家兔類胚胎干細(xì)胞分離培養(yǎng)及羊棲菜多糖對其生長增殖和分化的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩106頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、本試驗(yàn)的旨在分離培養(yǎng)獲得家兔類胚胎干細(xì)胞及研究羊棲菜多糖對家兔類ES細(xì)胞生長增殖和分化的影響,從細(xì)胞水平探討SFPS的營養(yǎng)作用和藥理功能。通過研究SFPS對家兔類ES細(xì)胞飼養(yǎng)層生長增殖和細(xì)胞因子分泌的影響及其對家兔類ES細(xì)胞物質(zhì)合成、抗氧化和分化的作用,揭示SFPS調(diào)節(jié)家兔類胚胎干細(xì)胞生長增殖的作用機(jī)理,闡明SFPS對家兔類ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的作用。 1.從13-15dpc家兔胎兒生殖嵴分離出原始生殖細(xì)胞培養(yǎng)于小鼠胎兒成纖

2、維細(xì)胞(MEF)飼養(yǎng)層和家兔胎兒成纖維細(xì)胞(REF)飼養(yǎng)層,以胰蛋白酶消化法和機(jī)械分離-胰蛋白酶消化法進(jìn)行傳代,并對培養(yǎng)得到的家兔類ES細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明:以MEF作為飼養(yǎng)層,用機(jī)械分離.胰蛋白酶消化法傳代,更有利于家兔類ES細(xì)胞的體外培養(yǎng),最高傳至6代,培養(yǎng)得到的家兔類胚胎干細(xì)胞AKP染色和PAS染色陽性,保持完整的染色體組(2n=44),具有多分化潛能,可形成類胚體,可分化為上皮樣細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)樣細(xì)胞。

3、2.用含5、10、20、40、80mg/LSFPS的培養(yǎng)液培養(yǎng)家兔類ES細(xì)胞飼養(yǎng)層(即MEF),研究SFPS對MEF生長增殖、營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用和細(xì)胞因子分泌的影響。結(jié)果表明:5、10、20mg/LSFPS對MEF形態(tài)和生長增殖無顯著影響(P>0.05),40、80mg/LSFPS對MEF表現(xiàn)出明顯的抑制作用(P<0.05),使MEF突觸分叉,細(xì)胞內(nèi)顆粒增多;SFPS可顯著促進(jìn)MEF對葡萄糖的攝取利用(P<0.05),但對鈣和氨基酸的利用

4、無顯著影響(P>0.05);低濃度SFPS有促進(jìn)MEF堿性成纖維細(xì)胞因子(bFGF)、干細(xì)胞生長因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)分泌的趨勢,但高濃度SFPS有減少M(fèi)EF分泌bFGF、SCF和LIF的的趨勢。 3.用不同濃度SFPS培養(yǎng)家兔類ES細(xì)胞,觀察家兔類ES細(xì)胞的形態(tài)和生長行為,測定其集落數(shù)和傳代數(shù),以及家兔類ES細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的含量。結(jié)果表明:5、10、20mg/L SFPS對家兔類ES細(xì)胞的生長增殖

5、有促進(jìn)作用,集落數(shù)量多,體積大,最高傳至7代,40、80mg/LSFPS對家兔類ES細(xì)胞發(fā)生毒性作用,集落數(shù)量減少,易分化,傳3-4代后丟失。SFPS對家兔類ES細(xì)胞蛋白質(zhì)的含量無顯著影響(P>0.05),5、10、20mg/L SFPS可顯著提高家兔類ES細(xì)胞DNA、RNA含量(P<0.01),40、80mg/LSFPS對家兔類ES細(xì)胞DNA含量無顯著影響(P>0.05),但顯著降低RNA的含量(P<0.01)。 4.以H2O

6、2為家兔類ES細(xì)胞外源性氧化劑,制備氧化損傷模型,并用不同濃度SFPS對家兔類ES細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)和修復(fù),探討SFPS對家兔類ES細(xì)胞的抗氧化作用。結(jié)果顯示:5、10、20mg/LSFPS對家兔類ES細(xì)胞具有保護(hù)和修復(fù)作用,可顯著提高氧化損傷家兔類ES細(xì)胞的增殖活力以及SOD和GSH-Px酶活性,減少M(fèi)DA的產(chǎn)生,抑制H2O2導(dǎo)致的DNA斷鏈。40、80 mg/LSFPS對氧化損傷家兔類ES細(xì)胞的保護(hù)和修復(fù)作用不明顯,有時(shí)反而加劇對家兔類E

7、S細(xì)胞的損傷,對DNA斷鏈的抑制作用較弱。 5.以家兔胎肝提取液為肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑,同時(shí)與SFPS聯(lián)合使用誘導(dǎo)家兔類胚胎干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化,探討SFPS對家兔類胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示:胎肝提取液可誘導(dǎo)家兔類胚胎干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞,誘導(dǎo)分化細(xì)胞呈圓形、星形、不規(guī)則多邊形,具有糖原貯存、ICG攝取和排泄功能,能夠合成白蛋白和尿素。并且家兔類胚胎干細(xì)胞在體外也能自發(fā)分化為肝細(xì)胞,但分化率較低。低濃度SFPS對胎肝提

8、取液誘導(dǎo)家兔類胚胎干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞有一定促進(jìn)作用,可提高分化細(xì)胞PAS染色和ICG攝取陽性率,促進(jìn)誘導(dǎo)分化形成的肝細(xì)胞白蛋白和尿素的合成。 綜上所述,從胎兒生殖嵴分離培養(yǎng)的家兔類胚胎干細(xì)胞具有胚胎干細(xì)胞的特征。并且,低濃度SFPS促進(jìn)家兔類ES細(xì)胞的生長增殖,高濃度SFPS起抑制作用,SFPS促進(jìn)飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌細(xì)胞因子,同時(shí)發(fā)揮抗氧化作用可能是其促進(jìn)家兔類ES細(xì)胞生長增殖的作用機(jī)理。低濃度SFPS對胎肝提取液誘導(dǎo)家兔類胚胎干細(xì)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論