pXAIS的安全性及對獼猴內分泌影響的研究.pdf

1、pXAIS是由華中農業(yè)大學農業(yè)動物遺傳育種與繁殖教育部重點實驗室所構建的一種用于提高動物繁殖能力的抑制素基因疫苗，通過平衡致死系統(tǒng)減毒沙門氏菌C500所呈遞的一種核酸疫苗。本試驗應用分子克隆、基因免疫、酶聯(lián)免疫測定、放射免疫等生物技術來研究pXAIS對獼猴抗抑制素抗體產(chǎn)生規(guī)律、繁殖及生殖內分泌的影響，并從環(huán)境和動物組織器官病理學變化等方面來評價該疫苗免疫的安全性，探索最佳抑制素基因免疫方案，為提高獼猴繁殖性能，改善國內動物園獼猴性別比嚴

2、重失調提供實踐指導，同時對生物醫(yī)學、行為組織學等領域的臨床應用也具有一定的理論參考意義。本研究的主要內容如下:
　　 1、獼猴對pXAIS的免疫反應性研究
　　 為分析獼猴對抑制素基因免疫的免疫反應性及影響因素，本研究采用不同劑量的卵泡抑制素融合質粒pXAIS兩次免疫獼猴。結果發(fā)現(xiàn):首次免疫期間整個免疫組的抗體水平均顯著高于對照組(P＜0.05)，但三個處理組之間差異不顯著(P＞0.05);首免后14d，試驗組獼猴血清中

3、抗體水平均呈下降趨勢，但仍高于對照組;加強免疫后，各處理組抗體滴度均顯著高于首次免疫(P＜0.05)，在整個抗體水平監(jiān)控過程中，加免后7-10d內，加強免疫后第7d，獼猴血清中產(chǎn)生抗抑制素抗體水平最高，第14d最低，中間則則略有下降。研究結果表明，pXAIS疫苗免疫獼猴后，能激活獼猴的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抑制素抗體，對獼猴具有良好的抗原性，通過加強免疫可以提高獼猴體內的抗體水平，并能長期持續(xù)表達。
　　 2.pXAIS免疫對獼猴繁殖及生

4、殖內分泌的影響
　　 為探討pXAIS疫苗免疫對獼猴繁殖及生殖內分泌的作用，本試驗采用不同劑量（0.2×1010CFU/只、0.6×1010CFU/只、1.0×1010CFU/只）的抑制素融合質粒pXAIS兩次免疫獼猴。結果表明:各試驗組獼猴雖然沒有出現(xiàn)雙胎或多胎，但與對照組相比，疫苗處理組獼猴發(fā)情時間早且集中，成功實現(xiàn)了高發(fā)情率、高妊娠率、高成活率，其中，1.0×1010CFU/只組三只雌性獼猴全部受孕、分娩，且母子均健康，而

5、對照組發(fā)情率僅為33.33％(1/3)。兩次免疫中，試驗處理組E2水平均高于對照組，但差異不顯著(P＞0.05);加強免疫后7d和14d，0.6×1010CFU/只免疫組E2顯著高于對照組和1.0×1010CFU/只組，與0.2×1010CFU/只組則差異不顯著;試驗組0.6×1010CFU/只和1.0×1010CFU/只兩組P濃度均極顯著高于對照組和0.2×1010CFU/只組(P＜0.01)，而0.2×1010CFU/只組與對照組之

6、間差異不顯著。與首免后檢測點相比，加強免疫后試驗組E2、P水平均顯著提高;從整個生殖激素水平的監(jiān)控過程來看，加強免疫后7d，E2、P水平上升最快。研究結果表明，pXAIS免疫產(chǎn)生的抑制素抗體可中和內源性抑制素，促進多個卵泡的發(fā)育排卵，進而使黃體細胞分泌P，對靈長類獼猴E2、P的變化也有一定的促進作用，且作用大小與免疫次數(shù)和免疫劑量有密切關系。經(jīng)對各免疫組獼猴內分泌激素的測定發(fā)現(xiàn)，0.6×1010CFU/只免疫組效果最佳。此外，抑制素基因

7、疫苗pXAIS免疫獼猴可以誘導獼猴提前發(fā)情，增強妊娠體質，對改善獼猴繁殖性能及嬰幼猴的生長發(fā)育有積極作用。
　　 3.pXAIS免疫獼猴的安全性
　　 為評價pXAIS免疫的安全性，本研究分別以家兔和獼猴為動物模型，用卵泡抑制素融合質粒pXAIS進行兩次免疫，并于試驗過程中對其進行臨床觀察、檢測家兔組織器官的病理學變化以及獼猴排泄物（糞尿混合物）。結果發(fā)現(xiàn)，試驗期間，各試驗組與對照組相比，動物生長狀態(tài)、采食、繁殖狀況及糞