

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、本研究的目的是探討源于胎兒生殖嵴三黃雞胚胎干細胞(Embryonic Stem cell,ES細胞)的分離培養(yǎng)及甜菜堿對其增殖和分化的影響。通過研究甜菜堿對三黃雞ES細胞物質(zhì)合成、抗氧化的作用,以及對三黃雞ES細胞體外分化、定向誘導分化為神經(jīng)細胞的影響,揭示甜菜堿調(diào)節(jié)三黃雞ES細胞生長增殖的作用機理,闡明甜菜堿在雞ES細胞分化中的作用。 1、采用酶消化法從5.5天三黃雞胎兒生殖嵴分離獲得雞原始生殖細胞,體外抑制分化培養(yǎng),來源于原
2、始生殖細胞的ES細胞克隆形成典型的“鳥巢”狀集落。AKP和PAS染色,ES細胞呈陽性。ES細胞具有多分化潛能,能分化形成類胚體,也能分化為上皮細胞、神經(jīng)細胞和心肌細胞。這表明分離培養(yǎng)的雞ES細胞具有典型的胚胎干細胞特性。 2、采用不同濃度的消化液和不同消化時間,從5.5天的三黃雞胎兒生殖嵴分離獲得原始生殖細胞,用含不同濃度犢牛血清的抑制分化培養(yǎng)液培養(yǎng)來源于雞原始生殖細胞的ES細胞,測定ES集落數(shù),探討消化液濃度、消化時間、犢牛血
3、清對雞ES細胞分離培養(yǎng)的影響。結果表明,采用0.1%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化液從雞生殖嵴分離原始生殖細胞的效果最好,消化時間是4 min。在抑制分化培養(yǎng)液中添加20%NBS培養(yǎng)雞ES細胞的效果最好,繼代消化時間是40 s。 3、在抑制分化培養(yǎng)液中分別添加5、10、15、20 mmol/L甜菜堿,培養(yǎng)雞ES細胞,對照組雞ES細胞僅用抑制分化培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察雞ES細胞的形態(tài)和生長行為,測定雞ES細胞集落數(shù)、傳代數(shù),以及蛋白質(zhì)
4、、DNA和RNA含量,并對添加不同濃度甜菜堿對雞ES細胞是否存在毒性作用進行評價。結果表明,①添加5、10、15 mmol/L甜菜堿可提高雞ES細胞克隆數(shù)和傳代數(shù),以添加15 mmol/L甜菜堿效果最好,傳代數(shù)可達10代。添加20 mmol/L甜菜堿組的雞ES細胞從1代和2代開始克隆的集落數(shù)急劇下降,僅傳至第五代。②與對照組相比,各添加甜菜堿組均可極顯著(P<0.01)提高雞ES細胞蛋白質(zhì)含量,以添加15 mmol/L甜菜堿效果最好。添
5、加10、15 mmol/L甜菜堿組可極顯著(P<0.01)提高雞ES細胞DNA含量,添加20 mmol/L甜菜堿則降低雞ES細胞DNA含量,但差異不顯著(P>0.05)。③與對照組相比,添加5、10、15mmol/L甜菜堿能提高雞ES細胞增殖率,對雞ES細胞無毒害作用。而添加20mmol/L甜菜堿雞ES細胞增殖率降低,對雞ES細胞有毒害作用。 4、外源性氧化劑H2O2制備雞ES細胞氧化損傷模型,探討甜菜堿對雞ES細胞抗氧化作用的
6、影響。結果表明,添加10、15 mmol/L,甜菜堿極顯著(P<0.01)提高氧化狀態(tài)下雞ES細胞SOD和GSH-Px酶活性,15 mmol/L甜菜堿還顯著減少MDA的產(chǎn)生(P<0.05)。添加20 mmol/L甜菜堿極顯著(P<0.01)提高氧化狀態(tài)下雞ES細胞SOD和GSH-Px酶活性,但比添加15 mmol/L甜菜堿的抗氧化作用弱。 5、在培養(yǎng)液中添加不同含量甜菜堿,探討甜菜堿對雞ES細胞體外分化的影響。結果表明,甜菜堿對
7、雞ES細胞無定向誘導分化作用,且抑制雞ES細胞向心肌細胞分化。 6、維甲酸(retinoic acid,RA)聯(lián)合甜菜堿體外定向誘導雞ES細胞分化為神經(jīng)細胞,對照組僅添加RA,測定神經(jīng)細胞分化率,探討甜菜堿對由RA定向誘導雞ES細胞分化為神經(jīng)細胞的影響。結果表明,聯(lián)合添加RA和甜菜堿或僅添加RA均誘導74%~85%雞ES細胞分化為神經(jīng)細胞,分化形成的神經(jīng)細胞呈網(wǎng)狀連接,大部分為雙極細胞,有小部分分化細胞胞體成多邊形,有多個短突起
8、,類似多級神經(jīng)元。添加10、15 mmol/L甜菜堿能顯著(P<0.05)提高神經(jīng)細胞分化率,促進RA定向誘導雞ES細胞分化為神經(jīng)細胞,且以添加10 mmol/L甜菜堿效果最好。 綜上,從雞胚胎生殖嵴分離培養(yǎng)的雞ES細胞具有典型的胚胎干細胞特性。甜菜堿可以促進雞ES細胞的生長增殖,同時發(fā)揮著抗氧化作用,但高劑量(20mmol/L甜菜堿)對雞ES細胞有毒害作用,抑制三黃雞ES細胞增殖。雞ES細胞分化研究表明,甜菜堿對雞ES細胞無定
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 雞胚胎干細胞的分離培養(yǎng)及其誘導分化.pdf
- 雞胚胎干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定.pdf
- 胚胎干細胞的分離培養(yǎng)及定向分化研究.pdf
- 豬胚胎干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和分化的研究.pdf
- 低氧對胚胎干細胞體外增殖和分化的影響.pdf
- 胚胎干細胞的分離培養(yǎng)與定向分化研究.pdf
- 胚胎干細胞的分離和培養(yǎng).pdf
- 家兔類胚胎干細胞分離培養(yǎng)及羊棲菜多糖對其生長增殖和分化的影響.pdf
- 用BRL條件培養(yǎng)基分離克隆雞胚胎干細胞及誘導分化.pdf
- 昆明小鼠胚胎干細胞分離培養(yǎng)及其向原始生殖細胞誘導分化的研究.pdf
- 綿羊胚胎干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定及誘導分化的研究.pdf
- 從原始生殖細胞分離培養(yǎng)人胚胎干細胞.pdf
- 胚胎干細胞的分離培養(yǎng)和誘導分化為神經(jīng)細胞的實驗研究.pdf
- 小鼠胚胎干細胞分離培養(yǎng)的研究.pdf
- 牛胚胎干細胞分離培養(yǎng)及鑒定.pdf
- 小鼠胚胎干細胞分離、培養(yǎng)及鑒定研究.pdf
- Apodemus胚胎干細胞和人胚胎干細胞向中胚層分化的研究.pdf
- DAZL基因對雞胚胎干細胞誘導為生殖細胞的功能研究.pdf
- 胚胎干細胞的培養(yǎng)及其向間質(zhì)干細胞分化的研究.pdf
- 昆明鼠胚胎干細胞的分離培養(yǎng).pdf
評論
0/150
提交評論