水稻紋枯病菌PG的分離純化、理化性質(zhì)及Rspg1基因的克隆與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)產(chǎn)生的多聚半乳糖醛酸酶(PG)是一個重要的致病因子。本研究以丙酮法提取病菌PG粗蛋白，后依次經(jīng)DEAESepharose Fast Flow離子交換柱、Phenyl-Sepharose6 Fast Flow疏水柱、SephadexG-75凝膠柱和DE52離子交換柱層析，獲得具有較高活性的PG純化蛋白。該PG蛋白分子量為39.81kD，等電點為4.58；含有糖基(含糖量為1.48％)而不

2、含脂類物質(zhì)，是一種糖蛋白；蛋白部分含有α-氨基，但不含芳香族氨基酸。經(jīng)測定，這種PG蛋白在pH4-12范圍內(nèi)均有活性，但pH5時活性最大；對熱(≥40℃)不穩(wěn)定，100℃下水浴20min活性完全喪失；對紫外線、氯仿、胰蛋白酶和蛋白酶K均敏感，處理后活性分別下降60.0％、48.3％、65.0％和68.3％。
　　 根據(jù)GenBank中立枯絲核菌PG基因序列(FJ544455、FJ544456、DQ848983)特征設(shè)計特異引物，

3、通過PCR技術(shù)獲得水稻紋枯病菌多聚半乳糖醛酸酶全長基因Rspg1。該基因大小為1395bp，推測含有5個內(nèi)含子(57bp、57bp、59bp、66bp、61bp)，其序列與玉米紋枯病菌pg1基因(FJ544456)相似性達99％。
　　 以pET-28a(+)為載體、IPTG為誘導(dǎo)物，將Rspg1基因轉(zhuǎn)入Escherichia coliBL21(DE3)進行表達。結(jié)果表明，在IPTG誘導(dǎo)下，含有Rspg1基因的轉(zhuǎn)化菌培養(yǎng)破碎上清

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