綠原酸納米硒的制備及其抗氧化性的研究-食品質(zhì)量安全畢業(yè)論文

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　綠原酸納米硒的制備及其抗氧化性的研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 食品質(zhì)量與

2、安全 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　摘要</b></p&

3、gt;<p>　　綠原酸具有較好抗氧化，但其水溶性及穩(wěn)定性較差。為了解決這一問題，本試驗(yàn)采用綠原酸直接還原制備綠原酸納米硒（CGA@SeNPs）。選用熒光光譜法、紫外分光光譜法及傅里葉紅外光譜法對(duì)所制得的CGA@SeNPs進(jìn)行表征。并進(jìn)一步通過對(duì)CGA@SeNPs對(duì)羥自由基、超氧陰離子、ABTS+清除能力及還原力測(cè)定，評(píng)估CGA@SeNPs抗氧化能力。結(jié)果顯示，與CGA相比，CGA@SeNPs的紫外吸收峰，及傅里葉紅外光譜

4、當(dāng)中的-OH特征峰均出現(xiàn)位移，說明已成功制備CGA@SeNPs。熒光光譜顯示所制備的CGA@SeNPs具有熒光性?？寡趸囼?yàn)顯示CGA@SeNPs清除自由基及還原力均優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組VC及CGA。本試驗(yàn)結(jié)果表明CGA@SeNPs是一種高效的、穩(wěn)定且?guī)в袩晒馓匦缘男滦涂寡趸牧?，這為納米材料做為抗氧化劑的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：綠原酸；納米硒；制備；抗氧化</p><

5、p><b>　　Abstract</b></p><p>　　Chlorogenic acid has good oxidation resistance, but its water solubility and stability is poor. In order to solve this problem, chlorogenic acid nano selenium (CGA

6、@SeNPs) was prepared by direct reduction of chlorogenic acid. The prepared CGA@SeNPs were characterized by fluorescence spectroscopy, ultraviolet spectrophotometry and Fourier transform infrared spectroscopy. The antioxi

7、dant capacity of CGA@SeNPs was further evaluated by the determination of hydroxyl radical, superoxide anion, ABTS+ sc</p><p>　　Key words: chlorogenic acid; selenium nanoparticles; preparation; antioxidant<

8、;/p><p><b>　　前言</b></p><p>　　綠原酸（chlorogenic acid， CGA）分子式：C16H18O9，又稱咖啡鞣酸，是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，具有較多的生物活性，如抗病毒、抗菌、降血壓等 [1]。由于它含有一定量的R-OH基，能形成具有抗氧化作用的氫自由基，以消除羥基自由基和超氧陰離子等自由基的活性，從而保護(hù)組織免受氧化作用的損害[

9、2]。然而，綠原酸本身不穩(wěn)定，難溶于水，易溶于乙醇及丙酮等極性有機(jī)溶劑，且它的分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚3個(gè)不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，如下圖所示。這也導(dǎo)致了綠原酸的生物利用度低、穩(wěn)定性差。因此，綠原酸在人體中的使用受到很大程度的限制。</p><p>　　納米科學(xué)技術(shù)的到來，給人類認(rèn)識(shí)自然和改造自然開辟了新的窗口。納米材料是指在三維空間中至少有一維處于納米尺度范圍(1-100nm)，或由它們作為基本單元構(gòu)成的材料。納

10、米材料具有量子尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)[3]，因此在光學(xué)、電學(xué)、熱學(xué)、磁學(xué)等多方面表現(xiàn)出大塊材料所不能比擬的優(yōu)越性，在分析檢測(cè)、生物傳感、藥物傳遞、生物醫(yī)學(xué)等眾多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。因此，研究如何利用納米材料實(shí)現(xiàn)對(duì)綠原酸的負(fù)載和傳遞，促進(jìn)綠原酸發(fā)揮藥效，具有十分重要的意義。硒是動(dòng)物體必不可少的微量元素之一，化學(xué)符號(hào)是Se，一種非金屬。硒有提高免疫力、預(yù)防癌癥、抗氧化、拮抗有害重金屬、調(diào)節(jié)維生素吸收與利用等作用[4

11、]。但是硒的營(yíng)養(yǎng)劑量和可耐受的最高攝入量之間的范圍很窄，容易引起硒中毒[5]。納米硒不僅有很高的生物利用率和生物活性，而且毒性很低，是目前被發(fā)現(xiàn)的毒性最低的硒形式[5]。</p><p>　　本試驗(yàn)運(yùn)用納米技術(shù)將不穩(wěn)定的利用價(jià)值高的綠原酸修飾在低毒、高生物活性的納米硒上，既可以克服綠原酸不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，又能克服無機(jī)硒和有機(jī)硒毒性大這一缺點(diǎn)。隨后用熒光光譜法、紫外分光光度法及傅里葉紅外光譜法對(duì)CGA@SeNPs進(jìn)行表

12、征，試驗(yàn)結(jié)果說明我們獲得了穩(wěn)定的帶有熒光特性的CGA修飾的納米硒材料。由于綠原酸和硒均具有抗氧化的特點(diǎn)，我們對(duì)所制備的CGA@SeNPs的抗氧化性進(jìn)行研究，確定我們所合成的CGA@SeNPs抗氧化能力與CGA對(duì)比有所提高，這說明綠原酸納米硒有望成為一種高效的、穩(wěn)定的新型抗氧化材料，為納米材料做為抗氧化劑的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></

13、p><p>　　1.1 材料與試劑</p><p>　　亞硒酸鈉 山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司</p><p>　　綠原酸（CGA，純度為98%） 上海源葉生物科技有限公司</p><p>　　2 ,2-聯(lián)氮-二(3-乙基

14、-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽（ABTS+） 上海源葉生物科技有限公司</p><p>　　維生素C 上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司 </p><p>　　鄰苯三酚

15、 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　鹽酸 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　磷酸二氫鈉 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　無水乙醇

16、 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　雙氧水 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　過硫酸鉀 天津市大茂化學(xué)試劑廠</p><p>　　綠礬

17、 天津永大化學(xué)試劑開發(fā)中心</p><p>　　水楊酸 天津永大化學(xué)試劑開發(fā)中心</p><p>　　磷酸氫二鈉 天津永大化學(xué)試劑開發(fā)中心&

18、lt;/p><p>　　Tris-HCl 北京索萊寶科技有限公司</p><p>　　三氯乙酸 天津市福晨化學(xué)試劑廠</p><p>　　鐵氰化鉀

19、 天津市福晨化學(xué)試劑廠</p><p>　　三氯化鐵 西隴化工股份有限公司。</p><p>　　1.2 儀器與設(shè)備</p><p>　　超純水機(jī) 廈門精藝興業(yè)科技有限公司</p&g

20、t;<p>　　JD1000-2電子天平 沈陽(yáng)龍騰電子有限公司</p><p>　　GPX-9248干燥箱/培養(yǎng)箱（兩用） 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司</p><p>　　HH-數(shù)顯恒溫?cái)嚢柩h(huán)水箱 上海圣科儀器設(shè)備有限公司</p>&l

21、t;p>　　CL-3型恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司</p><p>　　UV-5200PC紫外可見分光光度計(jì) 上海美析儀器有限公司</p><p>　　970CRT熒光分光光度計(jì) 上海棱光技術(shù)有限公司</p><p>　　YP

22、-2壓片機(jī) 上海山岳科學(xué)儀器有限公司</p><p>　　IS5傅里葉紅外光譜儀 上海力晶科學(xué)儀器有限公司</p><p>　　TGL-16GB臺(tái)式離心機(jī) 上海書培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司</p><p>　　

23、TDL-5-A低速大容量離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠</p><p>　　SB-3200DTDN超聲波清洗機(jī) 寧波新藝生物科技服份有限公司</p><p>　　BDC-215KS電冰箱 青島海爾股份有限公司</p><p><b&

24、gt;　　2 試驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.1 綠原酸納米硒的制備</p><p>　　有研究表明，CGA溶解在50%的乙醇中并在4℃下保存最穩(wěn)定[7]。因此，我們精密稱取一定量的純度為98%的CGA、亞硒酸鈉，將綠原酸溶于50%的乙醇中，亞硒酸鈉溶于超純水中，將配制的25 mM綠原酸與0.1 M亞硒酸鈉按一定的比例在450 r/min轉(zhuǎn)速及室溫下攪拌在一起直至

25、溶液顏色由無色變?yōu)榇u紅色后停止攪拌，離心洗滌之后，重新溶解在50% 醇溶液中，4℃下過夜保存[5-6]。這種方法使得CGA修飾在納米硒材料上，制得均一穩(wěn)定的CGA@SeNPs溶液。</p><p>　　2.2 綠原酸納米硒的表征</p><p>　　2.2.1 紫外分光光度法 </p><p>　　制后的CGA@SeNPs在5000 r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行離心

26、，棄上清液，所得的沉淀即為CGA@SeNPs，再用50% 乙醇溶解成樣液。采用紫外可見分光光度法在200-600 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)樣液進(jìn)行波譜掃描[8]，以50%乙醇做基準(zhǔn)線校正液，將CGA醇溶液與CGA@SeNPs樣液的紫外光譜圖進(jìn)行對(duì)比。</p><p>　　2.2.2 傅里葉紅外光譜分析法</p><p>　　配制后的CGA@SeNPs在5000 r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行離心，棄上

27、清液，所得的沉淀即為CGA@SeNPs。將所得沉淀的離心管用保鮮膜包裹后放入恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥24h，用溴化鉀壓片后，用紅外光譜儀對(duì)其進(jìn)行紅外分析。在400-4000 cm-1范圍內(nèi)分別對(duì)干燥后的CGA@SeNPs和CGA進(jìn)行紅外波譜掃描，記錄其紅外光譜[9]。</p><p>　　2.2.3 熒光光譜法</p><p>　　配制后的CGA@SeNPs在5000 r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行

28、離心，棄上清液，所得的沉淀即為CGA@SeNPs。再用50%乙醇溶解所得沉淀制成樣品溶液。以最大激發(fā)波長(zhǎng)λex=350nm激發(fā), 在380-600 nm之間檢測(cè)最大發(fā)射波長(zhǎng)λem處的熒光強(qiáng)度值, 激發(fā)和發(fā)射的狹縫寬度均設(shè)定為10 nm[10-11]。</p><p>　　2.3 綠原酸納米硒抗氧化能力測(cè)定</p><p>　　2.3.1 還原力的測(cè)定</p><p&

29、gt;　　分別取20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的CGA@SeNPs溶液1 mL樣品溶液于試管中，加入0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液1.25 mL (pH = 6.6)和1%的鐵氰化鉀溶液1.25 mL，混勻后于50 ℃恒溫水浴鍋中水浴加熱20 min后，快速冷卻，再加入1.0 mL 10% 三氯乙酸，以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液0.5 mL，加入0.1

30、% 的三氯化鐵溶液0.25 mL，再加1.75 mL蒸餾水，充分混勻后，在700 nm處測(cè)定其吸光值A(chǔ)i，空白對(duì)照以1.0 mL蒸餾水代替樣液測(cè)吸光度A0[13]。以Vc及CGA為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行CGA、CGA@SeNPs與Vc的還原力大小對(duì)比。</p><p>　　2.3.2 清除羥自由基能力的測(cè)定</p><p>　　分別取20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μ

31、g/mL、100 μg/mL的CGA@SeNPs溶液1.0 mL樣品溶液于試管中，依次加入1.0 mL 6 mmol/L硫酸亞鐵、1.0 mL 6 mmol/L雙氧水，混勻后靜置10 min，再加入1.0 mL 6 mmol/L水楊酸，混勻后靜置30 min，于510 nm處測(cè)吸光度Ai。以1.0 mL蒸餾水代替水楊酸測(cè)吸光度Aj，空白對(duì)照以1.0 mL蒸餾水代替樣液測(cè)吸光度A0[11-13]。以Vc及CGA為陽(yáng)性對(duì)照，計(jì)算羥自由基的清

32、除率E：</p><p>　　E =（A0-Ai+Aj）/ A0</p><p>　　2.3.3 清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定</p><p>　　此試驗(yàn)是利用鄰苯三酚的自氧化反應(yīng)測(cè)定CGA對(duì)其產(chǎn)生的超氧陰離子的清除作用，在堿性的條件下，鄰苯三酚發(fā)生自氧化反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，我們通過加入樣品溶液阻止中間產(chǎn)物的積累，吸光度降低，以Vc作為陽(yáng)性對(duì)照，研究所制得的CG

33、A@SeNPs的清除超氧陰離子能力是否提高。取pH = 8.2，2.25mL，50 mmol/L的Tris-HCl緩沖液于試管中，加入1.0 mL蒸餾水，于25℃水浴加熱20 min，再分別取20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的CGA@SeNPs溶液1 mL于試管中，再加入25 mmol/L的鄰苯三酚0.25 mL混勻，在25℃水浴中反應(yīng)6 min，立即滴加0.5 mL 10 mm

34、ol/L的鹽酸終止反應(yīng)，在320 nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)i，以1.0 mL蒸餾水代替鄰苯三酚測(cè)吸光度Aj ，以1.0 mL蒸餾水代替CGA@SeNPs溶液測(cè)吸光度A0[11-14]。以Vc及CGA為陽(yáng)性對(duì)照，計(jì)算超氧陰離子自由基的清除率E。</p><p>　　E =（A0-Ai+Aj）/ A0</p><p>　　2.3.4 清除ABTS+自由基能力的測(cè)定</p><p

35、>　　精密稱取4.00 mg ABTS+粉末，然后加入新鮮配制的1.0 mg/mL的過硫酸鉀溶液0.8 mL，密封后避光靜置反應(yīng)16 h，定量轉(zhuǎn)移到25 mL的容量瓶中，再加入3.2 mL蒸餾水，用無水乙醇定容，放置10 h后使用。分別取20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的0.25mL CGA@SeNPs溶液于試管中，用80％乙醇補(bǔ)至1.0 mL，再加入1.0 mL ABTS

36、+工作液，搖勻，避光反應(yīng)6 min，在734 nm下測(cè)吸光值A(chǔ)i,以80％乙醇代替樣品溶液作為空白對(duì)照，測(cè)吸光度A0[15]。以Vc及CGA為陽(yáng)性對(duì)照，計(jì)算樣品溶液對(duì)ABTS+自由基清除率E。</p><p>　　E = （A0-Ai）/ A0</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 綠原酸納米硒穩(wěn)定

37、性分析</p><p>　　圖1 綠原酸納米硒穩(wěn)定性分析圖</p><p>　　制備后的CGA@SeNPs 4℃保存1到14天如圖1所示，圖中左邊均為CGA醇溶液，右邊是離心洗滌之后，重新分散在醇溶液中CGA@SeNPs溶液，我們可以看出CGA@SeNPs為均一穩(wěn)定的磚紅色溶膠狀，通過兩周的4℃冷藏保存，CGA@SeNPs溶膠狀態(tài)幾乎沒有變化，說明CGA@SeNPs的穩(wěn)定性良好。<

38、/p><p>　　3.2 綠原酸納米硒的表征</p><p>　　3.2.1 CGA@SeNPs的紫外光譜分析</p><p>　　從CGA與CGA@SeNPs紫外光譜如圖2所示，CGA屬于酚類物質(zhì)，含有苯環(huán)、雙鍵、羰基等不飽和結(jié)構(gòu)，其329 nm 有紫外吸收峰[8]。制備出的CGA@SeNPs的吸收峰有些微的偏移，CGA@SeNPs的最高峰由CGA醇溶液337 n

39、m移至334 nm處，藍(lán)移了3nm。CGA修飾在納米硒上使得吸收峰的位置發(fā)生一定的偏移，說明所制得的納米硒表面修飾劑為綠原酸。</p><p>　　圖2 CGA與CGA@SeNPs紫外光譜圖</p><p>　　3.2.2 紅外光譜下的CGA@SeNPs</p><p>　　CGA具有酚羥基、苯環(huán)、羰基的特征吸收峰。從CGAs與CGA@SeNPs紅外光譜如圖3所

40、示，CGA的羥基的峰在3353.99 cm-1處，制成的CGA@SeNPs的羥基的峰移至3419.00 cm-1處，合成后羥基的峰發(fā)生了紅移，說明羥基參與了合成，CGA修飾到了納米硒表面。</p><p>　　圖3 CGA與CGA@SeNPs紅外光譜圖</p><p>　　3.2.3 綠原酸納米硒熒光光譜分析</p><p>　　從CGA與CGA@SeNPs的熒

41、光光譜如圖4所示，CGA@SeNPs的激發(fā)峰由CGA醇溶液的442.9 nm移至437.5 nm處，藍(lán)移了5.4 nm。證明CGA被修飾到了納米硒表面，制得了帶有熒光特性的納米硒材料。</p><p>　　圖4 CGA與CGA@SeNPs的熒光光譜圖</p><p>　　3.3 綠原酸納米硒抗氧化能力的測(cè)定</p><p>　　3.3.1 綠原酸納米硒還原力的

42、測(cè)定</p><p>　　根據(jù)CGA@SeNPs、CGA與Vc的還原力如圖5所示，還原力測(cè)試CGA@SeNPs、CGA和Vc的吸光值都隨著濃度的增加而增大，說明在0 μg/mL-100 μg/mL，隨著樣品溶液濃度增加，其還原能力不斷增強(qiáng)，并有良好的線性關(guān)系，在100 μg/mL處的還原力CGA@SeNPs為1.304，Vc為0.704，CGA為0.468。CGA@SeNPs的還原力最強(qiáng)，其次是Vc，最后是CGA

43、。說明將綠原酸修飾在納米硒上之后，其還原能力得到了提高。</p><p>　　圖5 CGA@SeNPs、CGA和Vc還原力圖</p><p>　　3.3.2 綠原酸納米硒清除羥自由基的能力</p><p>　　CGA@SeNPs、CGA與Vc清除羥自由基能力如圖6所示，在0 μg/mL-100 μg/mL，隨著樣品溶液濃度增加，CGA@SeNPs清除羥自由基的能

44、力不斷增強(qiáng)，在100 μg/mL處羥自由基的清除率CGA@SeNPs為71.0%，CGA為67.0%，Vc為65.9%。CGA@SeNPs的還原力最強(qiáng)，其次是CGA，最后是Vc。說明制備的CGA@SeNPs的羥自由基的清除能力得到了提高。</p><p>　　圖6 CGA@SeNPs、CGA和Vc清除羥自由基能力圖</p><p>　　3.3.3 綠原酸納米硒清除超氧陰離子的能力<

45、;/p><p>　　CGA@SeNPs、CGA與Vc清除超氧陰離子能力如圖7所示，CGA@SeNPs清除超氧陰離子的能力最強(qiáng)，其次是Vc，最后是CGA。但是CGA@SeNPs在40 μg/mL后的趨勢(shì)逐漸平緩，Vc在60 μg/mL后趨于平緩，并在80-100 μg/mL時(shí)幾乎相等，在100 μg/mL處超氧陰離子自由基的清除率CGA@SeNPs為98.5%，Vc為98.0%，CGA為79.9%。說明通過將CGA修飾

46、在納米硒表面的手段提高了CGA清除超氧陰離子的能力，但是到達(dá)一定的濃度后其清除率不會(huì)再增加了。</p><p>　　圖7 CGA@SeNPs、CGA和Vc清除超氧陰離子能力圖</p><p>　　3.3.4 綠原酸納米硒清除ABTS+自由基的能力</p><p>　　CGA@SeNPs、CGA與Vc清除ABTS+能力如圖8所示，表明所有樣品對(duì)ABTS+自由基的清

47、除能力都隨濃度的增加而增強(qiáng)，其中CGA@SeNPs清除ABTS+自由基能力最強(qiáng)，其次是Vc，最后是CGA，但是綠原酸納米硒在60 μg/mL后的趨勢(shì)逐漸平緩，Vc在80 μg/mL后趨于平緩，在100 μg/mL處ABTS+自由基的清除率CGA@SeNPs為96.0%，CGA為66.6%，Vc為96.0%。。說明將CGA修飾在納米硒上之后，其清除ABTS+自由基能力得到了提高,雖然能力逐漸增加，但是到達(dá)一定濃度后趨勢(shì)逐漸平緩。</

48、p><p>　　圖8 CGA@SeNPs、CGA和Vc清除ABTS+自由基能力圖</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　通過制備出的CGA@SeNPs樣品溶液顏色的變化觀察以及運(yùn)用紫外分光光度法、傅里葉紅外光譜法與熒光光譜法對(duì)CGA@SeNPs進(jìn)行表征，各個(gè)特征峰的偏移說明我們成功的制備出了CGA@SeNPs。CGA

49、修飾在納米硒的表面，使得所制備的CGA@SeNPs在水中具有良好的穩(wěn)定的分散體系?？寡趸缘脑囼?yàn)表明CGA修飾后的納米硒對(duì)于清除羥自由基、超氧陰離子、ABTS+的能力以及還原力都有顯著的提高，CGA@SeNPs具有良好的抗氧化效果。這種方法的操作過程簡(jiǎn)便、所選用的試劑無毒、反應(yīng)條件溫和，所制備的 CGA修飾納米硒作為新型抗氧化劑具有良好的應(yīng)用前景。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b>

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54、t;/p><p>　　[9] 關(guān)炳峰. 金銀花中綠原酸類物質(zhì)的提取、抗氧化及抑菌特性研究[D]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.</p><p>　　[10] 米培培，張麗霞，王日為，等. 對(duì)-香豆酸、咖啡酸和綠原酸熒光特性的研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，40(03)：365-370.</p><p>　　[11] 李滿秀，張瑤，楊淑英. 綠原酸的直

55、接熒光分析法及其抗氧化性研究[J]. 分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(02)：203-206.</p><p>　　[12] 耿升，馬宇祥，莫海珍，等. 綠原酸與卵磷脂復(fù)合物的理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究[J]. 現(xiàn)代食品科技，2015，31(05)：124-129.</p><p>　　[13] 李粉玲，林瑤. 蕉芋多糖抗氧化性及還原能力的研究[J]. 韓山師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，37(06

56、)：29-33.</p><p>　　[14] 關(guān)炳峰，譚軍，周志娣. 金銀花提取物的抗氧化作用與其綠原酸含量的相關(guān)性研究[J]. 食品工業(yè)科技，2007，28(10)：127-129.</p><p>　　[15] 向燦輝，王文君，張洛，等. 杜仲葉綠原酸的純化及ABTS+自由基清除活性研究[J]. 廣東化工，2013，40(22)：31-32+44.</p><p&

57、gt;<b>　　致謝</b></p><p>　　歲月如梭，轉(zhuǎn)眼大學(xué)四年的生活就要結(jié)束。這四年經(jīng)歷了不少事情，有快樂的、有悲傷的，讓我在思想、生活、學(xué)習(xí)上都得到了很大的成長(zhǎng)，但是現(xiàn)在這些終將變成最珍貴的回憶。離別在際，有喜悅之情，但更多的感激與不舍，感謝同學(xué)和老師在學(xué)習(xí)和生活中對(duì)我的幫助。</p><p>　　在我的畢業(yè)設(shè)計(jì)的試驗(yàn)與撰寫過程中，我的老師、朋友和同學(xué)們

58、給予了我很大的支持和鼓勵(lì)，其中特別感謝我的導(dǎo)師楊老師！從論文的題目選擇、研究方向、擬定提綱、修改初稿一直到最后的定稿，楊老師都付出了諸多的心血，為我提出了很多珍貴的意見，在我試驗(yàn)出現(xiàn)問題的時(shí)候鼓勵(lì)我并與我一起完善實(shí)驗(yàn)步驟及修改方案，讓我的論文得以最終完稿。楊老師的嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真的態(tài)度與和藹可親的指導(dǎo)，讓我從中學(xué)到了很多，在此我想對(duì)楊老師表示我深深的謝意！ </p><p>　　其次感謝我的家人，在我這大學(xué)四年給了我很多