顧康生細胞因子誘導的殺傷細胞cik與腫瘤治療

1、細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)與腫瘤治療,顧康生,主要內(nèi)容,,,1.CIK發(fā)展概況,,,,2.CIK基礎介紹,3.CIK的臨床應用,4.CIK治療存在的問題,5.CIK治療前景,schmidt R報道CIK細胞的存在,Negrin R S報道CIK細胞治療惡性腫瘤動物實驗結果,國內(nèi)北京大學人民醫(yī)院首先報道CIK細胞治療白血病,國內(nèi)有148篇CIK研究報道，但以基礎研究為主，臨床應用報道較少。,1986年,1994年,1996年,200

2、6年止,CIK發(fā)展概況,CIK發(fā)展概況,到目前為止，國內(nèi)有21個省和直轄市均有關于CIK的文獻報道，但安徽省是空白。而國外還處于科研階段，中國是世界上唯一批準CIK細胞治療用于臨床的國家。,CIK發(fā)展概況,美國“國際腫瘤生物/免疫治療及基因治療”2000年年會總結報告中指出：“生物治療是目前知道的唯一一種有望完全消滅癌細胞的治療手段，21世紀是腫瘤生物治療的時代”。因而人們從沒有放棄對生物治療的探索。,,,CIK細胞基礎介紹,CIK最初

3、是指在正常人體外周血中只占1～5%的CD3+CD56+的T淋巴細胞?目前國內(nèi)外制備的用于過繼免疫治療的CIK細胞,實際上是體外擴增出的以CD3+CD56+?CD3+CD8+為主的異質性細胞群,來源于人外周血單個核細胞，并在體外經(jīng)CD3McAb和IFN-r、IL-2等多種細胞因子共培養(yǎng)后獲得,,,主要效應細胞的表面標志為CD3+CD56+,具有廣泛的非MHC限制的極強的溶瘤活性?,,,,,,,,,對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感,CIK作用特點

4、,,抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應細胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特點,,CIK細胞雖然以CD3＋CD56+細胞為主要效應細胞，但卻沒有T淋巴細胞殺傷時的MHC限制性。對于多種腫瘤細胞系（NK敏感的K562和NK不敏感的Hela、HL60、人T細胞急淋白血病細胞系CCRF-CEM，人淋巴瘤細胞系OCI-LY8/TAM53，人結腸癌細胞系HT-29、CR75、人腎癌細胞系A704）和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強大的殺傷活性。,1抗瘤譜廣,,CIK

5、細胞在培養(yǎng)過程中加入IFN-r 、IL-la、抗CD3 McAb、IL-2等因子后, 細胞增殖速度迅速加快，遠超過LAK細胞 。在培養(yǎng)第22天增殖曲線達頂峰，約增加100倍，其中CD3＋CD56＋細胞不僅絕對數(shù)量增加 1000倍以上．且所占百分比也大幅上升，至培養(yǎng)28-30天時達平臺期，細胞毒活性亦達峰值，而LAK細胞培養(yǎng)前后數(shù)量沒有明顯增加。,2增殖速度快,CIK作用特點,,3殺瘤活性高,CIK細胞是以CD3＋CD56＋ T細胞為主的

6、異質細胞群，大量體內(nèi)外實驗證實CIK細胞較LAK細胞具備更強大的殺瘤活性，而且其體內(nèi)殺瘤細胞毒性的維持不必依賴大劑量外源性IL-2的持續(xù)給予。體外實驗中，等數(shù)量的CIK細胞比LAK細胞對腫瘤細胞系的殺傷能力稍高或相近，但因CIK細胞在培養(yǎng)過程中CD 3＋CD56+效應細胞增長迅速，故CIK細胞的總殺傷單位為LAK細胞的73倍甚至更高，其殺傷效率顯著高于LAK細胞,CIK作用特點,,WOLF用阿霉素和長春新堿誘導多重耐藥細胞系K562／

7、DOX和CCRF-CEM-VBI 發(fā)現(xiàn)CIK細胞對化療藥物敏感的親本細胞和不敏感的轉化細胞均具有強大的殺傷活性，兩者比較無差別。,,4,對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感,CIK作用特點,,,5,對正常骨髓造血前體細胞毒性小,Scheffold 通過CFU-GM形成實驗檢測CIK細胞對骨髓造血前體細胞的影響發(fā)現(xiàn)CIK細胞對K562細胞的殺傷強度高達3級，但對GM-CFU僅有不足1級的抑制。HoIye也證實CIK細胞對正常髓系克隆生成幾乎沒有

8、影響，只是對紅系的生成顯示出輕度抑制。,CIK作用特點,,已證明過繼免疫治療失敗的一個重要原因是腫瘤細胞表面表達的某些蛋白(主要是Fasl)能誘導過繼效應細胞凋亡，而CIK細胞雖然在Fas被占據(jù)后會引起少量細胞凋亡，但對其殺瘤細胞毒性沒有明顯影響 。,,6,抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應細胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特點,LAK細胞基礎介紹,來源于由IL-2激活的淋巴細胞，活性必須IL-2維持，而大劑量IL-2有嚴重的不良反應,其表型標

9、志尚未確定，但存在異質性，即有幾種表型。,其識別和殺傷作用是非特異性和MHC非限制性，對自體腫瘤細胞、同種或異種腫瘤細胞均有殺傷作用。,體外擴增較困難，臨床應用有效性不高，適應范圍較窄。,TIL細胞基礎介紹,來源于腫瘤組織中分離出的淋巴細胞，并在體外經(jīng)IL-2誘導培養(yǎng)擴增，體外抗腫瘤的活性是LAK的50~100倍。,TIL表達CD3＋CD8＋或CD3 ＋CD4＋標志,腫瘤殺傷活性為MHC限制性，即為自體腫瘤特異性殺傷細胞。,TIL的制備

10、困難，要制備出臨床治療量的細胞數(shù)必須獲取患者的腫瘤組織，并需要在體外培養(yǎng)3~6周，而擴增治療所需細胞數(shù)有限，且離體TIL易發(fā)生活性改變。,,,,CIKCell,TILCell,LAK Cell,,,,,來源,制備,抗瘤活性,副作用,外周血單個核細胞+抗CD3單抗+IL-2、IFN,外周血單個核細胞+IL-2,腫瘤組織內(nèi)淋巴細胞+IL-2,可大量擴增,不易大量擴增,細胞來源困難、不易擴增,最強、廣譜,最差，狹窄,次之，特異性,低,低

11、,較大,CIK、LAK、TIL比較,,第一天,第二天,每八天,抽患者外周血30~50mL,分離收集單個核細胞，加入培養(yǎng)液及1 000U／ml IFN-r, 100U／ml IL-1 20µL,加入1 000U／ml IL-2µL、50ng／ml的CD3單抗30µL。置37°C 5％的C02條件下培養(yǎng),,,,補加IL-2的同時再補加CD3單抗15ul/ml,CIK制備方法,,,CIK制備回輸,培養(yǎng)兩

12、周后開始收集CIK細胞，生理鹽水洗滌3次，加入10%人血白蛋白、300U IL-2，用生理鹽水配成100ml后靜脈回輸，隔天回輸1次，分3次輸完，每次回輸109細胞以上，回輸前均作菌檢及細菌培養(yǎng)。,第0天、第七天、及第十四天取細胞用臺盼藍拒染法記數(shù)，第15天收獲細胞用FCM測定CD3+CD56+細胞百分數(shù),CIK制備回輸,CIK可來源自體、異體和臍血。,,,,分泌多種細胞因子。不僅抑制腫瘤生長；同時通過調節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細胞,釋放

13、顆粒酶、穿孔素而裂解靶細胞,誘導腫瘤細胞凋亡及壞死,,,,殺傷腫瘤細胞,CIK作用機制,CIK作用機制,,,適應癥,,,禁忌癥,放化療誘導緩解后的腫瘤患者 多藥耐藥的腫瘤細胞骨髓移植后免疫治療晚期腫瘤病人,CIK細胞對化療藥物敏感，不能與化療同時應用IL-2過敏患者，不能用CIK細胞治療。,臨床應用CIK治療的適應癥與禁忌癥,放化療誘導緩解后的腫瘤患者,,,01,CIK細胞可以在不損傷機體免疫系統(tǒng)結構和功能的前提下，直接殺傷腫瘤

14、細胞，調節(jié)和增強機體的免疫功能，因而成為腫瘤手術、放療、化療的重要輔助手段。在放療、化療后間隔2～4周，機體免疫力有所恢復時，輸入CIK細胞，可提高腫瘤患者的緩解率 。在清除微小殘留病灶方面，CIK細胞也發(fā)揮著重要作用。,臨床應用CIK治療的適應癥,,,02,對多藥耐藥腫瘤細胞的影響,腫瘤細胞對藥物的耐受性是許多惡性腫瘤治療的主要障礙Schmidt Wolf等 研究證實對柔紅霉素耐藥的K562細胞對CIK細胞較敏感，這表明CIK細胞

15、對惡性克隆形成的抑制作用與多藥耐藥基因的表達無關，這一發(fā)現(xiàn)為克服化療誘導的藥物耐藥提供了一個有效的治療前景。,臨床應用CIK治療的適應癥,,03,,骨髓移植后免疫治療,骨髓移植可以使白血病患者得到根治，但無論是異體移植或自體骨髓移植，都存在一定的復發(fā)率。CIK細胞從白血病患者體內(nèi)取出培養(yǎng)后，在體內(nèi)外有很強的殺傷K562細胞、裂解急性髓系白血病細胞的作用，可提高自體移植后免疫治療作用，降低復發(fā)率。,臨床應用CIK治療的適應癥,,04,,

16、晚期腫瘤病人,傳統(tǒng)的手術，放、化療無法耐受，應用CIK細胞治療可以改善生活質量，延長生存期。,臨床應用CIK治療的適應癥,,,,,目的：觀察放化療后的腫瘤患者回輸CIK細胞后生活質量及細胞免疫功能變化，探討CIK細胞回輸對放化療后的腫瘤患者的治療作用。,臨床應用,實驗組抽取CIK細胞回輸治療，檢測外周血細胞免疫指標并比較CIK細胞回輸治療后生活質量改善情況,放化療治療后的腫瘤患者31例為實驗組，正常人14例作對照組,CIK細胞的臨床應用

17、,,,,上述指標較治療前相比有改善(P<0.05),與正常人相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),生活質量評分均較治療前明顯改善(P<0.05),,結論：放化療后的腫瘤患者免疫功能下降，而CIK細胞回輸治療安全可靠，可以改善放化療后腫瘤患者近期免疫功能及生活質量，可作為放化療后腫瘤患者輔助治療的一種選擇。,[Image Info] www.wizdata.co.kr - Note to cus

18、tomers : This image has been licensed to be used within this PowerPoint template only. You may not extract the image for any other use.,,結果：放化療后的腫瘤患者外周血CD3+、CD4+細胞百分率下降，CD8+細胞百分率上升；CD4+／CD8+比值下調，CD16+CD56+細胞減少,CIK細胞的臨床應

19、用,,,,選擇110例晚期實體瘤患者，分離外周血單個核細胞（ DCs ），制備CIK細胞,,方法,,,結果,結論,42例可評價病灶的患者中，2例完全緩解(CR)、9例部分緩解(PR)、15例疾病穩(wěn)定(SD)。37例不可評價病灶的患者中，25例患者有效。與治療前相比，治療后免疫功能及腫瘤標志物有一定程度改善,DCs．CIK細胞聯(lián)合治療晚期惡性實體瘤安全有效，具有一定的臨床應用前景,目的：研究樹突狀細胞和CIK聯(lián)合治療晚期實體瘤的臨床

20、療效,CIK細胞的臨床應用,,有研究對9名腎透明細胞癌患者進行cik治療并隨訪4年發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)T細胞亞群比例由治療前的抑制狀態(tài)恢復到正常水平,一定程度地提高了患者機體對抗腫瘤的能力，所有患者均未見復發(fā)與轉移?,CIK細胞的臨床應用,,,,觀察和分析cik細胞過繼免疫療法對多種中晚期惡性腫瘤的臨床療效,,目的,,,結果,結論,256例接受cik細胞治療患者中總緩解率為80.86%,1年生存期為96.09%,2年生存期為92.96%

21、3年生存期為88.28%,cik細胞過繼免疫療法能明顯地提高患者免疫功能,減輕臨床癥狀,提高生活質量,延長生存期?,CIK細胞的臨床應用,鮑鋒等實驗結果,,,,,發(fā)熱38 ℃左右,體溫超過39℃,體溫在38℃左右，多數(shù)可自行緩解，也可給予解熱鎮(zhèn)痛藥退熱?,如果患者在輸注過程中體溫超過39℃，應立即停止治療，尋找原因并及時處理,發(fā)熱處理,,目前認為生物治療中患者中度發(fā)熱是機體免疫功能正常反應的結果，該反應對治療有益?其它少見的副作用有胸

22、悶和惡心，尚未出現(xiàn)如過敏,肝腎衰竭等其他不良反應?,CIK治療最常見的副作用是發(fā)熱,CIK治療的副作用,,每次輸注CIK細胞數(shù)量、輸注次數(shù),,制備需要一定條件,,制備標準化及質量控制標準尚未制定,,治療療效的觀察指標,,治療療效觀察時間,CIK治療存在的問題,,理論上CIK可用于各種期別的惡性腫瘤，但術后用于抗復發(fā)治療還是晚期病人效果更好不清楚,,如何與其他治療手段配合使用,,目前CIK臨床研究均沒有進行隨機對照，樣本量小,,理論上CI