鯽魚Rag基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、DNA重組激活基因(Recombination activating genes，RAG)是脊椎動物特異性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵基因，也是脊椎動物進(jìn)化分析的標(biāo)記基因之一。鯽魚具有很強的適應(yīng)性和抗病能力，是我國廣泛養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)淡水魚；由于具有不同的倍性和豐富的遺傳多樣性，又是研究魚類基因組進(jìn)化的獨特材料。本研究用PCR方法擴增、克隆了鯽魚的Rag基因。鯽魚Rag1基因從起始密碼到終止密碼總長4188bp，由三個外顯子和兩個內(nèi)含子組成，其中開放閱

2、讀框長3192bp，編碼1063個氨基酸。Rag2基因從起始密碼到終止密碼總長1593bp，沒有內(nèi)含子，只有單一的編碼區(qū)，編碼530個氨基酸。Rag1和Rag2基因的ORF和氨基酸序列在不同魚類中的對比結(jié)果表明其在進(jìn)化過程中非常保守。不同魚類Rag1基因的第二內(nèi)含子也是高度保守的，轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點分析表明在第二內(nèi)含子的保守區(qū)域中有許多轉(zhuǎn)錄因子的可能結(jié)合位點。其中有一段在所有已知魚類中都存在的保守區(qū)域是與性腺發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子SRY和SO

3、X5的可能結(jié)合位點，提示Rag1基因的表達(dá)可能與性腺發(fā)育具有相關(guān)性。用RT-PCR方法進(jìn)行的組織特異性表達(dá)分析表明Rag1基因在鯽魚成體的頭腎和精巢都能檢測到表達(dá)，提示Rag基因不僅主導(dǎo)了免疫組織中的DNA重組，也可能參與了生殖細(xì)胞的DNA重組。RT-PCR檢測證明Rag1基因在鯽魚胚胎發(fā)育至第5天開始表達(dá)，在第7天鯽魚胚胎的胸腺原基中可檢測到Rag1基因mRNA的雜交信號，在第9天鯽魚胚胎的胸腺原基中可以檢測到很強的Rag1 mRNA