(dāng)GA3濃度增加到3.0 mg/L時(shí)反而抑制不定芽的伸長(zhǎng),GA3的適合濃度為1.0～2.0 mg/L,能有

4、效的促進(jìn)不定芽的伸長(zhǎng)。
　　 4在培養(yǎng)基中添加6-BA(0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L)與IAA(0、0.2、0.5 mg/L),或ZT(0.5、1.0 mg/L)與GA3(0、0.5、1、1.5、2.0、3.0 mg/L)進(jìn)行配組,結(jié)果表明Zt1.0mg/L+GA32.0mg/L對(duì)不定芽伸長(zhǎng)效果最好。
　　 5設(shè)置卡那霉素(km)濃度為0mg/L、70～110mg/L,結(jié)果表明110mg/L的Km可完全抑制蘇

5、椒五號(hào)不定芽分化。
　　 6農(nóng)桿菌感染前辣椒轉(zhuǎn)化外植體進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),感染后共培養(yǎng)及共培養(yǎng)后的延遲培養(yǎng)有利于子葉遺傳轉(zhuǎn)化效率的提高,在預(yù)培養(yǎng)階段設(shè)置1d,2d,3d,4d,延遲培養(yǎng)設(shè)置0～4d,結(jié)果顯示共培養(yǎng)最佳時(shí)間分別為2 d,延遲培養(yǎng)的時(shí)間也為2 d。
　　 7在轉(zhuǎn)化苗的生根階段,Km明顯的抑制根系的生長(zhǎng),選擇不使用Km進(jìn)行篩選為宜。
　　 8將橙花叔醇合酶基因FaNES1轉(zhuǎn)化辣椒,得到轉(zhuǎn)化植株。對(duì)部分轉(zhuǎn)化植株提