植物原生質(zhì)體細(xì)胞骨架觀察和蘭花病毒的檢測技術(shù).pdf

1、蠶豆萎蔫病毒2(BBWV 2)發(fā)生廣泛，對許多經(jīng)濟(jì)作物造成嚴(yán)重危害。為了建立研究BBWV 2與寄主植物互作關(guān)系的實(shí)驗(yàn)體系，本文以防蟲溫室培育20～60d的豌豆幼嫩葉片為材料，進(jìn)行了豌豆原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)研究，并對酶液配比、酶液pH、酶解時間，滲透壓調(diào)節(jié)條件等作了探索。分離出的原生質(zhì)體形態(tài)飽滿渾圓，F(xiàn)DA測定活力良好。采用β微管蛋白一抗(鼠抗)和熒光基團(tuán)FITC標(biāo)記的兔抗鼠二抗標(biāo)記感染BBWV 2和健康的豌豆原生質(zhì)體微管骨架，用激光共聚焦

2、顯微鏡進(jìn)行了觀察。用產(chǎn)自新鮮活體葉片的原生質(zhì)體替代產(chǎn)自愈傷組織的原生質(zhì)體，研究BBWV 2與寄主之間的互作，更接近事實(shí)原貌。研究中并未觀察到感染BBWV 2后寄主細(xì)胞骨架的特異變化，可能病毒感染不造成寄主細(xì)胞骨架的變化，或者變化較小不易觀察。 建蘭花葉病毒(CymMV)和齒蘭環(huán)斑病毒(ORSV)在蘭花上大面積嚴(yán)重發(fā)生，對蘭花的經(jīng)濟(jì)和觀賞價值造成了不可估量的損失。本文研究了蘭花上兩種主要病毒的檢測方法，并對其靈敏度及田間檢測實(shí)用性

3、進(jìn)行比較。 應(yīng)用I-ELISA方法和電鏡負(fù)染法對采自杭州、北京等地區(qū)多品系蘭花上的CymMV和ORSV進(jìn)行了檢測，并分析比較了I-ELISA，DAS-ELlSA和TAS-ELISA三種方法的靈敏度。數(shù)據(jù)表明兩者發(fā)病率相似皆較高，但皆有無毒品系存在，應(yīng)嚴(yán)格控制其傳播，避免無毒品系染病。分析I-ELISA和DAS-ELISA及DAS-ELISA等方法所得數(shù)據(jù)表明，TAS-ELISA在三者之中檢測靈敏度最高。 應(yīng)用抗CymMV

4、單克隆抗體建立了快速檢測田間樣品的免疫斑點(diǎn)法(Dot-ELISA)和組織印跡法(Tissue blot-ELISA)，對其田間實(shí)用性進(jìn)行了分析。CymMV單抗稀釋3000倍時,Dot-ELISA中病葉粗汁液可被檢出的最大稀釋度為1：5120。Tissueblot-ELISA中樣品一次平切后第1次印跡與Dot-ELISA樣品1：40稀釋的結(jié)果相當(dāng)，前4次印跡均可獲得滿意的顯色效果。Tissue blot-ELISA的靈敏度低于Dot-EL