膜醭畢赤酵母對柑橘采后青綠霉病害的生物防治及機理研究.pdf

1、柑橘是全球最重要的水果之一。青霉、綠霉病是柑橘果實最主要的采后真菌病害，是造成腐爛損失的重要原因。雖然化學殺菌劑可以有效的控制一部分微生物病害的發(fā)生，但它存在增強病原菌耐藥性以及危害環(huán)境和人體健康等問題，所以人們一直尋找能夠代替化學殺菌劑的控制病害的技術(shù)。利用拮抗酵母來防治采后微生物病害被認為是最有潛力的方法之一。
　　 本研究以柑橘果實(Citrus reticulata Banco)為試材，研究膜醭畢赤酵母(Pichiame

2、mbranaefaciens)對柑橘青綠霉病害的防治效果以及拮抗機制。主要討論了膜醭畢赤酵母不同處理液、處理濃度、接種時間順序?qū)σ志Ч挠绊懸约敖湍冈诠麑崅谔幍纳L動態(tài)，并將酵母與一定濃度的外源化學物質(zhì)進行復合，進一步考察酵母復合保鮮劑對柑橘果實貯藏品質(zhì)的影響，同時對可能的拮抗機制如競爭養(yǎng)分空間機制和誘導抗病性機制進行討論。主要研究結(jié)論如下：
　　 (1)在離體條件下，無論是酵母與病原菌同孔或異孔生長，對青綠霉菌生長都有明顯

3、抑制作用。說明酵母與青綠霉病原菌間存在強烈的競爭關(guān)系，其抑菌機制可能是競爭養(yǎng)分空間機制。另外，平板上酵母菌菌落周圍無抑菌圈的現(xiàn)象可以得出該酵母不能產(chǎn)生抑菌的次生代謝產(chǎn)物，即該酵母沒有抗生機制和重寄生機制。
　　 (2)用1×108CFU·mL-1的酵母懸浮液接種和浸泡柑橘果實的柑橘青綠霉病害發(fā)病率和病斑直徑都小于對照，酵母浸泡處理果實的自然發(fā)病率也明顯小于對照果實。這表明，P.membranaefaciens對柑橘青、綠霉病有很

4、好的防治潛力，其抑菌機制可能與營養(yǎng)競爭以及誘導抗病性有關(guān)。
　　 (3)拮抗酵母的生防效果與拮抗菌液類型、處理濃度以及接種時間有關(guān)。用不同類型的酵母處理液處理柑橘果實，發(fā)現(xiàn)熱殺死液和培養(yǎng)濾液基本不能抑制病害，反而加重病害。酵母細胞懸浮液和培養(yǎng)原液的控病效果較好，其中懸浮液的效果最優(yōu)。酵母的拮抗效果與拮抗菌的濃度成正比，當懸浮液濃度為1×108CFU·mL-1時，可以很好的控制青霉及綠霉病害。酵母先于病原菌24 h或者48 h接種

5、，4 d后可完全抑制青、綠霉病的發(fā)生。這進一步說明了酵母的抑制機制可能與營養(yǎng)競爭有關(guān)。
　　 (4)酵母能夠在柑橘果實傷口處迅速定殖，快速增長，且能適應(yīng)大幅度的環(huán)境溫度變化而持續(xù)有效。在4℃和20℃下，拮抗酵母菌接種48 h以后可在果實的傷口處快速繁殖，酵母數(shù)量都分別增加4倍和11倍以上。這說明酵母具備作為商業(yè)生物保鮮劑進行開發(fā)的前提條件。
　　 (5)用酵母接種和浸泡處理柑橘果實都可以誘導果實抗病性的增強，這種作用可能

6、是通過誘導柑橘果實防御酶活性的提高或者植保素的合成實現(xiàn)的。酵母接種和浸泡處理柑橘果實后，柑橘果皮組織的總酚、類黃酮含量以及過氧化物酶(peroxidase，POD)、多酚氧化酶(polyphenoloxidase，PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase，PAL)、幾丁質(zhì)酶(chitinase，CHI)和β-1，3-葡聚糖酶(β-1，3-glucanase，GLU)等酶的活性得到誘導提高。

7、　　 (6)用酵母接種和浸泡處理柑橘果實都可以誘導提高果實的超氧化物歧化酶(superoxidedistmuase，SOD)、抗壞血酸過氧化物酶(ascorbate peroxidase，APX)及谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase，GR)的活性，同時誘導過氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)、超氧陰離子(superoxide anion，O2-)還原谷胱甘肽(glutathione，GSH)

8、和抗壞血酸(ascorbic acid，AsA)含量的提高，但抑制了過氧化氫酶(catalase，CAT)的活性。這說明酵母所誘發(fā)的柑橘果實抗病反應(yīng)中涉及活性氧水平的高低及抗氧化酶活性和抗氧化劑水平的變化。
　　 (7)將外源化學物質(zhì)與酵母拮抗菌混合使用能夠顯著提高拮抗酵母菌對柑橘青綠霉病害的抑菌能力。同時，酵母液及酵母復合其他物質(zhì)后的復合保鮮劑對柑橘果實貯藏品質(zhì)都無不良影響，并且在一定程度上延緩了柑橘的成熟衰老，提高了貯藏品質(zhì)