1型鴨甲肝病毒(DHAV-1)致雛鴨肝損傷機制的研究.pdf

1、鴨病毒性肝炎是由1型鴨甲肝病毒（DHAV-1）引起雛鴨的一種急性高度接觸性傳染病，主要侵害3周齡以內(nèi)的雛鴨，特別是1周齡以內(nèi)的雛鴨最易感，病死率達90％以上。雖然近兩年DHAV-1的全基因序列公布于世使得DVH得到了人們的關注，國內(nèi)眾多研究者的注意力集中在病原學的研究，而對于DVH的發(fā)病機制的研究仍局限在上世紀的組織學和血清學水平。自然感染DHA-V與日齡有關，1～2周齡是發(fā)病的高峰期。我們前期研究已經(jīng)證實4日齡的雛鴨人工感染DHAV-

2、1后1～2天急性死亡，而35日齡的大鴨僅見一過性的精神沉郁。35日齡鴨為什么不發(fā)病，除了與免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善以外，是不是與鴨肝臟發(fā)育相關，國內(nèi)外對不同品種的8周齡以上鴨的肥肝發(fā)生機制研究的較多，而對于35日齡以下肉鴨肝臟脂代謝還未見報道。本課題第一部分擬對3-35日齡鴨的脂肪代謝規(guī)律進行動態(tài)的研究。其次雛鴨感染DHAV-1后快速死亡與急性肝損傷及其導致的低血糖昏迷或肝性腦病密切相關。因此本研究第二部分以臨床分離的DHAV-1JX株感染動

3、物模型，研究病毒感染后，肝臟脂質過氧化、脂代謝相關調控基因和炎癥因子的改變，從而闡明鴨肝炎病毒致雛鴨肝損傷的機制。
　　1.3-35日齡櫻桃谷肉鴨肝臟脂代謝的特點
　　為了弄清鴨肝炎病毒和鴨日齡的易感性差異，本研究擬在自由采食的飼養(yǎng)條件下，從鴨血清學和肝組織學的變化著手，動態(tài)觀察35日齡內(nèi)肉鴨肝臟脂肪的代謝規(guī)律。結果表明3-35肉鴨肝組織內(nèi)粗脂肪的含量均大于10％，其中以3日齡肉鴨肝臟內(nèi)粗脂肪含量最高，可達38.65％;肝組

4、織冰凍切片油紅O染色發(fā)現(xiàn)4日齡雛鴨肝臟內(nèi)中性脂肪含量最高。3-35日齡肉鴨血漿脂代謝指標顯示3-7日齡總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、高密度膽固醇脂(HDLC)、低密度膽固醇脂LDLC均下降，而甘油三酯(TG)升高，TBIL、TC、HDLC、LDLC、TG的變化明顯的時間集中在7、14日齡。應用免疫組織化學方法對肝組織內(nèi)的微粒體脂肪酸轉運蛋白(MTP)、過氧化物酶增值激活受體(PPAR)和脂肪酸結合蛋白(FABP)表達進行觀察:

5、14日齡時雛鴨血漿TG升至最高，可能與組織內(nèi)MTP的表達量7-14日齡下降密切相關，21日齡時肝組織中粗脂肪含量最低與該時間點的MTP的表達量上升至最高有關，暗示MTP參與肝細胞內(nèi)TG的轉運;PPAR在3-28日齡表達量逐漸上升，與肝組織內(nèi)粗脂肪含量下降呈負相關;FABP的表達可能與肉鴨后期肝臟內(nèi)TG的合成密切相關。結論:櫻桃谷肉鴨1-3周齡是肝內(nèi)脂質向機體其他部位輸送的關鍵時期。
　　2.鴨肝炎病毒對4日齡櫻桃谷肉鴨的肝損傷機制

6、研究
　　禽類的肝臟是禽體內(nèi)含巨噬細胞（枯否氏細胞）最多的器官，機體受到應激時，這些細胞的活化在鴨肝炎病毒感染時的作用還不清楚。鑒于雛鴨肝臟的特點，本研究從鴨肝炎病毒感染雛鴨后肝脂代謝、自由基及細胞因子等變化來闡明肝損傷的可能機制。DHAV-1JX感染雛鴨后5d，肝臟內(nèi)總抗氧化能力下降，丙二醛(MDA)在感染后2-3d升高，一氧化氮(NO)及誘導性一氧化氮合酶(iNOS)在2-3d升高，引起肝臟出血和大量肝細胞變性壞死及膽管上皮的

7、增生。熒光定量PCR檢測細胞因子的轉錄水平:干擾素a(INFa)轉錄1d升高后下降，而細胞因子白細胞介素1(IL-1)、白細胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)轉錄水平均下降，血清IL-1β感染后1d升高明顯，血清IL-6變化不明顯。肝細胞受損引起血液中轉氨酶迅速升高，肝內(nèi)MTP表達量1d急劇下降，脂代謝異常，血漿TG升高，TC降低，DLDC升高，肝脂質轉運異常引發(fā)脂肪變性。DHAV-1JX致4日齡雛鴨急性肝損傷至肝功