奶牛熱應(yīng)激的營養(yǎng)和代謝調(diào)控及耐熱性分子標(biāo)記的初選.pdf

1、熱應(yīng)激對(duì)奶牛的生產(chǎn)性能和繁殖性能有極大的負(fù)面影響。本研究從營養(yǎng)和代謝調(diào)控兩方面探索緩解奶牛的熱應(yīng)激的途徑，同時(shí)利用RAPD技術(shù)篩選奶牛的耐熱性分子標(biāo)記。
　　 1.試驗(yàn)一飼喂高能飼料對(duì)熱應(yīng)激條件下奶牛的生產(chǎn)性能和生理生化指標(biāo)的影響及其機(jī)理的探究。選擇33頭處于熱應(yīng)激期泌乳中期的荷斯坦奶牛，隨機(jī)分為對(duì)照組和處理Ⅰ、Ⅱ。處理Ⅰ、Ⅱ飼喂不同的高能飼料，分別為烘烤大豆和油菜籽，對(duì)照組為常規(guī)飼料。結(jié)果表明：處理Ⅰ試驗(yàn)期的產(chǎn)奶量比對(duì)照組高3

2、.27％（P<0.05），處理Ⅰ、Ⅱ試驗(yàn)期產(chǎn)奶量比試驗(yàn)前分別提高了2.21％和7.31％，而對(duì)照組則略有下降；不同處理間的直腸溫度相近，但處理Ⅰ組呼吸頻率極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），兩處理組的心跳次數(shù)顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。與對(duì)照組相比，處理組Ⅰ和Ⅱ的過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）和K+的含量顯著提高（P<0.05），血清總蛋白（TP）、CT含量顯著降低（P<0.05）。處理組Ⅰ的血清尿素氮（BUN）含量顯著高于對(duì)

3、照組（P<0.05）；處理組Ⅱ的皮質(zhì)醇（Cor）顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。處理組Ⅰ和Ⅱ的T3、白細(xì)胞介素（IL-2）、免疫球蛋白（IgG）、超氧化物岐化酶（SOD）和胰島素（INS）的分泌量有增加的趨勢（P>0.05），而催乳激素（PRL）、肌酸激酶（CK）和Na+分泌量有下降的趨勢（P>0.05）。處理組Ⅰ的T4和乳酸脫氫酶（LDH）的含量有升高的趨勢（P>0.05），而處理組Ⅱ呈降低的趨勢（P>0.05）。
　　 2.

4、試驗(yàn)二添加復(fù)合添加劑對(duì)熱應(yīng)激條件下奶牛的生產(chǎn)性能和生理生化指標(biāo)的影響及其作用機(jī)理。選擇22頭處于泌乳中期的荷斯坦奶牛，隨機(jī)分為對(duì)照組和處理組。處理組添加復(fù)合添加劑，對(duì)照組為常規(guī)日糧。結(jié)果表明：使用復(fù)合添加劑飼料后，處理組試驗(yàn)期的產(chǎn)奶量比對(duì)照組提高1.52％（P<0.05），對(duì)照組試驗(yàn)期產(chǎn)奶量比試驗(yàn)前下降16.36％，而試驗(yàn)組提高了1.45％；使用復(fù)合添加劑除乳脂率有明顯的降低外（P<0.05），對(duì)其它乳成分基本沒有影響；與對(duì)照組比較，試

5、驗(yàn)組的直腸溫度顯著降低（P<0.05），呼吸頻率顯著升高（P<0.05）。與對(duì)照組比較，處理組的T3、Cor、INS、IL-2、TP、CK、SOD和LgG都有升高的趨勢（P>0.05），而T4和CT顯著升高（P<0.05）。處理組和對(duì)照組相比，PRL、LDH、MDA、K+和Na+的含量都有下降的趨勢（P>0.05）；而CAT顯著下降（P<0.05）。BUN的含量兩處理組間沒有明顯變化（P>0.05）。
　　 3.試驗(yàn)三用RAPD

6、技術(shù)篩選奶牛的耐熱性分子標(biāo)記。以日均產(chǎn)奶量為標(biāo)準(zhǔn)從處于熱應(yīng)激期的52頭奶牛中選出22頭奶牛（12頭為耐熱性優(yōu)良奶牛，10頭為非耐熱奶牛）為試驗(yàn)動(dòng)物，通過RAPD技術(shù)進(jìn)行耐熱分子標(biāo)記的篩選。研究不同酶和反應(yīng)循環(huán)數(shù)對(duì)RAPD反應(yīng)的影響，建立了一套適合本試驗(yàn)最佳的反應(yīng)體系。對(duì)170條S系列隨機(jī)引物進(jìn)行了PCR-RAPD擴(kuò)增反應(yīng)，具有多態(tài)性的引物26條，篩選出穩(wěn)定性好、帶型清晰的引物3條。結(jié)合奶牛的生理生化指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)有兩條引物S275和S201

7、1的擴(kuò)增效果與某些生理生化指標(biāo)存在顯著相關(guān)：S275和S2011的差異片段與產(chǎn)奶量（P<0.01）、T4（P<0.05）呈負(fù)相關(guān)，與乳脂率呈中度的正相關(guān)（P<0.05），其中S275的差異片段還與乳蛋白率（P<0.05）、CK（P<0.05）顯著正相關(guān)，與鉀離子含量呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），S2011的差異片段與鈉離子含量顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。對(duì)兩條引物特異性片段測序結(jié)果的BLAST分析發(fā)現(xiàn)，引物S2011特異性條帶在牛第4號(hào)

8、染色體上二肽基肽酶Ⅵ下游32Kb處；引物S275測序結(jié)果有兩個(gè)序列，其中序列Ⅰ在MHCⅠ類樣基因家族A1基因下游的0.7Kp，ULBP27上游和下游的1.6Kb等基因調(diào)控區(qū)附近均有分布，而序列Ⅱ位于牛的3號(hào)染色體上的NOL1/NOP2/Sun domain family，member4。通過BLAST結(jié)果可以初步推測引物S2011和S275可以作為篩選奶牛耐熱性狀的分子標(biāo)記。
　　 本研究通過添加烘烤大豆和油菜籽研究高能飼料對(duì)奶