江蘇地區(qū)鯽魚寄生粘孢子蟲種類調(diào)查與分類研究.pdf

1、江蘇是全國鯽魚主要養(yǎng)殖地區(qū)之一，但自90年代起就一直遭受粘孢子蟲病害的困擾，給養(yǎng)殖戶造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了江蘇鯽魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本研究通過對江蘇地區(qū)鯽魚寄生粘孢子蟲種類的調(diào)查和分類研究，并建立洪湖碘泡蟲的一種PCR快速檢測方法，旨在為粘孢子蟲的分類和生活史研究提供一些理論基礎(chǔ)，并為鯽魚粘孢子蟲病防治提供一定的理論依據(jù)。
　　 1.鯽魚寄生粘孢子蟲種類調(diào)查與分類。作者在2011年7月到2012年4月期間，在江蘇無錫、鹽城

2、、大豐、射陽、濱海等地區(qū)池塘養(yǎng)殖鯽魚的鰓部、喉部、體表共檢測到6種粘孢子蟲，并通過形態(tài)學(xué)和18S rDNA序列的比對，對其進(jìn)行分類鑒定，結(jié)果如下:卡特碘泡蟲(M.cultus Yokoyama, Ogawa& Wakabayashi，1995)、吳李碘泡蟲（M.wulii Landsberg& Lom，1991）、瓶囊碘泡蟲（M.ampullicapsulatus Zhao等，2008）、洪湖碘泡蟲（M.Honghuensis Liu等

3、，2011）、多涅茨尾孢蟲（Henneguya doneci Schulman，1962）、武漢單極蟲(Thelohanellus wuhanensis Xiao&Chen，1993)，其中以由喉部寄生的洪湖碘泡蟲引起的“喉孢子蟲病”和由肝胰臟寄生的吳李碘泡蟲引起的“腹孢子病”的危害最為嚴(yán)重，并利用NJ/ML/MP法構(gòu)建粘孢子蟲的系統(tǒng)發(fā)育樹，分析驗證了5種粘孢子蟲的系統(tǒng)發(fā)育地位，補(bǔ)充了6種粘孢子蟲形態(tài)學(xué)和5種粘孢子蟲的18S rDNA信

4、息。
　　 2.鯽魚養(yǎng)殖塘放射孢子蟲種類的調(diào)查和分類。為了掌握鯽魚粘孢子蟲的感染和傳播途徑，作者在2011年7月到2012年4月期間，在江蘇常州、溧陽等地區(qū)暴發(fā)過粘孢子蟲病的鯽魚養(yǎng)殖塘開展媒介宿主和放射孢子蟲種類調(diào)查。在池塘底泥中采集寡毛類，并從蘇氏尾鰓蚓中發(fā)現(xiàn)了4種具有不同形態(tài)特征的放射孢子，即:Echinactinomyxon type1、 Echinactinomyxon type2、 Triactinomyxon typ

5、e、Raabeiatype。將這4種類型放射孢子蟲的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)與國內(nèi)外文獻(xiàn)中已記述的放射孢子蟲的作比較，發(fā)現(xiàn)分別在寄生宿主、形態(tài)大小、等方面均有明顯差異，因此，這4種放射孢子蟲為國內(nèi)外首次報道。利用18S rDNA序列比對的方法確定了Echinactinomyxon1為與鯽魚肝部感染的吳李碘泡蟲對應(yīng)的放射孢子蟲。
　　 3.洪湖碘泡蟲巢式PCR檢測技術(shù)。用無菌蒸餾水稀釋到不同倍數(shù)(100，10-1，10-2，10-3，10-4，

6、10-5，10-6，10-7)的洪湖碘泡蟲基因組DNA為模板，利用粘孢子蟲18S rDNA通用引物[ERIB1(ACCTGGTTGATCCTG CCAG)和ERIB10(CTTCCGCAGGTTCACCTACGG)]作為外引物，洪湖碘泡蟲特異引物[Nest-F(TCTTGATGCGGTGAGTGG)和Nest-R(ACATTACA CCCTGAGCGAG)]為內(nèi)引物進(jìn)行巢氏PCR，并做好空白對照，反應(yīng)結(jié)束后將首輪和二輪PCR產(chǎn)物各取5μ