血液一般檢查

1、,血液一般檢查,北京大學第三醫(yī)院 檢驗科楊碩,,紅細胞一般檢查,白細胞一般檢查,血小板一般檢查,Index,紅細胞沉降速率,,血常規(guī),4,,Index,了解血常規(guī)檢測的原理掌握——讀懂血常規(guī)報告單,,外周血3種有形成分,紅細胞（RBC）白細胞（WBC）血小板（PLT）,外周血涂片染色,,血細胞分析儀——血常規(guī)參數,,,血細胞分析儀——血常規(guī)參數,,,血細胞分析儀——血常規(guī)參數,,,,血細胞分析儀發(fā)展史,傳統(tǒng)手工法,

2、20世紀50年代 Mr Coulter血細胞計數儀（電阻抗原理） 血紅蛋白儀,20世紀80年代 八項分析儀的基礎上增加RDW、MPV、PCT、PDW,20世紀90年代 白細胞二分類或三分類（按體積分）,白細胞五分類,繁瑣費時，大批量標本及時報告難！,,,,,為貧血類型及原因提供有用信息！,精密度提高,過篩作用，白細胞過高、過低需鏡檢,提高自動化白細胞分類的準確性,,血細胞分析儀發(fā)展史,

3、流水線,,,血細胞分析儀的檢測原理,電阻抗法,光散射法,華萊士.庫爾特,1947年提出：“當一個不良導體顆粒，如血細胞，通過兩個電極之間時，導致電路的電阻抗發(fā)生變化?！?,電阻抗法的檢測原理,細胞體積越大，電壓變化越大，產生的脈沖振幅越高脈沖大小——細胞體積脈沖數目——細胞計數,,內電極,外電極,小孔管,等滲電解質溶液,,電阻抗法的檢測原理,,,檢測區(qū)域,,紅細胞,,紅細胞通過小孔,Oscilloscope,,,,,,,示波鏡,,

4、電阻抗法的檢測原理,Oscilloscope,,,,檢測區(qū)域,,白細胞,,白細胞通過小孔（用溶血劑處理）,,,,,,,,示波鏡,,電阻抗法,直方圖——細胞群體分布特征,,電阻抗法,電阻抗法,優(yōu)勢：操作簡單，快速，自動化缺點：只能依據體積大小將細胞分群不能分析細胞漿和核的特點和細胞內部結構分析干擾因素多，結果不穩(wěn)定假陽性率6-48%，假陰性5-8%,,光散射法血細胞分析原理,容量（Volume）,、電導（Conductivi

5、ty）、光散射（Scatter）,電阻法：當細胞進入小孔管，產生脈沖峰大小依細胞體積而定，脈沖的數量決定于細胞的數量。,9 – 12μm,9 – 12μm,,,12 – 14μm,12 – 14μm,只用體積測量法不能準確進行白細胞分類！,小淋巴細胞,嗜酸性粒細胞,幼稚淋巴細胞,嗜中性粒細胞,,光散射法血細胞分析原理,電導（ Conductivity ）,根據細胞壁能產生高頻電流的性能采用高頻電磁探針測量細胞內部的結構（胞核、細胞漿的

6、比例、細胞內化學成分）,9 – 12μm,9 – 12μm,,小淋巴細胞,嗜酸性粒細胞,高頻電流,兩種細胞核漿比例不同，而呈現(xiàn)不同的信號，以此區(qū)分,,光散射法血細胞分析原理,光散射（ Scatter ）,粗顆粒的光散射比細顆粒強，區(qū)分粒細胞,激光光源的單色光束掃描細胞結構（核分葉、核形態(tài)），特別具有對細胞顆粒的構形和顆粒質量的鑒別能力,,VCS檢測原理,,容量庫爾特原理,電導法高能電磁波,光散射激光,總細胞體積,核體積,核/漿比例

7、,顆粒,顆粒,總細胞體積,細胞表面特征,,VCS顯示圖,V,,光散射與細胞化學技術聯(lián)合,過氧化物酶通道血液經過氧化氫酶染色，胞漿內出現(xiàn)不同的酶化學反應，激光束照射產生的前向角和散射角不同。,過氧化氫酶活性：嗜酸性粒細胞 > 中性粒細胞 > 單核細胞 > > 淋巴細胞= 嗜堿性粒細胞,嗜堿細胞/分葉核通道血液與酸性表面活性劑反應，紅細胞溶解，嗜堿性粒細胞可抵抗活性劑的化學作用，其他所有白細胞膜被破壞，胞漿溢出

8、，僅剩裸核，被激光照射后散射光角度不同。,,光散射與細胞化學技術聯(lián)合,,,,清洗劑 甲醛（固定胞漿內酶）,過氧化氫 4氯-萘酚,孵 育稀 釋,分類計數,,,,酸性溶劑,破壞其他細胞,,,,,,嗜堿性粒細胞計數,,,,,,激光,,,核酸熒光染色和流式細胞技術,激光,分色鏡,側向熒光 核酸和細胞器的種類和多少,側向散射光 細胞內部信息,前向散射光 細胞的大小信息,,核酸熒光染色和流式細胞技術,SFL（熒光強度）,SSC(細

9、胞內部復雜程度),,,,,,,,,利用SSC來反應細胞內部復雜程度，SFL反應細胞核酸含量，在WDF散點圖上將白細胞進行分類,,血紅蛋白濃度測定原理,,,,,,,,,,,光比色法氰化高鐵血紅蛋白法（參考方法）：Hb中的Fe2+被高鐵氰化鉀氧化成Fe3+，Hb轉化為高鐵Hb，高鐵Hb與氰離子（CN-）結合，生成氰化高鐵Hb（HiCN），540nm處讀吸光度，與Hb濃度成正比非氰化高鐵血紅蛋白法（如SLS-Hb）：Hb與十二烷基硫酸鈉（

10、SLS）作用，生存SLS-Hb棕色化合物，555nm,,紅細胞一般檢查的臨床意義,,,,,,,,,,,紅細胞計數參考區(qū)間,血紅蛋白參考區(qū)間,血細胞比容參考區(qū)間,血細胞比容（hematocrit，Hct）：一定容積全血中紅細胞所占的百分比，又稱血細胞壓積（packed cell volume，PCV）離心法：將抗凝全血吸入標準毛細玻璃管中離心，使血細胞壓緊并與血漿分離，測量血細胞層和血漿層高度計算血細胞占全血的體積比血液分析儀法：通過

11、測定紅細胞數和紅細胞平均體積，間接計算。Hct = 紅細胞計數 × 紅細胞平均體積。,貧血的診斷和程度,,,紅細胞一般檢查的臨床意義,WHO推薦Hb用于貧血診斷和嚴重程度判斷標準（g/L）,骨髓造血功能障礙或造血原料不足致紅細胞生成減少：AA、白血病、骨髓纖維化、腎性貧血，缺鐵性貧血、巨幼細胞貧血、地中海貧血……急慢性失血：消化道出血、創(chuàng)傷或手術導致急性失血、子宮肌瘤導致月經量過多……紅細胞破壞增多：如溶血性貧血……藥物

12、誘發(fā)貧血：抗腫瘤藥物阿糖胞苷、甲氨蝶呤等，抗菌藥磺胺類、頭孢類、氨基糖苷類抗生素等，解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥如阿司匹林、吲哚美辛……,,紅細胞一般檢查的臨床意義,相對性增多：血容量減少（嘔吐、腹瀉、高熱、多汗、多尿、大面積燒傷……）絕對性增多：原發(fā)性增多：真性紅細胞增多癥繼發(fā)性增多：代償性增多：缺氧性疾病導致（如慢性阻塞性肺氣腫、肺源性心臟 病、發(fā)紺型先天性心臟病……）非代償性增高：某些腫瘤（如腎癌、肝癌、卵巢癌等）和腎臟疾?。ㄈ缍嗄夷I

13、、腎移植術后腎盂積水）致促紅細胞生成素增加,紅細胞增多的病理意義,,紅細胞一般檢查的臨床意義,紅細胞、Hb蛋白的生理變化,生理性增高：缺氧狀態(tài)下，RBC計數會代償性升高，如生活在高原地區(qū)的居民、新生兒、劇烈運動和體力勞動等生理性降低：嬰幼兒生長發(fā)育過快致造血原料不足，妊娠中晚期血容量增加致RBC被稀釋，部分老年人造血功能衰退等,,紅細胞一般檢查的衍生參數,1. 平均紅細胞體積（mean corpuscular volume，MCV）

14、：每個紅細胞的平均體積 MCV（fl） = ×1015,2. 平均紅細胞血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）：每個紅細胞內所含Hb含量的平均值 MCH（pg） =

15、 × 1012,3. 平均紅細胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）： 平均每升紅細胞內所含血紅蛋白濃度 MCHC（g/L） = 或 =,,,注：1L = 1015fl 1g = 1

16、012 pg,,紅細胞一般檢查的衍生參數,,,,,,,紅細胞一般檢查的衍生參數,,,,,,紅細胞分布寬度（red blood cell volume distribution， RDW）：,反映紅細胞體積異質性的統(tǒng)計學參數，由血液分析儀根據大小不同的紅細胞通過計數小孔時產生脈沖的差異獲得，可用變異系數（coefficient of variability，CV）或標準差（standard deviation，SD）表示,,紅細胞一般檢查

17、的衍生參數,,,,,,MCV正常RDW正常,正細胞均一性貧血急性失血性貧血,MCV降低RDW增高,小細胞非均一性貧血缺鐵性貧血,MCV增高RDW增高,大細胞非均一性貧血巨幼細胞性貧血,MCV結合RDW對于貧血的鑒別診斷具有重要意義,,,缺鐵性貧血患者在缺鐵早期RDW即增高，若治療后Hb、紅細胞計數得以糾正，但RDW仍增高，則反映體內貯存鐵尚未完全補足，故RDW可用于缺鐵性貧血的早期診斷及療效動態(tài)監(jiān)測。,,紅細胞形態(tài)檢查,,,

18、,,,正常紅細胞呈雙凹圓盤狀，直徑為6～9μm，大小均一，瑞士（wright）染色呈粉紅色，成熟紅細胞無細胞核，存在中央淡染區(qū)，大小約為紅細胞直徑的1/3,遺傳性球形紅細胞增多癥,遺傳性橢圓形紅細胞增多癥,骨髓纖維化,鐮狀細胞性貧血,多發(fā)性骨髓瘤,紅細胞碎片,,網織紅細胞計數原理,網織紅細胞：介于晚幼紅和成熟紅細胞之間，胞質種種殘存 嗜堿性物質（RNA），反映骨髓造血功能,幼稚,成熟,,網織紅細胞計

19、數原理,顯微鏡目測法：新亞甲藍/煌焦油藍染料的堿性著色基團（帶正電荷）與網織紅細胞RNA的磷酸基（帶負電和）結合，使RNA膠體間的負電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍色的點狀、線狀或網狀結構，計數。,直觀，不需昂貴設備操作費時，受主觀因素影響， 精密度不足,,網織紅細胞計數原理,自動分析儀法：染色劑對網織紅細胞RNA成分進行染色非熒光染料：新亞甲藍熒光染料：堿性槐黃O,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,血細胞,,,

20、,,,,,,,,網織紅細胞散點圖,前散射光（細胞體積）,,,,網織紅細胞,,,,PLT,成熟紅細胞,,,,,,,,WBC,LFR: Low Fluorescence Ratio,MFR: Middle Fluorescence Ratio,HFR: High Fluorescence Ratio,熒光強度,幼稚,,網織紅細胞檢測的臨床意義,【參考區(qū)間】 成人 0.5%～1.5%，絕對值（24～84）×109/L；新生兒

21、2%～6%,反映骨髓造血功能狀態(tài)：增多：骨髓紅細胞系增生旺盛，溶血性貧血、急性失血性貧血減少：骨髓造血功能減低，應用化療藥物、再生障礙性貧血、惡性貧血、白血病等、非增生性貧血（AA，缺鐵性貧血、巨細胞性貧血）……貧血療效觀察：缺鐵性貧血和巨幼細胞性貧血患者給予鐵劑或葉酸糾正貧血，若Ret增高提示治療有效，給藥后3～5天后Ret開始上升，至7～10天達高峰，一般增至6%～8%，也可達10%以上；治療后2周左右Ret逐漸下降至正常水平

22、，而紅細胞及血紅蛋白則逐漸增高，稱Ret反應，可作為貧血治療的療效判斷指標,,白細胞一般檢查的臨床意義,【參考區(qū)間】 成人（3.5 ～ 9.5）×109/L（儀器法）,生理性變化：新生兒WBC數明顯高于成人妊娠，特別是孕晚期可增高吸煙、劇烈運動可能導致WBC增高,,白細胞一般檢查的臨床意義,【參考區(qū)間】 成人（3.5 ～ 9.5）×109/L（儀器法）,病理性變化：增多：某些細菌感染（如革蘭陽性球菌

23、）和某些病毒感染（如傳染性單核細胞增多癥）組織損傷：心肌梗死、手術、外傷等白血病其他：急性大出血、某些惡性腫瘤（如肝癌、肺癌等）、尿毒癥等減少某些細菌感染（如革蘭陰性桿菌）和某些病毒感染（流感、人類免疫缺陷病毒等）血液?。涸偕系K性貧血，急性粒細胞缺乏癥等腫瘤患者化療放療后發(fā)生骨髓抑制,,白細胞一般檢查的臨床意義,成人白細胞分類的參考區(qū)間,,白細胞一般檢查的臨床意義,類白血病反應（leukemoid reaction）：是

24、指在應激或感染等因素刺激下白細胞數顯著升高，可出現(xiàn)未成熟的白細胞，與某些白血病類似，但病因去除后類白血病反應可逐漸消失，外周血白細胞計數可高達30×109/L,粒細胞減少癥（neutropenia）：當外周血中性粒細胞絕對計數<1.5×109/L時粒細胞缺乏癥（granulocytosis）：中性粒細胞絕對計數<0.5×109/L時,,白細胞一般檢查的臨床意義,病毒、某些細菌和原蟲感染，如傳染

25、性單核細胞增多癥、麻疹、風疹、流感、結核桿菌、弓形蟲感染等淋巴細胞白血病和淋巴瘤移植排斥反應粒細胞缺乏癥和再生障礙性貧血時淋巴細胞百分比相對增高,4-6天,4-6歲,生理現(xiàn)象“四六交叉”,藥物和射線接觸致淋巴細胞絕對計數減少，如應用腎上腺皮質激素、環(huán)磷酰胺等免疫缺陷?。喝缛祟惈@得性免疫缺陷綜合征、丙種球蛋白缺乏癥等致粒細胞增多的各種疾病可表現(xiàn)為淋巴細胞百分比相對降低,,白細胞一般檢查的臨床意義,過敏性疾病，如蕁麻疹、支氣管哮

26、喘、食物或藥物過敏等寄生蟲感染，如蛔蟲、血吸蟲、阿米巴、鉤蟲感染等白血?。菏人嵝粤＜毎园籽〉忍匕l(fā)性嗜酸粒細胞增多癥,傷寒、副傷寒長期應用腎上腺皮質激素的患者,,白細胞一般檢查的臨床意義,過敏性疾病，如潰瘍性結腸炎，藥物或食物過敏等白血病，如慢性粒細胞白血病、嗜堿性粒細胞性白血病等惡性腫瘤等,多無臨床意義,,白細胞一般檢查的臨床意義,某些感染，如感染性心內膜炎、瘧疾、黑熱病、肺結核活動期某些血液系統(tǒng)疾病，如單核細胞性白血

27、病、骨髓增生異常綜合癥、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、惡性組織細胞病等,再生障礙性貧血其他血細胞增多導致的單核細胞相對減少,生理性變化：新生兒及嬰幼兒單核細胞高于成人,,白細胞形態(tài)檢查,空泡變性,中毒顆粒,棒狀小體,巨多分葉核,杜勒小體,,白細胞形態(tài)檢查,異型淋巴細胞主要見于病毒感染，其中以EB病毒感染導致的傳染性單核細胞增多癥表現(xiàn)尤為顯著，當異淋超過10%時，對診斷具有一定的價值。異型淋巴細胞還可見于過敏性疾病、急慢性淋巴結炎等,正常淋巴細

28、胞,異型淋巴細胞,異型淋巴細胞,,血小板一般檢查的臨床意義,【參考區(qū)間】 成人（125 ～ 350）×109/L（儀器法）,生理性變化：妊娠中晚期增高，新生兒略低。劇烈運動、飽餐后一過性升高 病理性變化：原發(fā)性增高：原發(fā)性血小板增多癥、真性紅細胞增多癥、骨髓增殖性腫瘤反應性增多：急性失血、溶血，急慢性感染，脾臟切除術后藥物影響：口服避孕藥、類固醇、腎上腺素、雌激素、干擾素生成障礙：再生障礙性貧血、急性白血病、骨

29、髓纖維化破壞增加：特發(fā)性血小板減少性紫癜、脾臟功能亢進消耗過多：彌漫性血管內凝血、血栓性血小板減少性紫癜等藥物影響：化療藥物、氯霉素、磺胺、對乙酰氨基酚、利福平、氯噻嗪、苯妥英鈉,,血小板形態(tài)檢查,正常PLT形態(tài)為兩面微凸的圓盤狀，直徑2～4μm。外周血涂片瑞士-吉姆薩染色呈淡藍色或淡紫紅色，圓形或橢圓形，抗凝狀態(tài)下分布均勻，無細胞核，胞質中有細小、散在分布的紫紅色顆粒,ITP、粒細胞白血病、巨大血小板綜合征、血小板無力癥、脾切除

30、術后,,,血小板形態(tài)檢查,0.3%人血小板在EDTA抗凝管中聚集，如果采血做血細胞計數，放置10分鐘以上，血小板數量隨時間延長而明顯下降。出現(xiàn)假性血小板降低,患者，男性，52歲，因腹痛就診血常規(guī)結果（EDTA-K2抗凝）：PLT 42 X 109/L↓,血常規(guī)結果（枸櫞酸鈉抗凝）：PLT 227 X 109/L,,紅細胞沉降率,紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR）：簡稱血沉，是指在規(guī)

31、定條件下紅細胞自然沉降的速率，可采用魏氏法或全自動血沉分析儀法測定。,,[P1]知識拓展 2-1-4魏氏法血沉測定,（1：4）,魏氏法測定血沉,【參考區(qū)間】 男性0～15mm/h，女性0～20mm/h,,紅細胞沉降率——影響因素,,[P1]知識拓展 2-1-4魏氏法血沉測定,球蛋白、纖維蛋白原、免疫復合物、TG、TC使紅細胞表面的負電荷減少，促使其緡錢狀聚集，與血漿接觸面積減小，下沉阻力小，重力相對增大,白蛋白、卵磷脂相反，抑制紅細

32、胞下沉,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,紅細胞數量增多，下沉時阻力大紅細胞數量少，紅細胞總表面積減少，下沉快,,紅細胞沉降率測定的臨床意義,,[P1]知識拓展 2-1-4魏氏法血沉測定,炎癥性疾?。杭毦愿腥?，結核活動期、風濕病活動期惡性腫瘤和組織損傷：急性心肌梗死、嚴重創(chuàng)傷等；自身免疫疾?。侯愶L濕性關節(jié)炎等疾病活動期，SLE；高球蛋白血癥：MM、肝硬化、巨球蛋白血癥；貧血：嚴重貧血患者由于紅細胞數量減少致