原生質(zhì)體融合改良幾株生防放線菌.pdf

1、為了提高現(xiàn)有生防放線菌的綜合性狀，試驗(yàn)將本研究室分離保存的3種各具不同優(yōu)良性狀的生防放線菌F46、SC1和SC11作為親本，開展雙親和3親本的原生質(zhì)體融合，通過研究，荻得了綜合親本優(yōu)良性狀的新型高效生防菌株。 以原生質(zhì)體的形成率和再生率為指標(biāo)，研究了Gly、蔗糖、酶的種類及其質(zhì)量濃度對原生質(zhì)體融合的影響，并確定了最佳的酶解時(shí)產(chǎn)及滅活時(shí)間。結(jié)果表明，3個菌株培養(yǎng)液中加入Gly和蔗糖的質(zhì)量濃度均以0.5％和30％為宜。對菌株SC1和

2、SC11，分別刖10mg/mL和15mg/mL溶菌酶酶解60min和100min較合適；對菌株：F46，以蝸牛酶(10mg/mL)和溶菌酶(10mg/mL)體積比為1∶1的混合酶液酶解75min為宜。菌株F46在55℃條件下熱滅活45min；菌株SCl和SCll則需在55℃條件下熱滅活15min。菌株F46、SCl和SCll的紫外滅活時(shí)間分別為16 min，2 min和3min。 根據(jù)以上的優(yōu)化條件，以兩個親本和3個親本進(jìn)行原生

3、質(zhì)體融合，經(jīng)過數(shù)次試驗(yàn)，依據(jù)菌落的形態(tài)、大小等形態(tài)特征，從再生培養(yǎng)基上分離獲得35株再生菌株，通過6次繼代培養(yǎng)，得到遺傳穩(wěn)定性較好的7個株菌。冉經(jīng)過皿內(nèi)拮抗試驗(yàn)以及菌絲生長速率的測定進(jìn)行復(fù)篩，最后獲得3株在不同方面優(yōu)于親本的融合子F1-1、F11-2和A-1。推斷融合予F1-1是由菌株F46的原生質(zhì)體紫外滅活和菌株SC1的原生質(zhì)體熱火活融合得到的；融合子F11-2是由菌株F46的原生質(zhì)體熱滅活和菌株SC11的原生質(zhì)體紫外火活融合得到的；

4、融合子A-1是由菌株F46的原生質(zhì)體熱滅活、菌株SC1的原生質(zhì)體紫外滅活和菌株SC11的原生質(zhì)體紫外滅活融合獲得的。 對于這3株融合子，通過對其形態(tài)培養(yǎng)特征、生理生化特性以及產(chǎn)孢最等的進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)融合子與親本菌株既有相同點(diǎn)，又存在差別。再利用限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，以親本菌株為對照，F(xiàn)1-1不但兼具有親本F46和SC1的條帶，而且還產(chǎn)生了新的條帶；F11-2具有親本F46和SC11的條帶，且與SC11的條帶特征相似；