菊酯類農藥分子印跡固相萃取柱的制備及條件優(yōu)化【畢業(yè)設計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設計</b></p><p><b>　　（20_ _屆）</b></p><p>　　菊酯類農藥分子印跡固相萃取柱的制備及條件優(yōu)化 </p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 生物工程 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　目 錄

3、 </p><p><b>　　中英文摘要</b></p><p>　　1 引言................................................................................................................

4、.........................................................1</p><p>　　2 實驗部分.....................................................................................................................................

5、............................2</p><p>　　2.1 試劑與儀器..................................................................................................................................................2</p>

6、<p>　　2.1.1 實驗試劑...........................................................................................................................................2</p><p>　　2.1.2 實驗儀器..........................

7、.................................................................................................................2</p><p>　　2.2 實驗方法...........................................................................

8、...........................................................................2</p><p>　　2.2.1 分子印跡聚合物的制備.........................................................................................................

9、..........2</p><p>　　2.2.2 分子印跡固相萃取柱的制備...........................................................................................................2</p><p>　　2.3 吸附容量的測定..........................

10、................................................................................................................2</p><p>　　2.4 分子印跡固相萃取條件......................................................................

11、........................................................2</p><p>　　2.5 氣相色譜條件..................................................................................................................................

12、............2</p><p>　　3 結果與討論.............................................................................................................................................................3</p><p&g

13、t;　　3.1 分子印跡聚合物的吸附容量及選擇性......................................................................................................3</p><p>　　3.2 固相萃取條件的優(yōu)化.........................................................

14、.........................................................................5</p><p>　　4 小結.......................................................................................................................

15、..................................................6</p><p>　　5 展望..............................................................................................................................................

16、...........................6</p><p>　　致謝.......................................................................................................................................................................

17、......7</p><p>　　參考文獻.....................................................................................................................................................................8</p><p>

18、;　　摘要：菊酯類農藥的廣泛使用，導致食品中該類農藥殘留，對人類健康造成巨大威脅。本論文首先對分別以氯氰菊酯和溴氰菊酯為模板分子制備獲得的分子印跡聚合物進行吸附特性研究，結果表明以氯氰菊酯為模板分子獲得的分子印跡聚合物（C-MIPs）的Scatchard曲線和以溴氰菊酯為模板分子獲得的分子印跡聚合物（X-MIPs）的Scatchard曲線都為兩條斜率不同的直線，并且具有較好的線性相關性，表明獲得的分子印跡聚合物具有兩類不同的結合位點；進

19、一步將獲得的分子印跡聚合物作為固相萃取的填料，結果表明，以C-MIPs作為填料，并用濃度為20%的乙腈溶液淋洗進行固相萃取時菊酯類農藥具有最高的回收率。</p><p>　　關鍵詞：分子印跡聚合物；結合位點；氣相色譜；固相萃取</p><p>　　Abstract: Pyrethroid pesticides have been widely used at present,while o

20、n the other hand ,its residue has also attracted much attention.The main purpose of this study is to prepare the molecularly imprinted polymer for pyrethroid insecticides and evaluate the characteristics of the obtained

21、MIPs. The results show that MIPs have higher adsorption capacity than thosd of NIPs. The functional groups and spatial structure are obvious differences in MIPs and NIPs.The scatchard curve of C-MIPs and X-MI</p>

22、<p><b>　　1引言</b></p><p>　　菊酯類農藥是繼有機氯、有機磷和氨基甲酸酯之后具有生物活性優(yōu)異、環(huán)境相容性較好的一類廣譜性殺蟲劑，包括甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯等。菊酯類農藥具有性質穩(wěn)定、使用濃度低、用藥量少、使用濃度低、毒性較低、藥效快等優(yōu)點，因此被廣泛使用。但是菊酯類農藥廣泛使用的同時也帶來了環(huán)境污染和食品安全等方面的問題[1-2]。

23、特別是近年來，隨著人們生活水平越來越高，對食品安全問題也越來越重視，故對農藥最高殘留限量的要求也越來越嚴格。聯(lián)合國食品法典委員會（FAO/WHO）對食品中的農藥殘留量作了十分嚴格的規(guī)定。因此，我們有必要建立一套準確、高效、快速的測定菊酯類農藥殘留的方法。</p><p>　　傳統(tǒng)的農藥殘留前處理技術如提取、凈化等，有索氏提取、液-液分配、薄層層析、柱層析等方法，但這些方法存在樣品需要量大、萃取時間長、有機或有毒溶

24、劑消耗量大等缺點[3]。目前國內外對菊酯類農藥的殘留分析方法有色譜法[4-6]、免疫分析法[7]、萃取法等。但是氣相色譜檢測和液相色譜檢測，都存在儀器比較昂貴等缺點，而且還不能進行現(xiàn)場在線檢測或跟蹤監(jiān)測；免疫分析法有特異性強、準確度和靈敏度高等優(yōu)點，但是它所需的儀器價格同樣比較昂貴，而且只能用于對單一化合物或者結構相似的化合物進行檢測[8]。萃取技術主要有超聲波萃?。║SE）、加速溶劑萃?。ˋSE）、液相微萃?。↙PME）等技術，具有速

25、度快、溶劑用量少、回收率高等優(yōu)點，而且容易實現(xiàn)自動化。凈化技術有凝膠滲透色譜（GPC）、固相微萃?。⊿PME）、固相萃取（SPE）等，它們具有效率高、速度快、對環(huán)境友好等特點。固相微萃取由Pawliszyn等推出，該方法簡單，提取和富集過程比較快，是一種被廣泛接受和應用的技術[9]。尤其是固相萃取具有有機溶劑用量少、回收率和富集倍數(shù)高、對環(huán)境友好、操作簡單方便、易于收集、能夠處理小體積樣品和容易實現(xiàn)自動化等諸多優(yōu)點，</p>

26、<p>　　固相萃?。⊿olid-Phase Extraction，簡稱SPE）是從20世紀70年代初發(fā)展起來發(fā)展起來一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術。固相萃取技術是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理，由液固萃取和柱液相色譜技術相結合發(fā)展而來。固相萃取一般包括五個步驟，包括選擇吸附柱、活化吸附柱、進樣、淋洗、洗脫。按照操作方式的不同，固相萃取可分為離線萃取和在線萃?。话凑账x吸附劑的不同，固相萃取可

27、分為正相、反相和離子交換固相萃取[11]。目前，SPE主要用來處理液體樣品，萃取、濃縮和凈化其中的半揮發(fā)性和不揮發(fā)性化合物，有時也可用于固體樣品，但是必須把固體樣品先處理成液體。1962年，Anton AH等人首次對該技術進行了研究，用吸附劑氧化鋁凈化樣品[11]。吸附劑是固相萃取中的關鍵環(huán)節(jié)，所選吸附劑的好壞直接關系到是否能夠實現(xiàn)萃取以及萃取率的高低，現(xiàn)在對新型吸附劑的研制非常熱門。 </p><p>　　分子

28、印跡技術（Molecular imprinting technique，MIT）是指為獲得在空間結構和結合位點上與某一分子（模板分子）完全匹配的聚合物的實驗制備技術[12]?！胺肿佑≯E”的概念最早可以追溯到Pauling提出的以抗原為模板合成抗體的設想，現(xiàn)代意義上的分子印跡概念則出現(xiàn)在20世紀70年代，其標志是Wulf和Mosbach等分別在共價和非共價型分子印跡聚合物研究方面開創(chuàng)性研究[13]。自20世紀70年代以來，分子印跡技術發(fā)展

29、非常迅猛，特別是1993年Mosbach等[14]在《Nature》上發(fā)表了有關茶堿分子印跡聚合物的報道后，分子印跡技術開始蓬勃發(fā)展，成為國內外研究的熱點[15]。</p><p>　　分子印跡聚合物（MIPs）是人工合成的聚合物，具有易于制備、成本低、穩(wěn)定性好、選擇性好、使用壽命長和應用范圍廣等優(yōu)點，因此，以分子印跡聚合物作為固相萃取的吸附劑可以提高萃取的選擇性和SPE用于痕量分析的準確性、降低檢測限。自從Se

30、llergren于1994年將MIPs用于戊脒的固相萃取[16]以后，基于MIPs的固相萃?。∕ISPE）技術已廣泛應用于色譜分離、膜分離、臨床藥物分析和固液萃取等領域，在分析傳感技術方面也有較大的發(fā)展。</p><p>　　MIPs制備的基本原理是，在適當?shù)娜軇┲?，經交?lián)劑作用，模板分子與一種或幾種功能單體形成含有模板分子的聚合物母體，然后通過物理或化學方法除去母體中的模板分子，最終得到分子印跡聚合物。總的來說

31、，分子印跡技術可視為是模板分子與功能單體相互作用聚合的過程[17]。根據模板分子與單體結合方式的不同，分子印跡技術可以分為非共價法、共價法和半共價法[18]。目前，MIPs制備方法的研究主要聚集在這兩方面，一是改善聚合物材料性能，這是進行大規(guī)模生產和應用所必須的；二是在水溶液體系中進行分子印跡，以這樣可以使水溶性分子尤其是生物大分子也可以進行分子印跡，擴大分子印跡技術的應用范圍。分子印跡聚合物使用較多的制備方法是傳統(tǒng)方法，其次是懸浮聚合

32、法、多步溶脹法、表面印跡法和原位聚合法等[19]。分子印跡聚合物的合成過程中，關鍵是要考慮選擇與印跡分子（模板分子）盡可能有特異結合的單體，然后選擇適當?shù)慕宦?lián)劑和溶劑[20]。 </p><p>　　本實驗對以溴氰菊酯或氯氰菊酯為模板分子制備獲得的MIPs為填料制成分子印跡固相萃取柱，并與以NIPs為填料制成的高效萃取柱進行比較，探討它們的吸附特征，測定它們的吸附容量。同時，通過在不同的填料和不同的淋洗條件下進行

33、固相萃取實驗，對它們的回收率進行比較后優(yōu)化固相萃取條件。</p><p><b>　　2實驗部分</b></p><p><b>　　2.1 試劑與儀器</b></p><p>　　2.1.1 實驗試劑</p><p>　　溴氰菊酯，氯氰菊酯，氟氯氰菊酯，氰戊菊酯，苯醚菊酯和聯(lián)苯菊酯；α-甲基丙烯酸

34、（MAA，德國Sigma-Aldrich公司）；乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA，美國Fluka公司）；2，2’-偶氮（2-異丁腈）（引發(fā)劑，上海中國醫(yī)藥集團總公司）；乙腈和甲醇（色譜純，美國Fisher Scientific公司）。所有其他試劑均為分析純。</p><p>　　2.1.2 實驗儀器</p><p>　　超聲波清洗儀（SK5200H），渦旋混合器（XW-80A）；HH-S型水

35、浴鍋（鞏義市予華儀器有限責任公司）；氮氣吹干儀（HGC-12A，上海）；DDHZ-300恒溫振蕩器（江蘇太倉市試驗設備廠）；電子天平（SHIMADZU，日本）；GC-2010型氣相色譜儀（日本島津）。</p><p><b>　　2.2 實驗方法</b></p><p>　　2.2.1 分子印跡聚合物的制備</p><p>　　MIPs通過本體

36、聚合法合成，溴氰菊酯或氯氰菊酯（1 mmol）和功能單體（MAA，4 mmol）溶解在乙腈（10.0 mL）中，然后加入交聯(lián)劑單體（EGDMA，20 mmol）和引發(fā)劑（AIBN, 90.0 mg）。超聲混勻，充入氮氣10 min，然后置于60 ℃水浴中24 h，聚合后，用研缽將聚合物研碎，過50 μm篩。進一步用丙酮沉降，除去過細的懸浮粉末，模板分子用甲醇/甲酸（9:1，v/v）洗至GC-ECD檢測不到模板分子。然后用甲醇去除殘留甲酸

37、。空白聚合物的制備除了沒有模板分子外，其余操作同上。</p><p>　　2.2.2 分子印跡固相萃取柱的制備</p><p>　　準確稱取30.0 mg的MIPs和NIPs，加入2.0 mL甲醇，濕法裝入3.0 mL固相萃取小柱，填料的頂端和底端分別裝有20 μm孔徑的聚四氟乙烯篩板，然后用5.0 mL甲醇預處理。 </p><p>　　2.3 吸附容量的測定&l

38、t;/p><p>　　分子印跡聚合物和非分子印跡聚合物的吸附容量通過多次實驗測得。在結合分析時，準確稱取15.0 mg聚合物顆粒加入到含有1.5 mL乙腈溶液的小瓶中，在菊酯類農藥為0.25到1000 mg L-1不同濃度下，溫度為25 ℃，溫育24 h。然后通過過濾法除去聚合物，在氮吹下蒸干，再用0.5 mL異辛烷/丙酮（9:1，v/v）重新溶解，用GC-ECD法進行分析。在每個濃度下重復進行三次，取平均值用于Sc

39、atchard分析。Scatchard方程為B/[RES] = (Bmax-B)/kD，kD為結合位點的解離常數(shù)，Bmax為最大表觀結合量，[RES]為平衡濃度。以B/[RES]對B作圖，根據斜率和截距計算得到kD和Bmax。</p><p>　　2.4 分子印跡固相萃取條件</p><p>　　分子印跡固相萃取柱的制備時取30.0 mg MIPs和NIPs，裝填入3.0 mL的固相萃取小

40、柱（Supelco，美國）。首先，在上樣前，固相萃取柱先后用10.0 mL乙腈和2.0 mL 20%的乙腈溶液進行預處理。然后，用3.0 mL乙腈/甲酸（9:1，v/v）進行洗脫。最后，洗脫組分用氮氣吹干，并用1.0 mL異辛烷/丙酮（9:1，v/v）重新溶解，通過0.22 µm尼龍過濾器過濾后供以后用GC–ECD法分析。 </p><p>　　2.5 氣相色譜條件</p><p&g

41、t;　　樣品用GC-ECD法進行分析，本實驗用GC-2010型氣相色譜儀（日本島津），SPB-5石英彈性毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；氮氣分別作為載氣和尾吹氣，流速為1.0 mL min-1；標準溶液和樣品提取液進樣體積為1 μL；進樣口溫度為240 ℃；柱溫為240 ℃，維持3 min，然后以5 ℃ min-1升至290 ℃，保持5 min；檢測器溫度為320 ℃。</p>&

42、lt;p><b>　　3結果與討論</b></p><p>　　3.1 分子印跡聚合物的吸附容量及選擇性</p><p>　　分子印跡聚合物是人工合成的含有分子識別位點的聚合物，在適當?shù)娜軇┫履芴禺愋缘淖R別結合模板分子和相關結構的化合物。我們可以選擇合適的模板合成分子印跡聚合物，并用其來識別與模板分子有類似核心結構的分析物。菊酯類農藥都有一個共同的化學結構環(huán)丙烷

43、羧酸，不同點在大小和側鏈的形狀，如圖1所示，為6種菊酯類農藥的化學結構。在這個實驗中，用氯氰菊酯和溴氰菊酯進行試驗來選擇合適的模板合成分子印跡聚合物，并且通過進一步的實驗對分子印跡聚合物的吸附特性進行研究。</p><p>　　圖1 6種菊酯類農藥的化學結構</p><p>　　圖2 擬除蟲菊酯類農藥分子印跡聚合物的吸附等溫線及Scatchard曲線分析</p><p

44、>　　A：以氯氰菊酯為模板合成的分子印跡聚合物的吸附等溫線（C-MIPs）；B：以溴氰菊酯為模板合成的分子印跡聚合物的吸附等溫線（X-MIPs）；C：C-MIPs的Scatchard曲線；D：X-MIPs的Scatchard曲線</p><p>　　如圖2所示：① 溴氰菊酯或氯氰菊酯為模板合成的MIPs對不同濃度的溴氰菊酯或氯氰菊酯的吸附容量呈非線性關系，而且吸附容量隨著體系中其濃度的的增大而增大，并且在高

45、濃度下吸附容量逐漸趨于飽和，這表明MIPs對溴氰菊酯或氯氰菊酯的結合位點是不等價的。在濃度相同的條件下，與NIPs相比，MIPs具有更大的吸附容量，表明MIPs和NIPs的功能基團排列與空間結構有著比較大差異，MIPs具有與模板分子互補的功能基團和空間結構，因此對模板分子有著更大的吸附能力；而對于NIPs而言其內部可能沒有選擇性的結合位點，主要依靠聚合物表面的非特異性吸附作用，無法對模板分子進行有效的識別，因此吸附量較小。② C-MIP

46、s的Scatchard曲線和X-MIPs的Scatchard曲線都是為兩條斜率不同的直線，并且具有較好的線性相關性，這表明在所研究的濃度范圍內MIPs存在著兩種不同類型的特異性結合位點。</p><p>　　表1 分子印跡聚合物的Scatchard方程分析結果</p><p>　　從表1可知，C-MIPs在高親和性位點的解離常數(shù)為33.89 μmol L-1，最大表觀結合量為7.30 μm

47、ol g-1；在低親和性位點的解離常數(shù)為666.66 μmol L-1，最大表觀結合量為32.66 μmol g-1。X-MIPs在高親和性位點的解離常數(shù)為15.55 μmol L-1，最大表觀結合量為3.19 μmol g-1；在低親和性位點的解離常數(shù)為416.66 μmol L-1，最大表觀結合量為17.95 μmol g-1。</p><p>　　3.2 固相萃取條件的優(yōu)化</p><p

48、>　　固相萃取過程一般包括上樣、淋洗、洗脫等過程。由于樣品基質復雜，在萃取過程中有許多干擾物質與分離物質一起被吸附，這樣就會對測定結果的準確度產生較大影響。所以必須使用適當?shù)娜軇滔噍腿∵^程進行淋洗，除去干擾物質，但不能洗脫分離物質。 </p><p>　　圖3 不同淋洗條件下MISPE和NISPE柱的菊酯類農藥的回收率</p><p>　　A：以正己烷作為淋洗溶液時6種菊酯類農藥

49、的回收率；B：X-MIPs為填料，在不同濃度的乙腈水溶液作為淋洗溶液時6種菊酯類農藥的回收率；C：C-MIPs為填料，在不同濃度的乙腈溶液作為淋洗溶液時6種菊酯類農藥的回收率；D：對照組</p><p>　　如圖3所示，在不同的淋洗條件下，固相萃取菊酯類農藥的回收率。圖3A為用正己烷作為淋洗溶液，以C-MIPs為填料時的菊酯類農藥回收率最高；以X-MIPs為填料時的菊酯類農藥回收率次之；以NIPs為填料時的菊酯類

50、農藥回收率最低。圖3B所示，以X-MIPs為填料進行固相萃取時，當用40%的乙腈溶液作為淋洗溶液時，菊酯類農藥的回收率最高。圖3C所示，以C-MIPs為填料進行固相萃取時，當用20%的乙腈溶液作為淋洗溶液時，菊酯類農藥的回收率最高。圖3D所示，以NIPs為填料進行固相萃取時，當用10%的乙腈溶液作為淋洗溶液時，菊酯類農藥的回收率最高?？芍?，乙腈溶液作為淋洗溶液的效果比正己烷好，以C-MIPs作為填料時回收率最高。</p>

51、<p><b>　　4小結</b></p><p>　　本實驗對采用本體聚合方式獲得的分子印跡聚合物作為填料制成分子印跡固相萃取柱進行萃取，并與NIPs為填料的固相萃取進行比較研究；進一步對固相萃取條件進行了優(yōu)化。結果表明：在相同濃度下，MIPs比NIPs有更大的吸附容量，MIPs更適合作為填料進行固相萃取。在MIPs中，又以C-MIPs作為固相萃取填料，并用濃度為20%的乙腈溶液

52、淋洗進行固相萃取時菊酯類農藥的回收率最高，可與GC-ECD儀器相結合，對復雜生物樣品中的菊酯類農藥進行檢測。</p><p><b>　　5展望</b></p><p>　　分子印跡聚合物極大地提高了固相萃取的選擇性，使樣品的前處理更加簡便。不過該技術也存在諸多的不足，如上樣溶劑對吸附能力的影響較大，在水溶液中的選擇性比較差，分子印跡萃取劑的種類有限等。對于分子印跡固

53、相萃取技術的發(fā)展前景，它的趨勢應在以下幾個方面：（1）研制新型的分子印跡固相萃取劑。（2）開發(fā)出更多更好的功能單體和交聯(lián)劑，采用不同的方法拓寬分子印跡固相萃取的應用領域。(3)將分子印跡固相萃取與其他分離檢測方法如毛細管電泳、免疫分析、生物傳感器等結合起來。（4）加強與其它樣品前處理技術如氣相色譜等相互融合。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p&g

54、t;　　[1]王丹紅,蔡春平,陳祥明,等.分光光度法檢測茶葉中含氰根菊酯類的農藥殘留[J].福建分析測試,2010,19(1):73-75.</p><p>　　[2]王英健.氣相色譜法測定土壤中菊酯類農藥殘留[J].環(huán)境監(jiān)測管理與技術,2010,22(2):55-57.</p><p>　　[3]孫成玲,汪付星,顏冬云,等.擬除蟲菊酯類農藥殘留檢測前處理技術研究進展[J].農藥,2010

55、,49(1):11-15.</p><p>　　[4]湯峰,岳永德,花日茂,等.板蘭根中三種擬除蟲菊酯殺蟲劑的殘留分析[J].農藥學學報,2001,3(1):69-72.</p><p>　　[5]孔祥虹,仇農學,李建華,等.毛細管氣相色譜法測定中藥材中多種擬除蟲菊醋農藥殘留量[J].分析實驗室,2005,25(4):89-92.</p><p>　　[6]高天兵,

56、張曙明,田金改.三七、白芍及西洋參中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的殘留量測定[J].藥物分析雜志,1999,19</p><p>　　(5):313-316.</p><p>　　[7]劉曙照.九十年代農藥殘留分析新技術[J].農藥,1998,37(6):11-13.</p><p>　　[8]王朝瑾,李彥磊,王文豪,等.菊酯類農藥殘留的快速測定[J].湖南農業(yè)科學

57、,2010,22(1):71-73.</p><p>　　[9]Gizelle Cristina Bedendo,Eduardo Carasek.Simultaneous liquid-liquid microextraction and polypropylene microporous</p><p>　　membrane solid-phase extraction of organ

58、ochlorine pesticides in water,tomato and strawberry samples[J].Journal of Chromatography A,2010,1217(1):7-13.</p><p>　　[10]蔡亞岐,牟世芬.分子印跡固相萃取及其應用[J].分析測試學報,2005,24(5):116-121.</p><p>　　[11]趙利劍,楊亞玲

59、,夏靜.固相萃取技術的研究[J].四川化工,2005,8(3):21-25.</p><p>　　[12]馬玉哲,李紅霞.分子印跡技術的應用進展[J].化工技術與開發(fā),2009,38(4):20-22.</p><p>　　[13]蔡亞岐,牟世芬.分子印跡固相萃取及其應用[J].分析測試學報,2005,24(5):116-121.</p><p>　　[14]Mos

60、bach K,Viatakis G,Muller R,et a1..Drug assay using antibody mimics made by molecular imprinting[J].Nature,1993,361:</p><p><b>　　645-647.</b></p><p>　　[15]李蓉,郝鶴,朱輝,等.分子印跡聚合物應用研究進展[J].

61、武警醫(yī)學院學報,2007,16(3):325-327.</p><p>　　[16]Sellergren B.Imprinted dispersion polymers:A new class of easily accessible affinity stationary phases[J].Journal of Chromatography A,1994,673(1):133-141.</p>

62、<p>　　[17]A.Beltran,P.A.G.Cormack,F.Borrull,et al..Synthetic approaches to parabens molecularly imprinted polymers and their</p><p>　　applications to the solid-phase extraction of river water samples[J]

63、.Analytica Chimica Acta,2010,677(1):72-78.</p><p>　　[18]Caro E,Marce R M,Borrull F,et a1..Application of molecularly imprinted polymers to solid-phase extraction of compounds from environmental and biologica

64、l samples[J].Trends in Analytical Chemistry,2006,25(2):143-154.</p><p>　　[19]孟范平,劉嬌.分子印跡聚合物及其在固相萃取中的應用[J].中國海洋大學報,2008,38(2):237-243.</p><p>　　[20]馬挺軍,賈昌喜.分子印跡技術在農藥殘留檢測應用的研究進展[J].農產品加工,2009,8(9)