鯽魚(yú)Rag基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、DNA重組激活基因(Recombination activating genes，RAG)是脊椎動(dòng)物特異性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵基因，也是脊椎動(dòng)物進(jìn)化分析的標(biāo)記基因之一。鯽魚(yú)具有很強(qiáng)的適應(yīng)性和抗病能力，是我國(guó)廣泛養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)淡水魚(yú)；由于具有不同的倍性和豐富的遺傳多樣性，又是研究魚(yú)類(lèi)基因組進(jìn)化的獨(dú)特材料。本研究用PCR方法擴(kuò)增、克隆了鯽魚(yú)的Rag基因。鯽魚(yú)Rag1基因從起始密碼到終止密碼總長(zhǎng)4188bp，由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子組成，其中開(kāi)放閱

2、讀框長(zhǎng)3192bp，編碼1063個(gè)氨基酸。Rag2基因從起始密碼到終止密碼總長(zhǎng)1593bp，沒(méi)有內(nèi)含子，只有單一的編碼區(qū)，編碼530個(gè)氨基酸。Rag1和Rag2基因的ORF和氨基酸序列在不同魚(yú)類(lèi)中的對(duì)比結(jié)果表明其在進(jìn)化過(guò)程中非常保守。不同魚(yú)類(lèi)Rag1基因的第二內(nèi)含子也是高度保守的，轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析表明在第二內(nèi)含子的保守區(qū)域中有許多轉(zhuǎn)錄因子的可能結(jié)合位點(diǎn)。其中有一段在所有已知魚(yú)類(lèi)中都存在的保守區(qū)域是與性腺發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子SRY和SO

3、X5的可能結(jié)合位點(diǎn)，提示Rag1基因的表達(dá)可能與性腺發(fā)育具有相關(guān)性。用RT-PCR方法進(jìn)行的組織特異性表達(dá)分析表明Rag1基因在鯽魚(yú)成體的頭腎和精巢都能檢測(cè)到表達(dá)，提示Rag基因不僅主導(dǎo)了免疫組織中的DNA重組，也可能參與了生殖細(xì)胞的DNA重組。RT-PCR檢測(cè)證明Rag1基因在鯽魚(yú)胚胎發(fā)育至第5天開(kāi)始表達(dá)，在第7天鯽魚(yú)胚胎的胸腺原基中可檢測(cè)到Rag1基因mRNA的雜交信號(hào)，在第9天鯽魚(yú)胚胎的胸腺原基中可以檢測(cè)到很強(qiáng)的Rag1 mRNA