三種動(dòng)物源隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)的分子鑒定與亞型分析.pdf

1、隱孢子蟲(chóng)是一種具有重要醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)意義的原生動(dòng)物寄生蟲(chóng)，可感染包括人在內(nèi)的絕大多數(shù)動(dòng)物。野生動(dòng)物和牛均是隱孢子蟲(chóng)的重要儲(chǔ)存宿主，目前研究人員已在多種野生動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了不同隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種/亞型，且某些地區(qū)野生動(dòng)物源與牛源隱孢子蟲(chóng)存在交叉感染，甚至具人獸共患性。因此，為了探尋四川省某些野生動(dòng)物源隱孢子蟲(chóng)與牛源隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種/亞型間的關(guān)系，進(jìn)行了本研究。
　　本試驗(yàn)收集了2014年4月-2015年8月期間采自四川黑熊、藏酋猴、羚牛和獼猴養(yǎng)殖場(chǎng)

2、，成都、碧峰峽動(dòng)物園，成都、雅安大熊貓繁育基地的圈養(yǎng)野生動(dòng)物糞便樣品共計(jì)465份，采用飽和蔗糖漂浮和巢式PCR法對(duì)其中隱孢子蟲(chóng)的感染情況進(jìn)行了檢測(cè)和鑒定，同樣利用巢式PCR法鑒定本實(shí)驗(yàn)室保存的四川地區(qū)牛源隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性糞便樣品53份;擴(kuò)增GP60及MLST位點(diǎn)(MS1、MS2、MS3、MS16)基因鑒定隱孢子蟲(chóng)亞型。并運(yùn)用Structure分析了Cryptosporidium andersoni的種群結(jié)構(gòu)，探索四川地區(qū)C.anderson

3、i的種群特征。
　　糞便漂浮后鏡檢結(jié)果顯示野生動(dòng)物感染隱孢子蟲(chóng)為陰性。但巢式PCR檢測(cè)到了松鼠猴源、駱駝源隱孢子蟲(chóng)(SCSM01、CDBC01)各1份。同時(shí)有48株牛源隱孢子蟲(chóng)分離株(SC01-SC48)的18S rRNA基因位點(diǎn)成功擴(kuò)增。
　　結(jié)合18S rRNA基因位點(diǎn)序列同源性和種系發(fā)育分析判斷SCSM01為C.hominis，CDBC01為C.andersoni。而SC01-SC07、SC08-SC15、SC16-S

4、C29和SC30-SC48分別為C.parvum、C.ryanae、C.andersoni和C.bovis。四川地區(qū)的牛源隱孢子蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為C.bovis。且分離株SC20-SC29與CDBC01的18S rRNA基因位點(diǎn)無(wú)堿基的差異，而SC16-SC19與CDBC01僅在431位顯示一個(gè)堿基序列差異，四川省野生動(dòng)物與牛隱孢子蟲(chóng)可能存在交叉感染。
　　SCSM01與SC01-SC07的GP60基因位點(diǎn)序列的種系發(fā)育表明，SCSM

5、01為新亞型，命名為IkA7G4;而SC01-SC07亞型為IIdA19G1。CDBC01和SC16-SC29的MS1、MS2、MS3和MS16四個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(MLST)的序列種系發(fā)育則表明，CDBC01的亞型為A6、A5、A2、A1，SC16-SC24亞型為A4、A4、A2、A1;SC25-SC28亞型為A4、A4、A4、A1;SC29亞型為A1、A4、A4、A1。將我國(guó)所有的C.andersoni亞型進(jìn)行種群結(jié)構(gòu)分析，共得到了3個(gè)族

6、群，各族群均有本試驗(yàn)所得亞型，且優(yōu)勢(shì)亞型分布在第1族群，與第2族群中的亞型相比具有一定的區(qū)域特異性。
　　綜上所述，本試驗(yàn)首次在四川地區(qū)檢測(cè)到了松鼠猴感染隱孢子蟲(chóng)，彌補(bǔ)了松鼠猴感染了隱孢子蟲(chóng)的空白，豐富了關(guān)于非人靈長(zhǎng)類(lèi)的宿主范圍，鑒定出的IkA7G4填充了C.hominis的亞型數(shù)據(jù)庫(kù)。再次鑒定出駱駝源C.andersoni預(yù)示著C.andersoni可能為四川省感染駱駝的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種。同時(shí)鑒定出四川地區(qū)牛與駱駝均可感染C.ander