小鼠PTA1-CD226分子的基因克隆及其表達(dá)、分布和功能研究.pdf

1、該博士論文是基于人PTA1分子研究的基礎(chǔ)之上,克隆了小鼠PTA1分子的基因,并進(jìn)行了其相應(yīng)的表達(dá)、分布、分子特性、以及初步的功能學(xué)研究.主要的研究結(jié)果有:利用人PTA1分子的氨基酸序列,從GenBank的EST數(shù)據(jù)庫中檢索出一段與人PTA1分子在氨基酸水平有51﹪的同源性的小鼠EST序列,并根據(jù)此EST序列設(shè)計(jì)特異性引物,采用RACE方法從BALB/c小鼠胸腺中克隆出小鼠PTA1分子的全長基因以及三個不同剪切體(異型).采用逆轉(zhuǎn)錄PCR

2、、原位雜交、以及免疫熒光染色等方法對小鼠PTA1的組織細(xì)胞分布特點(diǎn)進(jìn)行了研究.對小鼠胸腺瘤細(xì)胞系EL-4的PTA1表達(dá)情況進(jìn)行了研究,結(jié)果表明,EL-4細(xì)胞在靜止時PTA1有一定水平的表達(dá),當(dāng)受TPA刺激活化后PTA1的表達(dá)上調(diào);對活化的EL-4細(xì)胞進(jìn)行PTA1免疫沉淀可以獲得分子量為60kDa的主帶,另外還有兩條分子量略小的條帶,活化EL-4的培養(yǎng)上清亦可沉淀出一個小分子量條帶,表明上清中有可溶性形式存在;提取EL-4細(xì)胞的RNA進(jìn)行

3、Northern Blot研究,發(fā)現(xiàn)在未刺激EL-4細(xì)胞即有PTA1 mRNA的轉(zhuǎn)錄,當(dāng)TPA刺激一天后,轉(zhuǎn)錄水平大大提高,但當(dāng)聯(lián)合使用TPA和A23187后,PTA1的轉(zhuǎn)錄水平反而明顯下降,該結(jié)果與在Jurkat細(xì)胞上研究人PTA1的結(jié)果相類似.取C57BL/6小鼠的DC細(xì)胞作為刺激細(xì)胞,BALB/c小鼠的純化CD4+和CD8+T細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞,進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),并在該系統(tǒng)中加入抗小鼠PTA1多克隆抗體.該研究在克隆小鼠PTA1