細(xì)胞因子與病理過(guò)程

1、細(xì)胞因子與病理過(guò)程,中國(guó)醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室王恩華,細(xì)胞因子cytokines,concept：是由細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的低分子量的多 肽類(lèi)介質(zhì)effect：參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、器官發(fā)育; 炎癥、免疫、腫瘤、損傷、修復(fù)等許多病理及生理過(guò)程來(lái)源： 血管內(nèi)皮細(xì)胞、WBC（中性、單核巨噬細(xì)胞、LC）、纖維母細(xì)胞、神經(jīng)組織、 平滑肌細(xì)胞、軟骨組織、腫瘤細(xì)

2、胞等,,1.白細(xì)胞介素類(lèi) interleukins ILs2.集落刺激因子類(lèi) colony stimulating factors CSFs3.腫瘤壞死因子類(lèi) tumor necrosis factors TNFs4.淋巴因子類(lèi) lymphokines5.化學(xué)趨化因子類(lèi) chemotactic factors6.生長(zhǎng)因子類(lèi) growth factors7.細(xì)胞粘附因子類(lèi) cell adhension molecules

3、總之：幾乎所有組成多細(xì)胞間復(fù)雜的生物信號(hào)語(yǔ)言中的各個(gè)元件，均屬此范疇,Classification,細(xì)胞因子：autocrine(自泌)paracrine(旁泌) 在局部起作用激素：endocrine(內(nèi)分泌)、經(jīng)血到遠(yuǎn)隔器官起作用相同點(diǎn)：細(xì)胞產(chǎn)生、分泌，作用受體，放大作用,細(xì)胞因子與激素的運(yùn)行機(jī)制不同,舉例 局部損傷、細(xì)胞產(chǎn)生因子、只對(duì)局部細(xì)胞產(chǎn)生影響，如象激素一樣入血，對(duì)全體細(xì)胞都產(chǎn)生影響，就麻煩

4、了。細(xì)胞因子種類(lèi)很多，作用廣泛，與細(xì)胞外基質(zhì)也有著密切的聯(lián)系，下面僅就常見(jiàn)的細(xì)胞因子作以簡(jiǎn)介,Wnt通路中的關(guān)鍵分子與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移,王恩華中國(guó)醫(yī)科大學(xué),研究背景 1,在中國(guó)肺癌的發(fā)生率在過(guò)去的30年里 上升了465%，死亡率居惡性腫瘤之首每年死于肺癌的患者約45萬(wàn)人，其中約有40萬(wàn)人死于肺癌的轉(zhuǎn)移因此揭示肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和尋找治療關(guān)鍵靶點(diǎn)，具有重要意義,研究背景 2,Wnt通路中的關(guān)鍵分子GSK-3B、APC和B-c

5、atenin與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系已有較多報(bào)道，而位于其上游的DVL和Axin是如何調(diào)控腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的則少有報(bào)道與B-catenin同一家族的p120ctn是否與Wnt通路有關(guān)尚不清楚已有報(bào)道p120ctn能與Kaiso結(jié)合，而Kaiso只有入核信號(hào)，沒(méi)有出核信號(hào)，那么p120ctn是否具有調(diào)節(jié)Kaiso核漿分布的作用，進(jìn)而影響腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移尚無(wú)報(bào)道,β-catenin在正常支氣管上皮細(xì)胞表現(xiàn)為膜表達(dá)，而在 NSCLC 中主要表現(xiàn)為細(xì)

6、胞漿或核內(nèi)的蓄積，這種蓄積與NSCLC 的低分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),1. Axin對(duì)NSCLC中β-catenin蓄積所起的作用,我們用SSCP和直接測(cè)序法檢測(cè)了100例NSCLC 中β-catenin第三外顯子突變情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)β-catenin 的第三外顯子無(wú)一例突變 Am J Clin Pathol. 2006, 125(4):534-541,是什么原因造成了β-catenin 在肺癌細(xì)胞中的蓄積？,我們發(fā)現(xiàn)Axin在NSCL

7、C中的表達(dá)明顯下調(diào),Axin的表達(dá)下調(diào)與NSCLC的不良預(yù)后明顯相關(guān),轉(zhuǎn)染Axin可明顯抑制肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和增殖能力,過(guò)表達(dá)Axin可使肺癌細(xì)胞中高表達(dá)的β-catenin出現(xiàn)明顯下調(diào),我們猜測(cè)：Axin的表達(dá)減少可能是導(dǎo)致β-catenin在NSCLC中蓄積的原因之一 Ann Surg Oncol 2007, 14: 3251-9,我們將新鮮的NSCLC組織經(jīng)1 gray X-ray照射后發(fā)現(xiàn)Axin的

8、蛋白和mRNA均出現(xiàn)了明顯的上調(diào)，同時(shí)Caspase-3的表達(dá)也出現(xiàn)了明顯的上調(diào),既然Axin有如此明顯的抑癌作用，如何上調(diào)Axin的表達(dá)呢？,因此， X-ray是否能上調(diào)Axin的表達(dá)及水平是判定NSCLC是否對(duì)X-ray治療敏感的有用指標(biāo),,X-ray 照射或轉(zhuǎn)染Axin都能上調(diào)肺癌細(xì)胞的凋亡率，轉(zhuǎn)染Axin加上X-ray照射可使凋亡率明顯增加,Axin誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么？轉(zhuǎn)染Axin或不與p53結(jié)合的△-Axin，再用p

9、53抑制劑PFT-α或JNK抑制劑SP處理,,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Axin通過(guò)p53和/或JNK通路促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡 Int J Radio Oncol 2009,我們意外地發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)Axin可以下調(diào)TCF-4的轉(zhuǎn)錄，但機(jī)制不清,已有文獻(xiàn)報(bào)道：β-catenin具有促進(jìn)TCF-4轉(zhuǎn)錄，而p53具有抑 制TCF-4轉(zhuǎn)錄的能力

10、 而Axin既具有下調(diào)β-catenin的能力，又有激活 p53的能力因此，Axin既有可能是通過(guò)β-catenin，也有可能是通過(guò)p53下調(diào)TCF-4的轉(zhuǎn)錄,我們?yōu)榱颂接戇@個(gè)問(wèn)題，構(gòu)建了Axin不能與β-catenin結(jié)合，Axin不能與p53結(jié)合，以及Axin既不能與β-catenin也不能與p53

11、結(jié)合的突變體,轉(zhuǎn)染Axin在下調(diào)β-catenin 表達(dá)的同時(shí)可明顯下調(diào)TCF-4的表達(dá)，但轉(zhuǎn)染Axin △β-ca即保留了p53作用時(shí)卻不能下調(diào)β-catenin和TCF-4，但由于BE1細(xì)胞系是p53突變型細(xì)胞系，因此尚不能確定Axin是否具有通過(guò)p53下調(diào)TCF-4的作用因此，我們向BE1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了野生型p53，結(jié)果顯示單純轉(zhuǎn)染野生型p53可以下調(diào)TCF-4，但共轉(zhuǎn)染Axin △β-ca和p53后TCF-4并沒(méi)有出現(xiàn)進(jìn)一步下調(diào)

12、，表明Axin并不能加強(qiáng)p53下調(diào)TCF-4的作用,,,,,,,,Mol Cancer. 2010 Feb 2;9:25.,二、DVLs對(duì)Wnt通路的調(diào)節(jié)作用 非小細(xì)胞肺癌組織中存在DVL-1和3的過(guò)表達(dá)，其表達(dá)與高TNM分期、低分化有關(guān),Dvls在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)總是高于原發(fā)灶Dvl-1 和Dvl-3的過(guò)表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的不良預(yù)后相關(guān),Lung Cancer (2008) 62, 181—192,我們發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)Dvl-

13、1可以明顯的上調(diào)β-catenin的蛋白水平，同時(shí)激活TCF-4依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄活性，表明Dvl-1主要參與經(jīng)典的Wnt通路而過(guò)表達(dá)Dvl-3卻不能明顯上調(diào)β-catenin水平和TCF-4依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄活性但無(wú)論過(guò)表達(dá)Dvl-1還是Dvl-3均能明顯增強(qiáng)肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,我們發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染Dvl-3能明顯上調(diào)肺癌細(xì)胞中磷酸化的 JNK和p38水平,那么Dvl-3是怎樣促進(jìn)肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的呢？,

14、Molecular carcinogenesis (2010 ),并且明顯下調(diào)RhoA的活性,上調(diào)Cdc42和Rac1活性,由于小GTP酶活性和JNK、p38均與非經(jīng)典的Wnt通路有關(guān)，因此我們可以得出如下結(jié)論：Dvl-1主要通過(guò)經(jīng)典Wnt通路而Dvl-3主要通過(guò)非經(jīng)典Wnt通路促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,我們發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)DVL-3上調(diào)p120mRNA水平,但是轉(zhuǎn)染Dvl-1卻不能,轉(zhuǎn)染Dvl-3可以增加Pax6的表達(dá),無(wú)論是應(yīng)用Pax

15、6的單克隆抗體阻斷，還是用siRNA敲出Pax6，都可以明顯的下調(diào)p120ctn的轉(zhuǎn)錄,ChIP分析證實(shí)了轉(zhuǎn)錄因子Pax6可以直接與p120ctn的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,上述結(jié)果說(shuō)明：Dvl-3調(diào)節(jié)Pax6，而Pax6又與p120ct的啟動(dòng) 子區(qū)作用，進(jìn)而啟動(dòng)了p120ctn的轉(zhuǎn)錄

16、 但Dvl-3是如何上調(diào)Pax6的尚不清楚,上述結(jié)果提示我們p120ctn通過(guò)Dvl-3與Wnt通路聯(lián)系p120ctn與Wnt 通路之間還存在哪些聯(lián)系呢？,3. p120ctn 在肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，及其 與Wnt通路的聯(lián)系,p120ctn在肺癌中的異常表達(dá)及意義,P120ctn的異常表達(dá)與低分化，高TNM分期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān) Histol Histopathol 2006, 2

17、1:841-847 APMIS 2007, 115: 848–56,肺癌中p120ctn-1A、3A和E-cadherin的表達(dá)下調(diào)與small GTP酶過(guò)表達(dá)相關(guān),Lung Cancer 63 (2009) 375–382,敲除p120ctn后，Pulldown結(jié)果證實(shí)cdc42、Rac1活性增強(qiáng)，但RhoA活性下降

18、,E-cadherin的蛋白表達(dá)下降,敲除p120ctn后S期細(xì)胞比例增加、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng),Cancer Sci 2009 , 100:441–448,,過(guò)表達(dá)p120-1A下調(diào)Rac1活性而過(guò)表達(dá)p120-3A下調(diào)Cdc42活性,p120ctn-1A 和 3A都可抑制肺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移 但是p120ctn-1A 抑制肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力強(qiáng)于3A而p120ctn-3A 抑制增殖的能力明顯

19、強(qiáng)于1A,,Exp Cell Res 2009, 315: 890-898,我們發(fā)現(xiàn)：,轉(zhuǎn)染 p120-1A可以明顯的上調(diào) β-catenin的蛋白和mRNA的表達(dá),我們得出以下結(jié)論: p120ctn-1A通過(guò)β-catenin 與 Wnt通路關(guān)聯(lián),用siRNA 敲出p120ctn后β-catenin 的蛋白和mRNA

20、水平出現(xiàn)明顯下調(diào),Kaiso是如何出核的？,4. Kaiso 在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,Kaiso 過(guò)表達(dá)與NSCLC不良預(yù)后相關(guān),,BMC Cancer. 2009, 9: 178,無(wú)論是在肺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，Kaiso 和p120ctn總是呈現(xiàn)同樣的表達(dá)部位,免疫共沉淀證實(shí)，無(wú)論在肺癌組織還是細(xì)胞系中，Kaiso和p120都可以形成復(fù)合體,干擾p120后Kaiso核內(nèi)增多，核漿蛋白分離進(jìn)一步驗(yàn)證Kaiso在核內(nèi)分布增多,說(shuō)明：

21、p120無(wú)論在細(xì)胞漿還是在核內(nèi)，都能與Kaiso結(jié)合,轉(zhuǎn)染p120ctn-3A，Kaiso和p120ctn主要為漿表達(dá)LMB阻斷p120ctn出核則p120ctn和Kaiso主要位于核內(nèi)轉(zhuǎn)染p120-NLS-3A入核序列質(zhì)粒則p120ctn位于核內(nèi)，Kaiso也位于核內(nèi),我們得出結(jié)論：p120ctn-3A影響Kaiso的核漿分布，Kaiso的出核 依賴(lài)與p120ctn-3A

22、的存在,Exp Cell Res (revised),結(jié)論：,Axin、 DVL、 p120ctn、Kaiso在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用β-catenin在NSCLC中蓄積是由于Axin表達(dá)下調(diào) 所致，過(guò)表達(dá)Axin或用X線(xiàn)照射肺癌組織上調(diào)Axin的表達(dá)，都可明顯抑制肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡P120與Wnt通路中的關(guān)鍵分子Dvl-3和β-catenin相關(guān)Kaiso是通過(guò)與p120-3A結(jié)合被攜帶出核的,,,Pu

23、blished ariticles (directly relative),1. Axin downregulates TCF-4 transcription via beta-catenin, but not p53, and inhibits the proliferation and invasion of lung cancer cells. Mol Cancer. 2010 Feb 2;9:25.

24、 2. Cytoplasmic Kaiso is associated with poor prognosis in non-small cell lung cancer. BMC Cancer. 2009 Jun 9;9:178.

25、 3. Kaiso is expressed in lung cancer: its expression and localization is affected by p120ctn. Lung Cancer 2010, 67(2):205-215. 4. X-ray in

26、duces non-smal cell lung cancer apoptosis by up regulating Axin expression. Inter J Rad Onc. Biol. Phys. 2009,75(2): 518-265. Ablation of p120-Catenin Enhances Invasion and Metastasis of Human Lung Cancer Cells.

27、 Cancer Sci. 2009, 100(3):441-448. 6. Abnormal expression of p120-catenin, E-cadherin, and small GTPases is significantlyassociated with malignant phen

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29、ncer Cells. Exp cell res. 2009, 315(5):890-898.,8. Dishevelled family proteins are expressed in non-small cell lung cancer and function differentially on tumor progression. Lung Cancer .2008;62 (2): 181

30、-19 9. Reduction of p120(ctn) isoforms 1 and 3 is significantly associated with metastatic progression of human lung cancer. APMIS. 2007, 115(7):848-56. 10. Overexpression of Axin Downregulates TCF-4 a

31、nd Inhibits the Development of Lung Cancer. Ann Surg Oncol. 2007, 14(11):3251-9. 11. Abnormal beta-catenin and reduced axin expression are associated with poor differentiation and progression in

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33、n in lung cancer. Histol Histopathol. 2006, 21(8):841-847. 13. Expression of T cell factor-4 in non-small cell lung cancer. Chin Med J . 2005, 118(2):1

34、36-40. 14. Connexin 43 recruits E-cadherin expression and inhibit

35、s the malignant behaviour of lung cancer cells. Folia Histochem Cytobiol. 2008;46(3):315-21. 15. Expression of serine threonine kinase 15 is associated with poor differentiation in lung

36、 squamous cell carcinoma and adenocarcinoma. Pathol Int. 2006, 56(7):375-380.,是由細(xì)胞產(chǎn)生或分泌，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)，分化等具有顯著調(diào)節(jié)作用的多肽目前已發(fā)現(xiàn)的生長(zhǎng)因子已有50多種，并有新的因子的報(bào)道，其中部分生長(zhǎng)因子的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性已基本搞清，有的已商品化，并在臨床上得以應(yīng)用,一、生長(zhǎng)因子growth factor,意義 對(duì)各類(lèi)生長(zhǎng)因子的廣泛深

37、入的研究，將有助于人類(lèi)對(duì)胚胎發(fā)育、組織與器官的形成等基本生物學(xué)問(wèn)題的認(rèn)識(shí)（如干細(xì)胞）同時(shí)對(duì)腫瘤，血管疾病的診斷治療以及對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)技術(shù)的提高等都將產(chǎn)生巨大的影響,（一）生長(zhǎng)因子分類(lèi) 生長(zhǎng)因子種類(lèi)繁多，來(lái)源復(fù)雜，結(jié)構(gòu)各異，生物學(xué)作用與其它細(xì)胞因子間又有交叉，因此，單靠一種分類(lèi)方法是不足以反應(yīng)生長(zhǎng)因子的本質(zhì)和作用機(jī)制的。目前的分類(lèi)方法有以下幾種,1.根據(jù)生物學(xué)效應(yīng)①細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)因子②細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子——生長(zhǎng)抑素注意 同一種生長(zhǎng)

38、因子，對(duì)不同的組織細(xì)胞或同一種組織細(xì)胞的不同生長(zhǎng)階段，可有相反的作用 如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）早期纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)↑，晚期起抑制作用，對(duì)細(xì)胞的增殖既有促進(jìn)又有抑制,2.根據(jù)理化特性①單鏈多肽——表皮生長(zhǎng)因子EGF②含糖鏈的多肽二聚體蛋白——PDGF③糖蛋白——集落刺激因子CSF和白細(xì)胞介素IL,3.根據(jù)其作用細(xì)胞類(lèi)型 ①單價(jià)因子——一種因子只作用于一類(lèi)細(xì)胞 ②多價(jià)因子——一種因子可作用于不同類(lèi)型細(xì)胞,4.按其作用效果

39、①增殖因子——IL-2、IL-3、GM-CSF、BCGF②分化因子——IL-2、IL-3、BCGF、IFN③效應(yīng)因子——TNF,（二）生長(zhǎng)因子作用的靶細(xì)胞范圍 隨著對(duì)各類(lèi)生長(zhǎng)因子的認(rèn)識(shí)不斷加深，發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)因子的作用和作用范圍都較原來(lái)發(fā)現(xiàn)時(shí)廣得多，寬得多舉例 在免疫細(xì)胞中分離出來(lái)IL-I，起初認(rèn)為是調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的信號(hào)分子，后來(lái)發(fā)現(xiàn)，還對(duì)角質(zhì)細(xì)胞、f母細(xì)胞，星狀細(xì)胞，軟骨細(xì)胞有作用,另外 從非免疫細(xì)胞中分離出來(lái)的轉(zhuǎn)

40、化生長(zhǎng)因子TGF-β卻有著很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，在抑制T細(xì)胞功能上要比環(huán)孢霉素至少?gòu)?qiáng)10倍。同時(shí)也有很強(qiáng)的抑制B細(xì)胞合成免疫球蛋白的作用。因此，它是在器官移植方面，一個(gè)非常好的生物制劑,（三）生長(zhǎng)因子作用的處境依賴(lài)性 生長(zhǎng)因子的作用及作用強(qiáng)度是視其周?chē)h(huán)境條件而定的，即依賴(lài)于受體和其它效應(yīng)分子的存在舉例TGF-β在EGF存在時(shí)，對(duì)f母細(xì)胞的生長(zhǎng)起抑制作用TGF-β在PDGF存在時(shí)，對(duì)f母細(xì)胞的生長(zhǎng)起促進(jìn)作用另外TNF在IL-

41、1和TGF-β存在時(shí)才發(fā)揮作用因此要辯證地看待生長(zhǎng)因子作用的廣泛性、可變性,（四）生長(zhǎng)因子與原癌基因產(chǎn)物的關(guān)系 絕大多數(shù)原癌基因產(chǎn)物已被證明都是與細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖、分化有關(guān)的蛋白質(zhì)?，F(xiàn)已搞清，生長(zhǎng)調(diào)控基因與原癌基因，在很大程序上就是一回事舉例 sis基因表達(dá)產(chǎn)物與PDGF的B鏈有92%的同源性，erbB基因產(chǎn)物與EGF受體高度同源所以，在一定程度上講，癌蛋白就是生長(zhǎng)因子、受體、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子或DNA結(jié)合蛋白,（五）生長(zhǎng)

42、因子的臨床應(yīng)用 生長(zhǎng)因子參與了炎癥、血管新生、損傷修復(fù)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在腫瘤形成中起關(guān)鍵作用的生長(zhǎng)因子，在炎癥、損傷修復(fù)中，卻是一種正常的反應(yīng)性的生理表達(dá)，這種表達(dá)也是至關(guān)重要的,目前應(yīng)用①TGF-β用于抑制免疫反應(yīng)和排斥反應(yīng)②bFGF用于抑制腫瘤內(nèi)血管形成③GM-CSF用于再障或放化療后 幾乎每種生長(zhǎng)因子都可用基因重組方法生產(chǎn)，未來(lái)的10年將是生長(zhǎng)因子從基礎(chǔ)到臨床過(guò)渡的10年,幾種常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子：1.血小板源生長(zhǎng)

43、因子 platelet-derived growth factor PDGF，最初是在血小板中發(fā)現(xiàn)的一種促分裂劑1)這一名稱(chēng)不夠準(zhǔn)確，因?yàn)檠“蹇僧a(chǎn)生許多生長(zhǎng)因子,①血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子vascular endothelial growth factor，VEGF②表皮生長(zhǎng)因子epidermal growth factor，EGF③轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子transforming growth factor-β，TGF-β,2）另外，許

44、多細(xì)胞都可產(chǎn)生PDGF如VSMC、表皮細(xì)胞、皮膚f母細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞PDGF分子量為28-35KDa，由A、B兩條鏈組成，B鏈與sis原癌基因編碼蛋白有92%同源性體內(nèi)存在形式：PDGF-AA PDGF-BB PDGF-ABA鏈與A受體結(jié)合B鏈即能與B又能與A結(jié)合購(gòu)買(mǎi)抗體時(shí)應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)的組織或細(xì)胞上是否存在被檢受體,生物作用①誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，是一種強(qiáng)促有絲分裂劑②趨化作用

45、，引起間充質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，定向遷移及釋放顆粒③引起Ⅲ-Ⅴ型膠原的合成和分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì),PDGF的臨床意義1)創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)口處血小板沉積→PDGF→中性WBC、單核/巨噬C內(nèi)移清除異物→cap f母細(xì)胞、SMC→內(nèi)移、增生→肉芽→填補(bǔ)傷口cap f母細(xì)胞、SMC釋放PDGF→C.T增生、增加膠原沉積→愈合,舉例 Knighton采用病人自身血小板釋放物質(zhì)（PDGF），處理因糖尿病出現(xiàn)的難愈合的皮下潰瘍，使瀕于

46、截肢危險(xiǎn)的潰瘍得到了愈合,2)動(dòng)脈粥樣硬化形成及血管再狹窄動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 血小板增殖→內(nèi)膜增厚→SMC收縮型→分泌型→膠原沉積→硬化　　PTCA血管移植,→PDGF→VSMC游走→分裂,,→PDGF→SMC游走、增殖→再狹窄,,restenosis,設(shè)想①用單克隆抗體中和局部產(chǎn)生的PDGF　在動(dòng)物及細(xì)胞培養(yǎng)上獲得成功，但用于人體，給藥途徑受到限制②antisense RNA局部轉(zhuǎn)染，可以研究探討③抑制疤痕形

47、成→中和抗體和反義RNA技術(shù)等,但應(yīng)注意 PDGF的作用，不是孤立的，它是在其它細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子也參與細(xì)胞反應(yīng)的復(fù)雜環(huán)境中發(fā)揮其作用的，也就是說(shuō)，抑制了PDGF的作用只是一個(gè)方面，而其它的因子仍然在起作用，在判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要綜合進(jìn)行考慮,2.纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子 fibroblast growth factor 最初是在腦和垂體中發(fā)現(xiàn)，對(duì)纖維母細(xì)胞有促分裂作用而命名的。FGF本身種類(lèi)繁多，由于制備方法和來(lái)源不同給予許

48、多特殊命名，因此，極易混淆。如肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子等。多數(shù)人認(rèn)為，按其等電點(diǎn)分為兩類(lèi)比較合適，即aFGF和bFGF,FGF與原癌基因hst，int-2編碼的蛋白有很大同源性來(lái)源f母c，血管內(nèi)皮C、SMC，粒C，腎上腺皮質(zhì)C、星形膠質(zhì)C，腫瘤細(xì)胞等,生物作用①?gòu)?qiáng)的血管生長(zhǎng)因子，誘發(fā)新生cap作用②促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和組織修復(fù)③參與胚胎發(fā)育和分化④刺激外周神經(jīng)再生和營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)的作用⑤調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用,FGF的臨床意義①創(chuàng)傷愈合FGF用

49、于治療胃潰瘍方面的嘗試最多，但由于FGF不穩(wěn)定，全身投與很難達(dá)到胃潰瘍部位，直接口服由于胃酸的破壞使其作用大大減弱辦法：FGF可與肝素結(jié)合，不僅穩(wěn)定，且耐酸、耐熱，可獲較好的效果,,②腫瘤治療　實(shí)體腫瘤無(wú)一例外均能產(chǎn)生FGF　　　　　　autocrine　　　autointra-factor　　　　　paracrine　→　血管生長(zhǎng),自身增殖,,舉例①利用bFGF單抗中和FGF，達(dá)到對(duì)腫瘤的治療，在動(dòng)物體內(nèi)獲成功②蘇拉明阻

50、止bFGF與受體結(jié)合，達(dá)到了對(duì)腫瘤的抑制,設(shè)想①用人的bFGF單抗和受體單抗，結(jié)合介入局部給藥，或放入支架制成緩釋劑②結(jié)合介入，局部給予反義RNA-基因治③內(nèi)皮支架基因表達(dá),③促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的形成 大面積心梗最令人擔(dān)心的是猝死，但經(jīng)搶救免于一死，也擔(dān)心心臟破裂或室壁瘤的出現(xiàn)。如何加強(qiáng)梗死部位的強(qiáng)度，最好的方式就是能盡快機(jī)化。而bFGF是一種強(qiáng)的新生Cap生成因子。國(guó)外在狗模型中證實(shí)給梗死部位血管內(nèi)注入bFGF，很快使梗死面

51、積縮小，組織學(xué)上有較多的側(cè)枝循環(huán)的出現(xiàn)。說(shuō)明FGF用于治療心梗方面可望成為可能,④血管再狹窄PTCA→bFGF PDGF→SMS增生→restenosis設(shè)想：狗+介入球囊→心梗模型、冠狀血管狹窄　　　　　　模型放置→注入bFGF——心?？s小 →注入bFGF抗體→狹窄減輕反義RNA⑤周?chē)窠?jīng)再生 脊髓損傷+bFGF 促進(jìn)神經(jīng)纖維膜細(xì)胞生長(zhǎng)，軸突長(zhǎng)入,3.表皮生長(zhǎng)因子 epidermal growth fact

52、or EGF 是一個(gè)較早被發(fā)現(xiàn)的生長(zhǎng)因子，EGF基因與V-mos原癌基因有部分同源性，EGF受體基因與erbB-1基因有75%以上同源性，在人體主要存在于各種體液或分泌物中，促進(jìn)愈合，其中前列腺液、乳液中最高。除表皮細(xì)胞外，對(duì)許多細(xì)胞都有促進(jìn)生長(zhǎng)作用,應(yīng)用①細(xì)胞培養(yǎng)——培養(yǎng)液中加入EGF②角膜損傷修復(fù)：在動(dòng)物角膜上早獲成功，將EGF制成點(diǎn)眼液，使角膜燒傷無(wú)法愈合，只留光感的患者，幾周后恢復(fù)正常,③皮膚創(chuàng)傷愈合1)

53、植皮病人，加用EGF明顯達(dá)到了促進(jìn)創(chuàng)面愈合的目的2)EGF體外培養(yǎng)自體表皮或表皮細(xì)胞，繁殖到一定數(shù)量后，將培養(yǎng)好的表皮植入創(chuàng)面，或?qū)⑴囵B(yǎng)的表皮細(xì)胞象播種一樣撒在創(chuàng)面，不僅加快愈合，也減少了疤痕產(chǎn)生,二、白細(xì)胞介素interleukins 為淋巴因子家族中一類(lèi)，是聯(lián)系白細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞因子。共有18種，IL1-13研究的比較多，IL14-18是最近才被命名的主要生物學(xué)作用：1.參與免疫反應(yīng) 在移植物排斥反應(yīng)、哮喘疾病發(fā)生

54、、腫瘤免疫中均起重要作用它們的作用相互協(xié)同而加強(qiáng)如IL-1 BC增殖、分化、產(chǎn)生抗體 TC產(chǎn)生IL-2及IL-2受體 IL-4,5 可協(xié)同加強(qiáng)IL-1對(duì)BC的作用,2.參與炎癥反應(yīng)IL-1 使機(jī)體發(fā)熱，外周WBC升高，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，增進(jìn)WBC與之粘附IL-8 是中性WBC趨化因子和激活因子 IL-12 是T、NK細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞的促進(jìn)因子，具有抗寄生蟲(chóng)、病毒和細(xì)菌和抗腫瘤等功能,3.

55、參與損傷修復(fù) IL-1 與酸性FGF有同源性，促進(jìn)血管新生 IL-2 可使f母C數(shù)量增加,4.抗腫瘤作用 IL-12 使NK細(xì)胞激活 使CD8+T細(xì)胞→細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞CTL 這已在IL-12轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究中得到證實(shí)IL-2 使T細(xì)胞→淋巴細(xì)胞激活的殺傷細(xì)胞　 LAK細(xì)胞 從外周血分離TC、經(jīng)IL-12、2作用后，

56、 回輸給病人→抗 腫瘤作用,白細(xì)胞介素功能很多，作用極強(qiáng)，相互間有重疊，誘導(dǎo)交叉，協(xié)同和拮抗，需要進(jìn)一步研究的方面較多，但抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)控作用是肯定的。目前，絕大多數(shù)IL可用基因工程方法生產(chǎn)，相信不久將廣泛用于臨床為人類(lèi)造福,三、細(xì)胞粘附分子 cell adhension molecules CAMSConcept:是一群在多種細(xì)胞上表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞間 粘附和具有傳遞信息作用的糖蛋

57、白物質(zhì)分為以下5類(lèi)鈣離子依賴(lài)型蛋白家族cadherin family CF 主要參與特定組織和器官細(xì)胞間粘附，胞內(nèi)段與細(xì)胞骨架聯(lián)結(jié)，因此較牢固,可以想象：如肝細(xì)胞間無(wú)此種粘附，就不會(huì)有肝這個(gè)器官，肝C將分布周身癌細(xì)胞：如果CF粘附表達(dá)下降，就會(huì)出現(xiàn)浸襲和轉(zhuǎn)移,2.整合蛋白家族integrin family, IF IF多為跨膜結(jié)構(gòu)的受體型糖蛋白，主要參與細(xì)胞間，細(xì)胞與外基質(zhì)間的粘附和信息傳遞,3

58、.免疫球蛋白超家族 immunoglobulin super family IgSF 免疫細(xì)胞間粘附的分子某些細(xì)胞因子受體（如PDGF受體） 主要組織相容性抗原（MHC）作用①免疫調(diào)控②細(xì)胞間信息傳導(dǎo)③器官移植排斥反應(yīng),均屬I(mǎi)gSF,,4.選擇蛋白家族selectin family SF SF是一類(lèi)高糖基化，單鏈膜糖蛋白參與細(xì)胞間 選擇性識(shí)別，粘附作用 ①淋巴細(xì)胞“歸巢”

59、homing ②WBC向炎癥部位移動(dòng) ③腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移肺癌易→腎上腺、腦甲狀腺癌、腎癌、前列腺癌→骨等可能與此處的血管內(nèi)C的SF有關(guān),5.其它CAMs尚未分類(lèi)的CAMs 其中，CD44、Catenin倍受重視它是淋巴細(xì)胞“歸巢”受體①指導(dǎo)LC特異的“歸巢”②向炎癥組織移動(dòng)、定位③與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān),研究熱點(diǎn) 心、腦外科，急診、麻醉器官移植等多臟器的缺血再談注損傷中，粘附分子起重要作用。使中性WBC與血管內(nèi)

60、皮C，心肌細(xì)胞的粘附造成損傷 應(yīng)用粘附分子單抗、阻斷這一損傷，收到了一定療效,巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的TNF命名為T(mén)NF-αTC產(chǎn)生的淋巴毒素，命名為T(mén)NF-β而巨噬細(xì)胞是產(chǎn)生TNF的主要細(xì)胞TNF的生物學(xué)效應(yīng)較多，如炎癥、壞死等，但最引人關(guān)注的是抗腫瘤，無(wú)論是在體內(nèi)，還是體外，都有很強(qiáng)的殺傷或抑制腫瘤生長(zhǎng)作用,四、腫瘤壞死因子 tumor necrosis factor, TNF,以前生產(chǎn)的TNF主要問(wèn)題是副作用太大——如休克

61、等，目前美國(guó)、日本等采用重組人的TNF已進(jìn)入二期臨床我國(guó)也已能生產(chǎn)重視人的TNF　　臨床應(yīng)用表明：對(duì)大多數(shù)晚期腫瘤患者，具有客觀療效,五、細(xì)胞因子的檢測(cè)方法1.體液中的——生化法、提純、定量、比較難 放免法　可嘗試免疫PCR法，抗體上聯(lián)無(wú)關(guān)的DNA片段擴(kuò)增2.免疫組化法 定位、半定量或Image Analysis Syston 或流式細(xì)胞儀定量3. Western blot 蛋白定量4. RT-PCR法——測(cè)mRNA

62、5. 原位雜交 cDNA探針or RNA探針6．Northern雜交——測(cè)RNA7．PCR-SSCP或PCR后測(cè)序，查點(diǎn)突變8. 基因芯片和組織芯片,思考題1.何為細(xì)胞因子，細(xì)胞因子都包括哪些？2.細(xì)胞因子與激素的作用有何不同？3.FGF的生物學(xué)作用是什么？4.細(xì)胞粘附分子的分類(lèi)？5.PDGF、FGF、EGF都分別與哪些原癌基因具有同源性？6.凋亡概念與壞死區(qū)別？凋亡的檢測(cè)方法？7.什么是細(xì)胞外基質(zhì)？都包括哪些主