蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)

1、生物化學(xué),蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)化學(xué)之二,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),,蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu),,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)具有多種結(jié)構(gòu)層次，包括一級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)，空間結(jié)構(gòu)又稱(chēng)為構(gòu)象?？臻g結(jié)構(gòu)包括二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。在二級(jí)與三級(jí)之間還存在超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域這兩個(gè)結(jié)構(gòu)層次。,,蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),

2、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（Primary structure）又稱(chēng)為共價(jià)結(jié)構(gòu)或化學(xué)結(jié)構(gòu)。它是指蛋白質(zhì)中的氨基酸按照特定的排列順序通過(guò)肽鍵連接起來(lái)的多肽鏈結(jié)構(gòu)。,（一）肽鍵與肽鏈,1.肽鍵：一個(gè)氨基酸的α-COOH 和相鄰的另一個(gè)氨基酸的 α-NH2脫水形成共價(jià)鍵。如下圖：,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),,肽鍵和肽的結(jié)構(gòu),§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),2. 氨基酸借肽鍵連接起來(lái)叫肽，肽

3、是一大類(lèi)物質(zhì)，即：,兩個(gè)氨基酸組成的肽叫二肽；三個(gè)氨基酸組成的肽叫三肽；多個(gè)氨基酸組成的肽叫多肽；氨基酸借肽鍵連成長(zhǎng)鏈，稱(chēng)為肽鏈，肽鏈兩端有自由-NH2和-COOH，自由-NH2端稱(chēng)為N-末端（氨基末端），自由-COOH端稱(chēng)為C-末端（羧基末端）；構(gòu)成肽鏈的氨基酸已殘缺不全，稱(chēng)為氨基酸殘基；肽鏈中的氨基酸的排列順序，一般-NH2端開(kāi)始，由N指 向C，即多肽鏈有方向性，N端為頭，C端為尾。,肽的顏色反應(yīng),多肽可與多種化合物作

4、用，產(chǎn)生不同的顏色反應(yīng)。這些顯色反應(yīng)，可用于多肽的定性或定量鑒定。 如黃色反應(yīng)，是由硝酸與氨基酸的苯基（酪氨酸和苯丙氨酸）反應(yīng)生成二硝基苯衍生物而顯黃色。多肽的雙縮脲反應(yīng)是多肽特有的顏色反應(yīng);雙縮脲是兩分子的尿素經(jīng)加熱失去一分子NH3而得到的產(chǎn)物。 雙縮脲能夠與堿性硫酸銅作用，產(chǎn)生蘭色的銅-雙縮脲絡(luò)合物，稱(chēng)為雙縮脲反應(yīng)。含有兩個(gè)以上肽鍵的多肽，具有與雙縮脲相似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，也能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色或藍(lán)紫色絡(luò)合物。這是多肽定

5、量測(cè)定的重要反應(yīng).,,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),（二）天然活性肽,自然界中有自由存在的活性肽，主要有：,1. 谷胱甘肽（GSH）：三肽（Glu-Cys-Gly），廣泛存在于生物細(xì)胞中，含有自由的-SH，具有很強(qiáng)的還原性，可作為體內(nèi)重要的還原劑，保護(hù)某些蛋白質(zhì)或酶分子中的巰基免遭氧化，使其處于活性狀態(tài)。,,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),2.促甲狀腺素釋放激素：三肽（焦谷氨酰組氨酰脯氨酸）

6、，可促進(jìn)甲狀腺素的釋放。,3.短桿菌素S：環(huán)十肽，含有D-苯丙氨酸、鳥(niǎo)氨酸，對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌有破壞作用，主要作用于細(xì)胞膜。,4.青霉素：含有D—半胱氨酸和D—纈氨酸的二肽衍生物 。主要破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁粘肽的合成引起溶菌。,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),5.牛催產(chǎn)素與加壓素：均為九肽，分子中含有一對(duì)二硫鍵，兩者結(jié)構(gòu)類(lèi)似。前者第九位為Gly或Lys或Phe，后者為Arg。前者可刺激子宮的收縮，促進(jìn)分娩。后者可促進(jìn)小動(dòng)脈收縮，使血壓升高

7、，也有抗利尿作用，參與水、鹽代謝的調(diào)節(jié)。,7.腦啡肽：為五肽，具有鎮(zhèn)痛作用。 在正常人的腦內(nèi)存在內(nèi)源性腦啡肽和腦啡肽受體。在正常情況下，內(nèi)源性腦啡肽作用于腦啡肽受體，調(diào)節(jié)著人的情緒和行為。人在吸食海洛因后，抑制了內(nèi)源性腦啡肽的生成，逐漸形成在海洛因作用下的平衡狀態(tài)，一旦停用就會(huì)出現(xiàn)不安、焦慮、忽冷忽熱、起雞皮疙瘩、流淚、流涕、出汗、惡心、嘔吐、腹痛、腹 瀉等。冰毒和搖頭丸在藥理作用上屬中樞興奮藥，毀壞人的神經(jīng)中樞。,6.舒緩激肽

8、：促進(jìn)血管舒張，促進(jìn)水、鈉離子的排出。,§1.3 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)是由一條或多條多肽(polypeptide)鏈以特殊方式結(jié)合而成的生物大分子。蛋白質(zhì)與多肽并無(wú)嚴(yán)格的界線，通常是將分子量在6000道爾頓以上的多肽稱(chēng)為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)分子量變化范圍很大, 從大約6000到1000000道爾頓甚至更大。,示例,蝦紅素,木瓜蛋白酶,組織蛋白酶,一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),1. 定義—— 1969年，國(guó)際純化學(xué)與應(yīng)用

9、化學(xué)委員會(huì)（IUPAC） 規(guī)定：蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指蛋白質(zhì)多肽連中AA的排列順序，包括二硫鍵的位置。其中最重要的是多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ)。,2.蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定,蛋白質(zhì)氨基酸順序的測(cè)定是蛋白質(zhì)化學(xué)研究的基礎(chǔ)。自從1953年F.Sanger測(cè)定了胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu)以來(lái)，現(xiàn)在已經(jīng)有上千種不同蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)被測(cè)定。,氨肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的N-端逐個(gè)的向里水解。根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測(cè)出酶水解所釋放出的氨

10、基酸種類(lèi)和數(shù)量，按反應(yīng)時(shí)間和氨基酸殘基釋放量作動(dòng)力學(xué)曲線，從而知道蛋白質(zhì)的N-末端殘基順序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸殘基為N-末端的肽鍵速度最大。,N-端氨基酸分析法-氨肽酶(amino peptidases)法,此法是多肽鏈C-端氨基酸分析法。多肽與肼在無(wú)水條件下加熱，C-端氨基酸即從肽鏈上解離出來(lái)，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與C-端氨基酸分離。,C-端氨基酸分析法--肼解法

11、,羧肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的C-端逐個(gè)的水解AA。根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測(cè)出酶水解所釋放出的氨基酸種類(lèi)和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的C-末端殘基順序。目前常用的羧肽酶有四種：A,B,C和Y；A和B來(lái)自胰臟；C來(lái)自柑桔葉；Y來(lái)自面包酵母。羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸殘基；B只能水解Arg和Lys為C-末端殘基的肽鍵。 （2）測(cè)定步驟E.多肽鏈斷裂成多個(gè)肽段

12、，可采用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，并將其分離開(kāi)來(lái)。p169,C-端氨基酸分析法--羧肽酶(carboxypeptidase)法,酶解法:胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶,多肽鏈的選擇性降解,Trypsinase ：R1=Lys和Arg側(cè)鏈（專(zhuān)一性較強(qiáng)，水解速度快）。R2=Pro 水解受抑。馬來(lái)酸酐保護(hù)Lys,只水解Arg1,2-環(huán)己二酮保護(hù)Arg，只水解Lysp17

13、3,肽鏈,水解位點(diǎn),胰蛋白酶,Pro,或胰凝乳蛋白酶 （Chymotrypsin）：R1=Phe, Trp,Tyr時(shí)水解快; R1= Leu，Met和His水解稍慢。R2=Pro 水解受抑。,肽鏈,水解位點(diǎn),糜蛋白酶,Pepsin：R1和R2＝Phe, Trp, Tyr; Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度較快。R1=Pro 水解受抑。酶的最適pH2。二硫鍵在酸性條件下穩(wěn)定。確定二硫鍵的位置時(shí)常用胃蛋白酶。,肽鏈,水解位點(diǎn),胃蛋

14、白酶,thermolysin：R2=Phe, Trp, Tyr; Leu，Ile, Met以及其它疏水性強(qiáng)的氨基酸水解速度較快。R2=Pro或Gly 水解受抑。R1或R3=Pro 水解受抑。,肽鏈,水解位點(diǎn),嗜熱菌蛋白酶,谷氨酸蛋白酶： R1=Glu、Asp(磷酸緩沖液); R1=Glu (磷酸緩沖液或醋酸緩沖液)精氨酸蛋白酶： R1=Arg,肽鏈,水解位點(diǎn),谷氨酸蛋白酶和精氨酸蛋白酶,木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶,荔枝?。豪笾?/p>

15、“南國(guó)第一佳果”。但過(guò)量進(jìn)食后易患“低血糖癥”，俗稱(chēng)“荔枝病”。荔枝內(nèi)含有豐富的果糖，過(guò)食后大量果糖來(lái)不及經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖，而積聚在體內(nèi)，使血液中葡萄糖含量嚴(yán)重不足。芒果皮炎：芒果有“熱帶果王”之稱(chēng)，滋味獨(dú)特。芒果汁內(nèi)的特異性蛋白和蛋白酶引起的即發(fā)型接觸性皮膚反應(yīng)。。波蘿過(guò)敏癥：菠蘿有“宴會(huì)水果”之稱(chēng)，內(nèi)含菠蘿蛋白酶的作用。這是一種蛋白水解酶，可使胃腸粘膜通透性增大，使胃腸中異性大分子蛋白滲透進(jìn)血液中，而引起胃腸道乃至全

16、身過(guò)敏反應(yīng)。菠蘿所含的生物堿及蛋白酶，能使血凝塊消散與抑制血液凝塊的形成。對(duì)冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈血管栓塞所引起之病有緩解作用。柿結(jié)石癥：含大量柿膠酚、單寧和果膠質(zhì)。空腹服少量，就會(huì)致胃脘疼痛，消化不良等癥，原因?yàn)楣z與胃酸凝結(jié)成不溶性物質(zhì)——胃柿結(jié)石。正常人也宜飽餐后食，且忌與螃蟹、山芋和菱角等同食。櫻桃：含過(guò)量鐵和氫氰甙，故過(guò)食后可引起鐵中毒，甚至氰化物中毒而死亡。李時(shí)珍在《本草綱目》中有關(guān)于過(guò)食櫻桃致死的記載，以告誡后人。,化學(xué)法

17、：可獲得較大的肽段 溴化氰(Cyanogen bromide)水解法，它能選擇性地切割由Met的羧基所形成的肽鍵。,多肽鏈的選擇性降解,化學(xué)法：可獲得較大的肽段羥胺（NH2OH）：專(zhuān)一性斷裂-Asn-Gly-之間的肽鍵。也能部分裂解-Asn-Leu-之間的肽鍵以及-Asn-Ala-之間的肽鍵。各種蛋白中-Asn-Gly-出現(xiàn)的概率很低。,多肽鏈的選擇性降解,蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),3.蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)舉例 （1）胰島素（Insul

18、in）英國(guó)Sanger,A鏈,B鏈,一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵和兩個(gè)鏈間二硫鍵，分子量5700,,,A鏈21個(gè)aa殘基,B鏈30個(gè)aa殘基,（2）牛胰核糖核酸酶（RNase） 一條多肽鏈，124AA殘基組成，四 個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，分子量12600.它是測(cè)出一級(jí)結(jié)構(gòu)的第一個(gè)酶分子。,三、 蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與生物功能,1. 同源蛋白質(zhì)的種屬差異與生物進(jìn)化 同源蛋白質(zhì)(homologous protein)是指在不

19、同的有機(jī)體中實(shí)現(xiàn)同一功能的蛋白質(zhì)。 例如血紅蛋白在不同的脊錐動(dòng)物中行使相同的輸氧功能。 不同種屬來(lái)源的同源蛋白質(zhì)一般具有相同長(zhǎng) 度或接近相同長(zhǎng)度的多肽鏈。,同源蛋白質(zhì),不變殘基(invariable residue)：同源蛋白質(zhì)的氨基酸順序中有許多位置的氨基酸對(duì)所有的種屬來(lái)說(shuō)都是相同的； ?可變殘基(variable residue)：其它位置的氨基酸對(duì)不同種屬有相當(dāng)大的變化。

20、?順序同源(sequence homology)現(xiàn)象：同源蛋白質(zhì)的氨基酸順序中所具有的相似性。 ?順序同源現(xiàn)象表明從中分離同源蛋白質(zhì)的這些生物在進(jìn)化上有著共同的祖先。,順序同源的生物學(xué)意義,在不同種屬來(lái)源的細(xì)胞色素c中，可以變換的氯基酸殘基數(shù)目與這些種屬在系統(tǒng)發(fā)生上的位置有密切關(guān)系，即在進(jìn)化位置上相距愈遠(yuǎn)，則氨基酸順序之間的差別愈大; 反之，親緣關(guān)系越近，其順序同源性越大。 細(xì)胞色素c的氨基酸順序分析資料己被用來(lái)核對(duì)各個(gè)物種之間的分

21、類(lèi)學(xué)關(guān)系，以及繪制系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)－進(jìn)化樹(shù)。 根據(jù)進(jìn)化樹(shù)不僅可以研究從單細(xì)胞有機(jī)體到多細(xì)胞有機(jī)體的生物進(jìn)化過(guò)程，而且可以粗略估計(jì)現(xiàn)存的各類(lèi)種屬生物在進(jìn)化中的分歧時(shí)間。,根據(jù)細(xì)胞色素c的順序種屬差異建立的進(jìn)化樹(shù),2 一級(jí)結(jié)構(gòu)的局部斷裂與蛋白質(zhì)的激活,在動(dòng)物體內(nèi)的某些生物化學(xué)過(guò)程中，蛋白質(zhì)分子的部分肽鏈必須先按特定的方式斷裂，然后才呈現(xiàn)生物活性。 血液凝固時(shí)血纖維蛋白原(fibrinogen)和凝血酶原(thrombinogen)的復(fù)雜變化

22、;消化液中一系列蛋白水解酶原的激活(activation)許多多肽或蛋白質(zhì)激素前體轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚缘募に匦问降榷紝儆谶@種情況。,血液凝固的生物化學(xué)機(jī)理,血液中包含著對(duì)立統(tǒng)一的兩個(gè)系統(tǒng)：凝血系統(tǒng)和溶血系統(tǒng)。這兩個(gè)系統(tǒng)的相互制約，既保證血液在血管中暢通無(wú)阻，又保證一旦血管壁破損能及時(shí)堵漏。 如果凝血因子都處于活性狀態(tài)，血液有隨時(shí)凝固而被阻流的危險(xiǎn)；如果血液沒(méi)有凝血因子存在，那么動(dòng)物一旦受到創(chuàng)傷將會(huì)流血不止。,血液凝固的生物化學(xué)機(jī)理,有

23、機(jī)體解決這個(gè)矛盾的辦法就是凝血因子以前體(precursor)的形式存在。動(dòng)物體受到創(chuàng)傷而流血時(shí)，這些前體將在其他因子作用下被激活，使血液迅速凝固而將創(chuàng)傷處封閉，這樣就能防止繼續(xù)流血，起著保護(hù)機(jī)體的作用。 凝血功能失調(diào)時(shí)，確有凝血而堵塞血管的危險(xiǎn)，因此血液中還存在另一個(gè)系統(tǒng)，即纖維蛋白溶酶原，被激活后轉(zhuǎn)變成纖維蛋白溶酶，它的作用是使纖維蛋白溶解。這種與凝血相反的過(guò)程對(duì)于保持血液的流動(dòng)性有重要意義。,酶原激活,上述激活過(guò)程都是專(zhuān)一性很