液相色譜分析分離甲地孕酮中2α-甲基化雜質(zhì)【開(kāi)題報(bào)告】

1、<p><b>　　畢業(yè)設(shè)計(jì)開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　應(yīng)用化學(xué)</b></p><p>　　液相色譜分析分離甲地孕酮中2α-甲基化雜質(zhì)</p><p>　　一、選題的背景和意義</p><p>　　色譜技術(shù)的研究起步于20世紀(jì)初，俄國(guó)植物學(xué)家M.S.Tswett發(fā)表了題

2、為“一種新型吸附現(xiàn)象在生化分析上的應(yīng)用”的研究論文中提到了一種用吸附原理分離植物的方法，并命名為色譜法。但由于這種色譜分離技術(shù)速度慢且效率低，沒(méi)有受到科學(xué)界重視。1938年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的德國(guó)化學(xué)家Kuhn采用Tswett色譜分離技術(shù)，在維生素和胡蘿卜素的分離和結(jié)構(gòu)的分析中取得了重大成果，色譜法因此得到各國(guó)科學(xué)家的關(guān)注?？梢灶A(yù)想到，在接下來(lái)的幾十年中，色譜技術(shù)更是飛速發(fā)展。隨著1940年Martin和Synge提出液液分配色譜法后，1

3、952年James和Martin發(fā)明了氣相色譜因此獲得1952年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。緊接著，通過(guò)各國(guó)科學(xué)家的努力，還分別開(kāi)創(chuàng)了毛細(xì)管氣相色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管超臨界色譜、毛細(xì)管電泳和電色譜等分析分離技術(shù)，使色譜技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛。</p><p>　　高效液相色譜是近幾十年來(lái)分析化學(xué)中最活躍的領(lǐng)域之一。這種將分離手段及檢測(cè)系統(tǒng)相連接的分析分離技術(shù)，逐步成為在生化藥物、精細(xì)化工產(chǎn)品、環(huán)境保護(hù)等各個(gè)領(lǐng)域中主要的物質(zhì)

4、分析分離方法。其具有操作條件溫和、選擇性高、批處理量較大和操作自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，可以將物化差別很小的復(fù)雜化合物分離，使之成為分析分離各種物質(zhì)最有效的方法之一。液相色譜法對(duì)要進(jìn)行分離的樣品要求較低，不受樣品揮發(fā)度和穩(wěn)定性的限制，且非常適合含有離子型化合物、不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物等大分子的生物藥品，使之在廣泛的領(lǐng)域發(fā)揮作用。因此，高效液相色譜法仍是從事研究工作和工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用比較普遍的色譜法。</p><p>　　它的原理是在

5、被流動(dòng)相液體帶入色譜柱中時(shí)，利用復(fù)雜混合物在固定相和流動(dòng)相中不同的分配系數(shù)、吸附能力等因素，使各組分彼此分離，從而達(dá)到分離的目的。高效液相色譜按操作方式和目的來(lái)分，可分為分析型和制備型兩種。為了了解樣品性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、組成等信息的為分析型；而制備型則是為了獲得目標(biāo)組分。所以，可以說(shuō)分析型為分析工具，而制備型為分離技術(shù)。由于分析型和制備型需要的操作條件明顯不同，因此前者進(jìn)樣量越小越好，且要避免色譜柱的超載問(wèn)題；后者則要提高產(chǎn)量，色譜柱的超載是

6、必須的。</p><p>　　目前，對(duì)于利用高效液相色譜對(duì)藥品中未知物質(zhì)的檢測(cè)和分離的研究正不斷加深，這對(duì)藥物的生產(chǎn)開(kāi)發(fā)具有重要意義。此課題將對(duì)藥品中未知物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，并將其進(jìn)行分離提純。為該藥品的藥性、成分及結(jié)構(gòu)提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)與今后藥品的大量生產(chǎn)和上市銷售起到促進(jìn)作用。</p><p>　　二、研究目標(biāo)與主要內(nèi)容（含論文提綱）</p><p>　　研究目標(biāo)：利用

7、高效液相色譜，分析分離甲地孕酮中的2α-甲基化雜質(zhì)</p><p><b>　　主要內(nèi)容：</b></p><p>　　將該醫(yī)藥原料藥中2α-甲基化雜質(zhì)進(jìn)行富集，找出合適的方法，液相檢測(cè)富集含量不少于10%。</p><p>　　摸索出液相色譜分析分離該目標(biāo)產(chǎn)物的最佳條件。</p><p>　　將液相柱（c18柱）換為c

8、18半制備柱，以加大進(jìn)樣量，收集α-甲基化雜質(zhì)。</p><p>　　對(duì)α-甲基化雜質(zhì)收集液進(jìn)行濃縮，分析，繼而分離，直至純度達(dá)85%以上。</p><p>　　三、擬采取的研究方法、研究手段及技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案等</p><p><b>　　研究方法及路線：</b></p><p>　　原料藥進(jìn)行處理，后利用液相色譜儀

9、對(duì)藥品中2α-甲基化雜質(zhì)進(jìn)行分析并得到最佳條件，在最佳條件下從甲地孕酮中分離出2α-甲基化雜質(zhì)，且對(duì)2α-甲基化雜質(zhì)進(jìn)行濃縮，分析。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)方案：</b></p><p>　　1.原料藥的預(yù)處理(雜質(zhì)過(guò)濾，尋找適當(dāng)溶劑溶解，重結(jié)晶及2α-甲基化雜質(zhì)的富集)</p><p>　　2.液相色譜儀的使用及樣品分析分離<

10、/p><p>　　2.1 液相色譜儀器的使用</p><p>　　在正式進(jìn)行樣品檢測(cè)前，通過(guò)液相色譜儀的預(yù)熱，以及對(duì)設(shè)備的清洗，沖柱，排空氣等過(guò)程，并通過(guò)計(jì)算機(jī)，對(duì)液相色譜儀進(jìn)樣條件參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，補(bǔ)充不足的流動(dòng)相，檢查設(shè)備是否異常，等待基線走穩(wěn)，使液相色譜儀達(dá)到運(yùn)行的最佳狀態(tài)，為后面的檢測(cè)做好準(zhǔn)備。</p><p>　　2.2 樣品的分析與檢測(cè)</p>&

11、lt;p>　　取經(jīng)過(guò)富集等預(yù)處理的樣品，取少量溶質(zhì)，并加入少量色譜級(jí)甲醇進(jìn)行溶解(保持較高的百分比，可使峰形明顯)，放在一旁待用。到設(shè)備各種條件穩(wěn)定，進(jìn)樣進(jìn)行檢測(cè)。仔細(xì)觀察峰高、峰形、峰面積及時(shí)間等各個(gè)因素，來(lái)確定該樣品的最佳分離條件。分別取流動(dòng)相為甲醇:水=80%:20%、70%:30%、67%:33%和65%:35%這4組條件對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量保持為20μL。通過(guò)所得圖形、數(shù)據(jù)得出最佳分離條件。</p>&l

12、t;p><b>　　2.3 樣品的分離</b></p><p>　　確定最佳條件后，將液相柱(c18柱)換為c18半制備柱，將流動(dòng)相調(diào)整為最佳流動(dòng)相比例，待設(shè)備各種基本條件穩(wěn)定后，進(jìn)行進(jìn)樣。加大進(jìn)樣量到150μL。當(dāng)計(jì)算機(jī)出現(xiàn)2α-甲基化雜質(zhì)的峰時(shí)，將出液管的液體接出液體A，并保留。</p><p><b>　　3. 產(chǎn)物的處理</b>&l

13、t;/p><p>　　3.1 液體A的處理</p><p>　　將所得到的液體A進(jìn)行重結(jié)晶，從而得到固體粉末A。取少量粉末A溶于色譜純甲醇，并用液相柱(C18柱)進(jìn)行分析，檢測(cè)其純度。</p><p>　　3.2 目標(biāo)產(chǎn)物的分析</p><p>　　通過(guò)紫外、紅外核磁和質(zhì)樸對(duì)所獲得產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)及性質(zhì)鑒定。</p><p>

14、<b>　　中外文參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　王志祥莫芬珠,余國(guó)瓊. 制備型液相色譜分離技術(shù)進(jìn)展[J].化工時(shí)刊,1997,11(5):12-17.</p><p>　　王志祥,何志敏,余國(guó)琮. 制備型高效液相色譜中的質(zhì)量超載[J].高?；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào),1997,11 (1):83-87.</p><p>　　傅若農(nóng),顧峻嶺. 近代色譜

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17、/p><p>　　魏莉,張焜,方巖雄,等. 制備型高效液相色譜技術(shù)的研究進(jìn)展[J].廣東化工，2005,11：5-7.</p><p>　　S Provera, L Rovatti, L Turco,et cl. A multi-technique approach using LC–NMR, LC–MS, semi-preparative HPLC,HR–NMR and HR–MS for

18、the isolation and characterization of low-level unknown impurities in GW876008, a novel corticotropin-release factor 1 antagonist[J]，Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2010,53:517-525.</p><p>　　J L Mazze

19、i, LA Avila. Chromatographic models as tools for scale-up of isolation of natural products by semi-preparative HPLC[J].liquid chromatography&related technologies ， 2003，26（2）：177-193.</p><p>　　研究的整體方案與工作

20、進(jìn)度安排（內(nèi)容、步驟、時(shí)間）</p><p>　　2010.12.1-2010.12.15 查閱文獻(xiàn)，確定可行的實(shí)驗(yàn)方案</p><p>　　2010.12.16-2011.1.1 文獻(xiàn)綜述，開(kāi)題報(bào)告，外文翻譯的書寫，修改</p><p>　　2010.12.16-2011.2.5 實(shí)驗(yàn)方案的實(shí)施階段，包括實(shí)驗(yàn)優(yōu)化等</p><p

21、>　　2011.1.5-2011.2.10 書寫畢業(yè)論文，并上交完整初稿</p><p>　　2011.2.10-2011.3.1 畢業(yè)論文第一次修改，補(bǔ)做部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)</p><p>　　2011.3.5-2011.4.10 畢業(yè)論文第二次修改</p><p>　　2011.4.11-2011.4.15 畢業(yè)論文定稿，并完成網(wǎng)上提交&

22、lt;/p><p>　　2011.4.9-2011.5.7 答辯ppt的制作</p><p>　　2011.5.9-2011.5.16 論文答辯</p><p>　　六、研究的主要特點(diǎn)及創(chuàng)新點(diǎn)</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用高效液相色譜法，由于其操作條件溫和、選擇性高、批處理量較大和操作自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，提高了工作效率，能夠準(zhǔn)確對(duì)甲地孕酮