比格犬胃黏膜防御-修復(fù)機(jī)制老化的初步研究.pdf

1、目的:胃黏膜防御-修復(fù)機(jī)制包括黏液-碳酸氫鹽-磷脂屏障、胃黏膜上皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞間的緊密連接和黏膜下血流三層屏障，健全完整的GMD-RM是維持正常胃黏膜功能的必要條件。臨床工作中發(fā)現(xiàn)老年人上消化道潰瘍、糜爛等炎癥性疾病發(fā)病率高，且病情較中青年人重。因人體標(biāo)本采集較為困難，不可控因素多，無法控制實(shí)驗(yàn)中的混雜因素，而大鼠胃黏膜的增齡變化已有研究較多，因此本課題選取健康成年比格犬為研究對(duì)象，通過觀察不同年齡組正常胃竇黏膜、幽門腺體及上皮細(xì)胞組

2、織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及與GMD-RM相關(guān)生物活性因子的增齡變化，以探討胃黏膜防御-修復(fù)功能有無隨增齡減退的現(xiàn)象，并對(duì)其機(jī)制做初步探討。
　　方法:選取健康成年比格犬19只，按照年齡分為三組:1.5-6歲為中青年組共8只，6-9歲為低齡老年組共5只，≥9歲為高齡老年組共6只。靜脈麻醉處死前稱體重，抽血做血常規(guī)、生化全套;處死后十分鐘內(nèi)離體取胃竇黏膜組織3塊，1塊做常規(guī)病理，1塊做電鏡檢查，另1塊即刻凍存做分子生物學(xué)檢測。光鏡下觀察胃竇黏膜

3、組織學(xué)形態(tài)、有無腸上皮化生及異型增生等，半定量分析黏膜炎癥指數(shù)，同時(shí)測量固有膜厚度、測定黏液腺體實(shí)質(zhì)百分比;電鏡下觀察上皮細(xì)胞及幽門腺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，對(duì)比細(xì)胞間連接變化，計(jì)算黏原顆粒實(shí)質(zhì)百分比;分子生物學(xué)檢測包括TBA法測定胃竇黏膜組織中MDA、MPO、LPO含量，硝酸還原酶法測定胃竇黏膜組織中NO含量，Elisa法測定胃竇黏膜組織中Survivin、PTEN、CGRP、VEGF、緊密連接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、Caspas

4、e-3、Caspase-9及端粒酶的含量。
　　結(jié)果:(1)19只比格犬體重均在14～20Kg范圍內(nèi);血常規(guī)、生化指標(biāo)均正常。(2)光鏡下觀察各年齡組比格犬胃竇黏膜，顯示:隨增齡上皮細(xì)胞形態(tài)、黏液腺腺體形態(tài)及細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化，所有標(biāo)本中均未見腸化及異型增生，部分標(biāo)本有少量炎性細(xì)胞浸潤，半定量測定各組炎癥指數(shù)，結(jié)果表明無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.977)。在高齡老年組可見胃竇黏膜固有層間質(zhì)明顯增生，黏液腺腺體排列較中青年組稀疏。定

5、量測定發(fā)現(xiàn)固有膜厚度、胃竇黏液腺實(shí)質(zhì)比例隨增齡有下降趨勢，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.015，P=0.002)。(3)電鏡下觀察各年齡組上皮細(xì)胞及胃竇幽門腺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞間的連接，顯示:上皮細(xì)胞間的緊密連接無明顯變化，但中間連接及縫隙連接隨增齡有逐漸疏松趨勢;幽門腺細(xì)胞中分與泌黏液功能相關(guān)的細(xì)胞器—黏原顆粒，分布隨增齡逐漸稀疏。定量測定示:黏原顆粒面積分?jǐn)?shù)比隨齡有明顯降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000)。(4) TBA法定量測定比格

6、犬胃竇黏膜組織中MDA、LPO、MPO含量，發(fā)現(xiàn)隨增齡MDA、MPO含量有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.452，0.094），兩組間比較發(fā)現(xiàn)高齡老年組胃竇黏膜組織中MPO含量均值高于中青年組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.044);LPO含量隨增齡升高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.047)。(5)硝酸還原酶法定量測定胃竇黏膜組織中NO含量，胃竇黏膜組織中NO含量隨增齡有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.200)。(6)Elisa法定量測

7、定胃竇黏膜組織中Survivin、PTEN、CGRP、VEGF、緊密連接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、Caspase-3、Caspase-9及端粒酶的含量。隨增齡，胃竇黏膜組織中Survivin含量明顯降低(P=0.049)，PTEN、caspase-9的含量明顯升高（P值分別為0.015，0.002）;而CGRP、VEGF、ZO-1、COX-1、COX-2、caspase-3、端粒酶的含量隨增齡雖有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩

8、組間比較發(fā)現(xiàn)，低齡老年組胃竇黏膜組織中VEGF、COX-1、COX-2的含量明顯低于中青年組，（P值分別為0.024，0.033和0.048）;高齡老年組和中青年組比較，高齡老年組胃竇黏膜組織中caspase-3的含量均明顯低于中青年組(P=0.026)。
　　結(jié)論:比格犬胃竇黏膜厚度、幽門腺體密度、上皮細(xì)胞間中間連接及縫隙連接緊密程度、分泌黏液的黏原顆粒百分比均隨增齡明顯降低，提示胃竇黏膜及其功能腺體在形態(tài)學(xué)上存在隨增齡老化現(xiàn)象

9、。同時(shí)發(fā)現(xiàn):隨增齡，胃竇黏膜組織中與脂質(zhì)過氧化及氧化應(yīng)激損傷程度相關(guān)的MDA、LPO、MPO含量有增加趨勢，與黏膜下血流調(diào)節(jié)相關(guān)的CGRP、NO含量降低，與抗細(xì)胞凋亡相關(guān)的Survivin有降低趨勢，而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的PTEN、caspase-3、caspase-9含量有升高趨勢，與胃黏膜血管再生能力相關(guān)的VEGF含量有降低趨勢，間接調(diào)節(jié)胃黏膜血流的COX-1、COX-2有降低趨勢。由此可以推測:胃竇黏膜防御-修復(fù)機(jī)制的老化是多種因素相互