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文檔簡介
1、培養(yǎng)液中酵母菌種群數量的變化,探究實驗,單細胞真核生物生長周期短,增殖速度快還可以用酵母菌作為實驗材料研究 探究酵母菌的呼吸方式,酵母菌,,一、提出問題:,培養(yǎng)液中酵母菌種群是怎樣隨時間變化的?,二、作出假設:,,酵母菌在培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)時,由于食物,空間資源等是有限的,種群增長呈現“S”型曲線;后期因環(huán)境急劇惡化,種群逐漸消亡。,—————————————————————————————————————————
2、———————————————————,三、討論探究思路,血細胞計數板(血球計數板),方法名稱:使用范圍:,顯微計數(抽樣檢測),①調查細胞數量時; ②肉眼看不見的細菌、酵母菌等微生物,問題一:怎樣進行酵母菌的計數?,1、血球計數板的結構,血球計數板是一種專門用于計算較大單細胞微生物數量的儀器,由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的,玻片中有四條下凹的槽,構成三個平臺。中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽隔
3、為兩半,每半邊上面刻有一個方格網。,方格網上刻有9個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數室,供微生物計數用。,,,大方格的長和寬各為1mm,深度為0.1mm,即1mm×1mm×0.1mm,其容積為0.1mm3;,,,,,,大方格,,,,,,,中方格,,小方格,,,,16 (中格)×25 (小格),25(中格)×16(小格),3、血球計數板的分區(qū)與分格,不管計數室是哪一種構造,其每一大方格都是由1
4、6×25=25×16=400個小方格組成。,2、計數,,,,,16×25型: 一般取四角的四個中方格(100個小方格)計數,,25×16型: 一般計數四個角和中央的五個中方格(80個小方格)的細胞數。,,,,,,例1 通常用血球計數板對培養(yǎng)液中酵母菌進行計數,若計數室為1mm×1mm×0.1mm方格,由400個小方格組成。若多次重復計數后,算得每個小方格
5、中平均有5個酵母菌,則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數有 個。,2×108,例2 檢測員將1 mL水樣稀釋10倍后,用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數量;將蓋玻片放在計數室上,用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數室,并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數室由25×16=400個小格組成,容納液體的總體積為0.1 mm3。,現觀察到圖中該計數室所示a、b、c、d
6、、e 5個中格80個小格內共有藍藻n個,則上述水樣中約有藍藻 個/mL。,5n×105,3、計算,b表示培養(yǎng)液稀釋倍數;用所數小方格中細胞總數/所數小方格數是為求得每個小方格中的細胞總數。,4、血球計數板的使用方法步驟,③ 計數: 稍待片刻(約5min),待酵母菌細胞全部沉降到計數室底部后,將計數板放在載物臺的中央,先在低倍鏡下找到計數室所在位置后,再轉換高倍鏡觀察、計數并記錄
7、。,① 鏡檢計數室: 在加樣前,先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物,則需清洗,吹干后才能進行計數。,② 加樣品: 將清潔干燥的血球計數板的計數室上加蓋專用的蓋玻片,用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液,滴于蓋玻片邊緣,讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入,一次性充滿計數室,防止產生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數室臺面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去。,——從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數之前,要將試管輕輕震蕩幾下,這樣使酵母菌
8、分布均勻,防止酵母凝聚沉淀,提高計數的代表性和準確性,求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數量誤差小。,問題二:從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數之前,應該將試管輕輕震蕩幾次,為什么?,一個小方格內酵母菌過多,難以數清,應當對培養(yǎng)液進行稀釋以便于酵母菌的計數。 具體方法是:搖勻試管,取1mL酵母菌培養(yǎng)液,加入成倍的無菌水稀釋,稀釋n倍后,再用血球計數板計數,所得數值乘以稀釋倍數。以每小方格內含有4~5個酵母細胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計
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