實(shí)驗(yàn)五植物細(xì)胞液泡系與細(xì)胞骨架的觀察

1、實(shí)驗(yàn)五 植物細(xì)胞液泡系與細(xì)胞骨架的染色與觀察,一、相關(guān)概念與原理1 植物細(xì)胞與動(dòng)物細(xì)胞區(qū)別 植物細(xì)胞：細(xì)胞壁、葉綠體、大液泡 動(dòng)物細(xì)胞：中心體2 細(xì)胞骨架 指真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，是由微管、微絲和中間纖維組成的體系。 功能：維持細(xì)胞的一定形態(tài)；細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸和細(xì)胞器的移動(dòng)；幫助細(xì)胞運(yùn)動(dòng)；指導(dǎo)細(xì)胞壁合成等 。,3 細(xì)胞骨架染色 用

2、Triton X-100處理細(xì)胞，抽提掉細(xì)胞質(zhì)內(nèi)結(jié)合在膜結(jié)構(gòu)上的蛋白質(zhì)，而骨架蛋白得以保存。 戊二醛固定，蛋白質(zhì)的特異性染料考馬斯亮藍(lán)染色后，可以在光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。4 液泡系染色 中性紅是一種弱堿性 pH 指示劑，pH6.4～8.0時(shí)，由紅變黃。 中性或弱堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅到液泡中；液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，中性紅便解離出大量陽(yáng)

3、離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色。 細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)不著色。,實(shí)驗(yàn)材料 綠豆芽 洋蔥試劑 Ringer溶液、 M－緩沖液、磷酸緩沖液（PBS）、 1%Triton X-100、 10%中性紅溶液 、 0.2%考馬斯亮藍(lán)R250、3%戊二醛器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤(pán)、剪刀、鑷子、雙面刀片、解剖盤(pán)、載玻

4、片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管（1根/人）、牙簽、吸水紙,二、材料、試劑與器械,,（1）豆苗培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)前把綠豆培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內(nèi)潮濕的濾紙上，使其發(fā)芽，胚根伸長(zhǎng)到1cm以上。（2）染色 用刀片把綠豆幼苗根尖切一縱切面，放于載玻片上，滴一滴1/3000中性紅染液，染色8-10min。（3）制片 吸去染液，滴1滴Ringer液，蓋上蓋玻片，并用鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察。（4）鏡檢,三、實(shí)驗(yàn)步

5、驟,1 植物活細(xì)胞內(nèi)液泡系的染色和觀察,（1）撕取洋蔥鱗葉內(nèi)表皮1片，約1cm2，置于1.5mL離心管中。（2）用磷酸鹽緩沖液（PBS）浸泡片刻。（3）吸去PBS，用1% Triton X-100處理20min，抽提細(xì)胞骨架以外的蛋白質(zhì)，增加細(xì)胞膜的通透性。（4）吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗3次，每次3min。M-緩沖液有穩(wěn)定細(xì)胞骨架的作用。（5）用3%戊二醛固定15～20 min。（6）用PBS洗3次，每次3

6、 min。（7）考馬斯亮藍(lán)染色15 min。 （8）蒸餾水洗2次（9）置于載玻片上，蓋上蓋玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察。,2 洋蔥細(xì)胞骨架的觀察,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,生長(zhǎng)點(diǎn)，細(xì)胞小，很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡,伸長(zhǎng)區(qū)，細(xì)胞已分化長(zhǎng)大，體積增大，液泡增大，液泡的染色較淺，數(shù)目變少,成熟區(qū)細(xì)胞，只有一個(gè)淡紅色的巨大液泡，占據(jù)細(xì)胞的絕大部分，將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一側(cè)貼近細(xì)胞壁處，液泡顏色更淡。,,,,1 植物活細(xì)胞內(nèi)液泡