紫花苜?？购騇sMADS1的克隆及其功能研究.pdf

1、低溫是限制植物的生長發(fā)育及作物產量的主要非生物脅迫之一。MADS-box是在植物體內研究較為廣泛的轉錄因子，對植物的生長發(fā)育、生殖起到重要的調控作用。本研究從紫花苜蓿中克隆得到MsMADS1基因，構建其植物表達載體，并將MsMADS1基因轉入模式植物煙草中，研究MsMADS1基因的功能。主要研究結果如下:
　　1.MsMADS1基因的克隆與序列分析
　　根據(jù)肇東苜蓿低溫脅迫下轉錄組測序序列信息設計克隆引物，通過RT-PCR方

2、法克隆獲得MsMADS1基因，該基因全長為741bp，編碼246個氨基酸。該蛋白含有一個MADS-box結構域，以及一個K-box結構域。經(jīng)NCBI protein BLAST分析，發(fā)現(xiàn)MsMADS1與MtMADS-box氨基酸相似性為90％，且在結構域內有3個差異位點。
　　2.MsMADS1基因的表達
　　通過qRT-PCR的方法，對MsMADS1基因在肇東苜蓿不同組織及不同非生物脅迫下的相對表達量進行檢測，發(fā)現(xiàn)MsMA

3、DS1基因在根、莖、葉、花、果實中均表達，但在根中表達量最高;在不同非生物脅迫下，肇東苜蓿的地上部葉和地下部根中的MsMADS1基因受低溫脅迫強烈誘導表達，并響應鹽、鹽堿、干旱和ABA。
　　3.MsMADS1基因植物表達載體的構建
　　構建了MsMADS1基因的植物表達載體PCAMBIA1305.1-MsMADS1，含有CaMV35S啟動子和植物潮霉素抗性。
　　4.MsMADS1基因對煙草的遺傳轉化
　　利用

4、農桿菌介導法將MsMADS1基因轉入模式植物煙草中，經(jīng)潮霉素(Hyg)篩選共獲得35棵抗性植株。通過PCR的初步鑒定共獲得21株轉基因植株。通過qRT-PCR法對陽性轉基因植株中的基因的表達情況進行檢測，結果表明轉基因植株中4號、18號和29號株系中MsMADS1基因的表達量比較高。
　　5.轉MsMADS1基因煙草的抗寒性分析
　　對轉基因煙草進行低溫脅迫處理，分析轉基因煙草的抗寒能力。將轉基因植株進行低溫脅迫處理，野生型