三氯苯酚降解相關(guān)基因的合成與功能分析——PsUGT2I基因.pdf

1、三氯苯酚是一種含氯芳香環(huán)化合物，在自然界中難以降解，并對(duì)人類具有具有致癌、致畸、致突變的“三致”效應(yīng)，有六種同分異構(gòu)體。目前，化學(xué)和物理分解法不僅費(fèi)用高昂，效果差，甚至還會(huì)產(chǎn)生二次污染，研究還不是很完善。利用植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)，采用植物降解、微生物降解、或催化轉(zhuǎn)化高毒性芳香化合物，將成為安全、快速、高效、經(jīng)濟(jì)的新型治理方法。
　　 糖基轉(zhuǎn)移酶(Glycosyltransferase，簡稱GTs)超家族，在生物體內(nèi)催化活化的糖連接到不

2、同的受體分子，如蛋白、核酸、寡糖、脂和小分子上，形成聚糖或糖蛋白、糖脂等的酶。存在于植物體內(nèi)的糖基轉(zhuǎn)移酶是參與糖苷化的重要成元。而糖苷化過程是次級(jí)代謝的重要步驟。已經(jīng)有報(bào)道，植物利用此過程可以對(duì)含有苯環(huán)的芳香烴、氯代物具有轉(zhuǎn)化、降解的功能。本研究根據(jù)EMBL中公布的歐洲云杉(Picea Sitchensis)尿嘧啶-葡糖轉(zhuǎn)移酶(UGT2)基因，再依據(jù)植物密碼子偏好性，利用PTDS法化學(xué)合成PsUGT2I基因。合成的PsUGT2I基因翻譯

3、所得的氨基酸序列與網(wǎng)上公布的PsUGT2氨基酸序列一致。
　　 為了進(jìn)一步分析PsUGT2I基因的功能，首先構(gòu)建雙元表達(dá)載體，電擊轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中。通過蘸花法轉(zhuǎn)化擬南芥。經(jīng)潮霉素篩選、PCR檢測，得到了轉(zhuǎn)基因陽性植株。對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的生理分析表明，相對(duì)于野生型，PsUGT2I轉(zhuǎn)基因擬南芥植株對(duì)2，4，5-TCP耐受性比較強(qiáng);且轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出較低的可溶性糖含量。同時(shí)，提取擬南芥蛋白液用作體外降解TCP分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)2，4，5