畢赤酵母Pichia anomala SRF對(duì)蘋果采后青霉病的生防機(jī)制研究.pdf

1、由Penicillium expansum引起蘋果、梨等水果的青霉病,是水果采摘后的重要病害之一,嚴(yán)重影響了果實(shí)的食用價(jià)值和市場(chǎng)價(jià)值。生物拮抗菌能有效防治果實(shí)采摘后腐爛,降低化學(xué)殺菌劑的用量,從而增加食品的安全性,降低了潛在的環(huán)境危害,然而人們對(duì)酵母拮抗菌的作用機(jī)理還沒(méi)有具體的相關(guān)報(bào)道,拮抗菌的抑菌機(jī)理的研究是增強(qiáng)拮抗菌的生防效果以及進(jìn)行菌株篩選的重要前提。近年來(lái),盡管不少研究者在生防模式方面做了不少工作,但由于目前研究方法和手段的有限

2、性,拮抗酵母菌的生防模式目前還不是非常清楚。目前的研究結(jié)果表明拮抗酵母菌的主要抑菌模式包括營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)、空間位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)、寄生、分泌幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶。本文主要從異常畢赤酵母SRF對(duì)蘋果采摘后青霉病的防治效果,單倍體的獲得以及酵母拮抗菌P.anomala SRF外切葡聚糖酶基因的克隆與表達(dá),外切葡聚糖酶基因敲除載體的構(gòu)建等四個(gè)部分進(jìn)行了研究,主要結(jié)果如下:
　　1.異常畢赤酵母 SRF能夠有效地抑制蘋果青霉病的發(fā)生,拮抗菌的抑菌效果與使用

3、濃度呈正相關(guān),酵母拮抗菌的使用濃度越高,蘋果青霉病的發(fā)病率越低,病斑直徑也就越小。
　　2.根據(jù)已報(bào)道的P.anomala外切葡聚糖酶基因設(shè)計(jì)引物,克隆了SRF外切葡聚糖酶基因,命名為PaExg(GenBank:AJ222862.1)?；蚝桶被嵝蛄蟹治霰砻?PaExg開放閱讀框(ORF)長(zhǎng)1284 bp,編碼427個(gè)氨基酸,分子量為49.469 kD,等電點(diǎn)為4.72。序列比對(duì)和同源性分析表明,該序列與GenBank登錄的P.

4、anomala strain K的同源性高達(dá)100％,PaExg的保守結(jié)構(gòu)域分析表明,PaExg屬于GH15家族。構(gòu)建了SRF外切葡聚糖酶基因原核表達(dá)載體,并在IPTG誘導(dǎo)下在大腸桿菌中獲得了成功表達(dá),表達(dá)的轉(zhuǎn)化子表現(xiàn)出明顯的葡聚糖酶活性,驗(yàn)證了該菌株葡聚糖酶基因的克隆。
　　3.通過(guò)對(duì)預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、溫度、鹽離子及其梯度濃度培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究。確定了異常畢赤酵母SRF野生型二倍體細(xì)胞的最佳產(chǎn)孢條件,在YPD培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)24 h,連