枸櫞酸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性及耐藥基因研究.pdf

1、目的： 了解川東北地區(qū)臨床分離枸櫞酸桿菌的耐藥情況，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。篩選產(chǎn)ESBLs菌株并進(jìn)行基因分型，了解其分子流行病學(xué)特征；進(jìn)一步研究CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的分子結(jié)構(gòu)特征。 方法： 1.用瓊脂二倍稀釋法檢測(cè)β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)24株枸櫞酸桿菌臨床分離株的MIC，紙片法篩選產(chǎn)ESBLs菌株；提取β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行酶活性測(cè)定。 2.設(shè)計(jì)針對(duì)最常見的三種類型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶blaTEM、b

2、laSHV和blaCTX-M基因的三對(duì)引物，對(duì)篩選出的12株產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株進(jìn)行耐藥基因的PCR擴(kuò)增檢測(cè)。 3.采用重疊延伸PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)，對(duì)CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶Ser240(絲氨酸)AGC進(jìn)行定點(diǎn)突變，分析突變前后酶活性的變化。 結(jié)果： 1.15種抗菌藥物的MIC檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，24株枸櫞酸桿菌對(duì)AMP、CEF兩種抗菌藥物的耐藥率最高(100％)，對(duì)其他藥物的耐藥率由高到低依次是FAM、CF

3、P、CFZ、PIP、CTX、FEP、SAM、CAZ、CAZ/SB、CRO、TZP、FD(87.5％-4.17％)，對(duì)IMI/完全敏感。24株耐藥菌中篩選到產(chǎn)ESBLs菌株12株。 2.PCR擴(kuò)增檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：8株耐藥菌株為產(chǎn)CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株；3株耐藥菌為產(chǎn)TEM型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株；2株耐藥菌為產(chǎn)SHV型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株。1株菌株同時(shí)產(chǎn)生TEM和CTX-M兩種酶。余12株菌株未檢測(cè)出上述三種酶。