電針促進胃黏膜損傷修復的代謝組學研究

1、電針促進胃黏膜損傷修復的代謝組學研究,目錄 CONTENT,傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療,成分較多，靶點較多,經驗用藥，配方靈活,資源豐富，價格便宜,不良反應相對少而輕,整理調節(jié)，安全有效,一、研究背景,,,胃粘膜損傷是多種難治性胃病的始動病理環(huán)節(jié)，嚴重危害人類健康，因此有效地防治胃黏膜損傷已經成為防治胃部難治疾病的重要途徑。,胃癌,世界性第二大致死原因,,電針治療胃黏膜損傷的作用機制并不明確,,代謝組學自從90年代出現以來，引起了各國科學家

2、的極大興趣，相關科研論文發(fā)表數量從1999年的1篇到現在每年1200多篇的數量增長，主要發(fā)表在JPR,、JCB,、JPBA等雜志上，權威科學雜志Nature迄今已有3篇代謝組學相關文章發(fā)表。國內CNKI也從2003年的幾篇綜述開始到現在已有上千篇出版，并已有相關書籍出版。,NMR,GC-MS,LC-MS,,檢測動態(tài)范圍寬快速、無損靈敏度低,檢測動態(tài)范圍寬靈敏度高費用較高,靈敏度高用于揮發(fā)性物質檢測動態(tài)范圍窄,代謝組學檢測方法

3、,代謝組學數據分析與處理,代謝組學的應用,,2024/2/23,針灸作用的整體調節(jié)特點與代謝組學相契合，用代謝組學方法來研究針灸理論及其作用機制，有可能成為中國傳統(tǒng)醫(yī)學走向國際化的通用語言。 磁共振波譜成像探測大腦多種代謝物濃度空間分布。,2024/2/23,二、研究方法及結果,1.實驗動物清潔級雄性Wistar大鼠32只，體重150±20g，在廈門大學動物實驗中心分組飼養(yǎng)，適應環(huán)境一周后，隨機

4、分為4組，每組8只。,（一）電針治療胃潰瘍的代謝組學研究,2.干預方法（1）造模方法,SD大鼠,造模前禁食不禁水24h,鼠板束縛，浸入水槽(20℃)水面齊劍突水平,持續(xù)10小時,,,,水浸束縛應激法造胃黏膜損傷大鼠模型,（2） 電針方法,G6805-2型電針治療儀,,9,3.動物分組及處理,32只大鼠,正常組,模型組,胃經穴組,非經非穴組,,,,,提取血清和尿液,分離胃黏膜和大腦皮質,,,指標檢測,2024/2/23,（1）

5、大鼠胃黏膜形態(tài)損傷及病理學觀察,? 采用Guth標準評定胃黏膜潰瘍指數和潰瘍面積； ? 光鏡下觀察胃黏膜組織的病理形態(tài)學。,4.檢測指標與方法,,2024/2/23,（2）各組大鼠核磁共振檢測圖為帶有微成像功能的Varian 500MHz超導核磁共振譜儀,,2024/2/23,5.數據分析方法 (1)譜圖數據預處理：數據預處理均由MestReNova軟件處理完成?！?2)模式識別分析：模式識別分析均

6、在SIMCA-P軟件上完成。,2024/2/23,（1）胃粘膜潰瘍指數,各組大鼠胃黏膜潰瘍指數的比較,6.結果與分析,2024/2/23,正常組,（2）胃黏膜組織病理形態(tài)學,模型組,胃經穴組,非經非穴組,各組大鼠胃黏膜組織的病理形態(tài)學,,2024/2/23,(a),血清代謝譜PLS-DA得分圖?！?正常組；●模型組； ■ 胃經穴組; ◆ 非經非穴組,各組樣本均相對集中，且有一定的距離，電針胃經穴或非經非穴后，代謝模式有往正常方向回

7、復的趨勢，胃經穴組更靠近空白組樣本，說明電針胃經穴對胃潰瘍大鼠的恢復作用比非經非穴更明顯。,（3）大鼠血清代謝物表達,,2024/2/23,尿液代謝譜PLSDA得分圖?！?正常組；●模型組； ■ 胃經穴組; ◆ 非經非穴組,空白組與其它三組的代謝模式可以明顯區(qū)分，模型組、胃經穴組和非經非穴組交疊不可區(qū)分，說明電針對胃潰瘍大鼠尿液代謝模式影響較小。,（4）大鼠尿液的代謝物表達,,2024/2/23,與模型組相比，胃經穴組尿液肌酐，乳酸，

8、乙酸，甘氨酸，膽堿，甜菜堿等代謝物的濃度有顯著變化(P<0.05)；非經非穴組尿液乳酸、琥珀酸、甜菜堿、肌酸等代謝物的表達有顯著變化(P<0.05)。,,2024/2/23,胃組織1H NMR代謝輪廓的PLSDA得分圖，▲ 正常組；●模型組； ■ 胃經穴組; ◆非經非穴組,（5）大鼠胃黏膜組織代謝物表達,各組大鼠胃粘膜組織代謝模式有明顯的區(qū)分，胃經穴和非經非穴組代謝模式比較接近正常組，而胃經組與正常組更接近。,與模型組比較

9、，胃經穴組大鼠胃黏膜組織蛋氨酸、天冬氨酸等含量有顯著變化(P<0.05)；膽經穴組乙酸、肌醇、谷氨酸脂、甘氨酸等物質含量有顯著變化(P<0.05)。,,2024/2/23,（6）大鼠大腦皮質代謝物表達,各組大鼠大腦皮質代謝模式有明顯的區(qū)分，胃經穴大鼠大腦皮質代謝模式比較接近正常組。,大腦皮質1H NMR代謝輪廓的PLSDA得分圖，●正常組；■模型組；▲胃經穴組；▼非經非穴組）,與模型組比較，胃經穴組大鼠大腦皮質乳酸、萘乙酸、

10、甘露醇、?；撬帷⒓〈嫉群坑酗@著變化(P<0.05)；非經非穴組乳酸、萘乙酸、谷氨酸脂、腺苷等含量有顯著變化(P<0.05)。,15,健康Sprague-Dawley雄鼠40只，購自吳氏實驗動物中心，體重210±20g?？刂剖覝?0～22℃，相對濕度65～70%，自然光暗周期，在廈門大學動物實驗中心（SPF）分組飼養(yǎng)，適應環(huán)境一周后，隨機分為4組，每組10只。,（二）電針治療慢性萎縮性胃炎的代謝組學研究,1.實驗動

11、物,正常組,模型組,電針穴位組,電針非穴位組,,,NMR,生物標志物代謝通路分析,電針2周,延髓,PCR,ELISA,細胞增殖因子,灌胃水楊酸鈉和酒精混合液12周,灌胃潔凈清水,12周,2.動物分組及處理,G6805-2型電針治療儀,胃經,,四白,3.電針干預,（1）胃黏膜病理檢測,正常組(a,b)：胃黏膜上皮細胞結構保存完整且細胞排列整齊。模型組(c,d)：胃粘膜層變薄，腺細胞減少，核不規(guī)則，有絲分裂現象電針穴位組(e,f)

12、：胃黏膜皺襞增厚，細胞界限明顯，細胞核均勻。電針非穴位組(g,h)：粘膜層變厚，腺體不完整，細胞核不規(guī)則。,4.研究結果,圖2 胃粘膜細胞增殖相關因子表達,（2）胃黏膜細胞增殖相關蛋白的ELISA檢測,與正常組相比，模型組大鼠胃黏膜細胞PCNA， Ag-NORs, EGF和VEGF表達水平均發(fā)生上調（P＜0.05），表明細胞增殖相關因子表達增強。而電針穴位組表達水平明顯降低，且抑制效應明顯強于電針非穴位。,（3）胃粘膜細胞增殖相關基因

13、檢測,圖3 胃粘膜細胞增殖相關基因的表達,與正常組相比，模型組和電針非穴位組中NF-κB， c-myc基因的表達水平明顯升高，而電針穴位組兩種基因的表達水平明顯降低。電針刺激胃經穴位有助于抑制大鼠胃黏膜細胞的增殖，且電針穴位比非穴位組效果更好。,（4） 大鼠體液及組織樣本的 1H NMR 檢測,大鼠血清、尿和大腦皮質、延髓和胃粘膜提取物的1H NMR譜,從圖中PLS-DA圖可以看出，模型組與正常組明顯分開，電針穴位組居于模型組和正常組中

14、間并靠近正常組，說明電針胃經穴位有助于調回這種代謝輪廓的變化，也說明了電針胃經穴位對慢性萎縮性胃炎的治療作用。,① 大鼠體液及組織樣本的代謝標記物,② 電針治療慢性萎縮性胃炎的相關代謝通路圖,慢性萎縮性胃炎可以引起機體TCA循環(huán)、糖酵解、脂質代謝、膜代謝、腸道菌群代謝、氨基酸代謝以及神經遞質的變化。電針治療有效緩解了慢性萎縮性胃炎引起的脂代謝，并對腦內神經遞質的功能有一定的恢復作用。同時，電針治療也一定程度上改善了CAG所引起腸道菌群