勝紅薊黃脈病毒F1分離物伴隨衛(wèi)星小分子DNAβ的啟動子鑒定.pdf

1、雙生病毒在世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生，并已在多種作物上造成毀滅性危害，國內(nèi)已報道和鑒定了30多種雙生病毒。本文以福建省首例發(fā)現(xiàn)的勝紅薊黃脈病毒AYVV(登錄號EF544600)為研究對象，通過雙生病毒衛(wèi)星小分子DNAβ的通用引物，PCR擴增獲得AYVV-[F1]的完整DNAβ分子。經(jīng)克隆、序列測定和生物信息學分析，結果表明AYVV-[F1]DNAβ組分全長1346個核苷酸，與臺灣番茄曲葉病毒TLCV DNAβ(登錄號AJ542495)的同源性最

2、高，達100％。根據(jù)F1 DNAβ的全長序列設計特異性引物F1-βC1-F和F1-βC1-R對βC1基因進行了克隆后再將該基因插入到原核表達載體pGEX-4T-3中。重組表達載體pGEX-F1-βC1轉化至大腸桿菌BL21(DE3)經(jīng)IPTG誘導后進行表達，SDS-PAGE結果表明F1βC1基因得到了正確表達。此外，根據(jù)F1 DNAβ基因組的序列設計特異性引物對F1 DNAββC1 ORF的大小為803 nt的部分啟動子序列進行了克隆，

3、同時利用PlantCARE程序對βC1 ORF啟動子序列進行分析，在其內(nèi)部發(fā)現(xiàn)了一些真核啟動子中常見的順式作用元件，如TATA-box，CAAT-box和GC-motif，同時發(fā)現(xiàn)了其他的一些植物調(diào)控元件。隨后根據(jù)βC1 ORF啟動子上順式作用元件的位置設計了多個不同大小的缺失啟動子，并由這些缺失啟動子驅動egfp報告基因在煙草中進行瞬時表達和永久表達，鑒定了該啟動子的啟動活性。對瞬時表達的western blot分析和熒光顯微鏡檢查表