AtATM3和CYP2E1基因增強轉基因紫花苜?？怪亟饘俸陀袡C物能力研究.pdf

1、近年來，隨著工業(yè)化進程的加快，我國的環(huán)境污染形勢日益嚴峻，土壤污染問題凸顯，嚴重阻礙經濟發(fā)展和損害人體健康，因此控制與修復土壤污染勢在必行。目前，土壤污染修復主要包括物理/化學修復和生物修復兩大類。植物修復技術因更加快速、高效、費用低，且便于推廣，近年來呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。
　　本研究旨在利用轉基因技術將兩個基因轉入紫花苜蓿以提高其對土壤重金屬和有機物復合污染的修復能力;AtATM3和細胞色素氧化酶基因CYP2E1是兩種分別與重

2、金屬和有機物抗性、積累相關的基因。目前，國內外尚未出現(xiàn)同時利用這兩個基因進行土壤修復的報道。
　　實驗構建含有CYP2E1基因的植物表達載體:用目的基因替換表達載體pBI121上的Gus基因，構建P35S-CYP2E1-T35S表達盒，即質粒pBI121-CYP2E1。然后通過凍融法將表達載體pBI121-CYP2E1，同另一植物表達載體pCambia-AtATM3轉入同一農桿菌LBA4404中。
　　實驗選取“阿爾岡金”紫

3、花苜蓿下胚軸作為基因轉化受體，通過組織培養(yǎng)研究，篩選并優(yōu)化胚性愈傷組織的誘導分化條件，構建并優(yōu)化了適合“阿爾岡金”的遺傳轉化再生體系。經共轉化將AtATM3基因和CYP2E1基因導入“阿爾岡金”紫花苜蓿中。經共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)最終獲得了186株抗卡那霉素的轉基因植株。
　　篩選出的186株抗性植株應用PCR和RT-PCR進行分子學水平檢測后，對轉基因植株的抗重金屬和有機物功能進行了鑒定。結果表明所獲得抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基