條紋斑竹鯊和鯽魚BAFF基因的克隆和性質(zhì)分析.pdf

1、本論文共分為4個(gè)部分:
　　 1.綜述近年來B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)的研究進(jìn)展。
　　 2.探討魚類BAFF基因研究的意義。
　　 3.通過RT-PCR.和RACE技術(shù),從條紋斑竹鯊魚(Chiloscyllium plagiosum)脾臟組織中擴(kuò)增得到B淋巴細(xì)胞刺激因子(CpBAFF)的全長(zhǎng)cDNA序列。CpBAFF由272個(gè)氨基酸組成,與其它脊椎動(dòng)物BAFF相同,CpBAFF氨基酸序列中也含有一個(gè)跨膜區(qū)和

2、一個(gè)弗林酶切位點(diǎn)。CpBAFF與其它已知的硬骨魚類斑馬魚、大西洋鮭魚、斑點(diǎn)綠河豚、三刺魚、彩虹胡瓜魚和虹鱒魚在氨基酸水平上的相似性分別為36％,40％,43％,45％,47％和57％。Real time PCR實(shí)驗(yàn)表明BAFF主要存在于條紋斑竹鯊的免疫器官脾臟和腎臟中。在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá)了帶有His6標(biāo)簽的重組可溶性CpsBAFF,并對(duì)其進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳及免疫轉(zhuǎn)印檢測(cè)鑒定。目的蛋白CpsBAFF經(jīng)Ni2+-IM

3、AC純化后,在體外可刺激B細(xì)胞存活,并呈劑量依賴性。CpBAFF是從軟骨魚中獲得的第一個(gè)BAFF分子,而且是目前克隆到的最原始的BAFF基因,這對(duì)研究脊椎動(dòng)物免疫因子的進(jìn)化有著重要意義。
　　 4.通過RT-PCR和RACE技術(shù),從鯽魚(Carassius auratus)脾臟組織中擴(kuò)增得到B淋巴細(xì)胞刺激因子的全長(zhǎng)cDNA序列(CaBAFF)。CaBAFF cDNA全長(zhǎng)1639bp,包括408bp的5端非編碼區(qū)、438bp的3端