實驗?zāi)c道致病菌的分離鑒定

1、實驗四腸道致病菌分離鑒定,病原生物學教研室,Content,示教：主要腸道桿菌，大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌及變形桿菌的形態(tài)、染色性主要腸道桿菌的培養(yǎng)特性：SS平板/EMB平板主要腸道桿菌的生化反應(yīng)：雙糖、尿素分解反應(yīng) 操作：肥達反應(yīng)糞便腸道致病菌的分離和鑒定——血清學 (*續(xù)) 錄像： 厭氧菌,腸道桿菌的分類,腸桿菌科,志賀菌屬,埃希菌屬,沙門菌屬,克雷伯菌屬,變形桿菌屬,ETEC, EIEC, EPEC, EHEC

2、, EAEC,痢疾、福氏、 鮑氏、宋內(nèi),傷寒，副傷寒， 豬霍亂，腸炎,,,,,,,,,,腸道桿菌的基本特征,形態(tài)結(jié)構(gòu)相似培養(yǎng)要求不高生化反應(yīng)活躍抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜抵抗力不強易發(fā)生變異,糞便標本腸道致病菌鑒別流程,標本,鑒別培養(yǎng)基（SS培養(yǎng)基）,生化反應(yīng)（雙糖管）,血清學鑒定,,,,SS 平板挑取可疑菌落2個(無色,透明,小菌落),接種雙糖管 培養(yǎng),觀察,,,,,SS平板—— 分離腸道病原菌的強選

3、擇培養(yǎng)基,成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、乳糖、枸櫞酸鈉、硫代硫酸鈉、枸櫞酸鐵、膽鹽、煌綠、中性紅（pH6.8-8.0，紅→橙黃）作用：乳糖，中性紅：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)→菌落淡黃色；大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色。膽鹽、枸櫞酸鈉、煌綠：抑制腸道非致病菌如E.coli的生長，對腸道致病菌抑制作用弱?？稍黾訕吮窘臃N量以提高腸道病原菌分離率。病原菌:小,無色,透明非致病菌:大,紅色,EMB平板病原菌:透明,無色

4、 非致病菌:紫黑色,雙糖管,發(fā)酵乳糖 H2S試驗發(fā)酵葡萄糖(產(chǎn)酸產(chǎn)氣)及動力,上層：乳糖,Fe2+固體下層：葡萄糖半固體指示劑:酚紅（pH6.8-8.4, 黃 紅）,,,,致病菌紅色,非致病菌黃色,▼ 觀察：,乳糖 葡萄糖 動力 硫化氫 尿素酶大腸埃希菌 ＋ + －痢疾志賀菌

5、 － + － － 傷寒沙門菌 － + + +/－副傷寒桿菌 － + + －變形桿菌 －

6、 + + +,,,,,,,,雙糖管結(jié)果觀察,可疑腸道致病菌,大腸埃希菌,雙糖管接種方法,穿刺—斜面接種法,肥達試驗,原理：,,,,,傷寒沙門菌菌體O 抗原,傷寒沙門菌鞭毛Ｈ抗原,甲型副傷寒沙門菌鞭毛H抗原,肖氏沙門菌鞭毛Ｈ抗原,已知抗原,,病人血清中的未知抗體,,凝集,肥達試驗,操作：,,,,Ag加樣方向,肥達試驗結(jié)果分析（1）,凝集程度：（＋＋＋＋）上層液澄清，細菌全部凝

7、集于孔底（＋＋＋）上層液基本透明，細菌大部分（75％）凝集于孔底（＋＋）上層液半透明，細菌在孔底有明顯凝集（＋）上層液混濁，孔底有少量凝集（－）不凝集，同于對照書寫報告：＋＋反應(yīng)的最高稀釋度為凝集效價,肥達試驗結(jié)果分析（2）,凝集效價：傷寒沙門菌O≥ 1：80，H≥ 1：160 副傷寒沙門菌H≥ 1：80動態(tài)觀察：雙份血清，效價≥ 4倍O與H抗體的診斷意義：O—IgM, H—