高效辣椒遺傳轉化體系構建及其在辣椒功能基因組研究中的運用.pdf

1、試驗首先建立辣椒的遺傳轉化體系，再用農桿菌介導法將從辣椒中分離獲得的CaWRKY2，CaWRKY3，CaWRKY4，CaWRKY5，CaDREB，CaNAC，CaI1基因所構建的干擾載體對辣椒普通栽培種P009，P020，P120，P121辣椒品種進行了遺傳轉化，獲得了抗性再生植株，并對所獲得的轉基因苗進行了初步的RT-PCR分子鑒定及抗病性分析，目的是為進一步進行CaWRKY家族基因以及其他基因功能分析以及抗病機制研究提供研究材料，并

2、為辣椒建立了一個高效穩(wěn)定的遺傳轉化體系，為進一步開展辣椒基因工程遺傳改良和辣椒功能基因組學研究奠定了基礎。試驗主要結果如下： (1)選取辣椒品種P009，P020，P120，P121進行辣椒離體再生體系優(yōu)化。試驗得出最適小苗苗齡為8-15d，最佳外植體為去頂芽莖尖生長點，最佳培養(yǎng)基為MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+蔗糖30g，pH5.8。 (2)P009，P020，P

3、120，P121去頂芽莖尖生長點，帶柄子葉經過預培養(yǎng)，與農桿菌的共培養(yǎng)，篩選培養(yǎng)，伸長培養(yǎng)，生根培養(yǎng)獲得離體再生轉基因苗。預培養(yǎng)與共培養(yǎng)培養(yǎng)基為MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+100 mg/L AS+蔗糖30g，pH5.8；誘導篩選培養(yǎng)基MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+70 mg/L Kan+500 mg/L Cb+蔗糖30g，p

4、H5.8；伸長培養(yǎng)基MS+2.0mg/L6-BA+0.2 mg/L IAA+1.0 mg/L GA3+4.0 mg/L AgNO3+70 mg/L Kan+500 mg/L Cb+蔗糖30g，pH5.8；生根培養(yǎng)基1/2 MS+200 mg/LCef+蔗糖30g.pH5.8。 (3)EHA105根癌農桿菌介導的辣椒遺傳轉化的最佳條件是：外植體在誘導培養(yǎng)基上預培養(yǎng)1-3d，農桿菌共培養(yǎng)前在含50mg/L Rif，Spec和100m

5、g/L AS兩次活化，侵染OD600值為0.3-0.6，侵染10 min，25℃、黑暗條件下共培養(yǎng)2-3 d。 (4)獲得了17株P009轉iCaDREB轉化植株；5株P020轉iCaWRKY4轉化植株；21株P120轉iCaWRKY2轉化植株；2株P120轉iCaWRKY3轉化植株；15株P120轉iCaWRKY4轉化植株；12株P120轉iCaWRKY5轉化植株；9株P120轉iCaI1轉化植株；9株P120轉iCaNAC轉