中藥毒理與臨床前評(píng)價(jià)

1、中藥毒性與臨床前評(píng)價(jià),中藥藥理學(xué)專(zhuān)論,,臨床不良反應(yīng),含馬兜鈴酸中藥,馬兜鈴屬木防己屬木通屬細(xì)辛屬千金藤屬青藤屬蝙蝠葛屬 (共計(jì)七十多種),毒性表現(xiàn),胃腸道反應(yīng)肝毒性腎毒性:BUN增高、腎小球?yàn)V過(guò)率減少 腎變性,嚴(yán)重ADR-近年國(guó)家SDA通報(bào),清開(kāi)靈注射液：過(guò)敏性休克，注意適應(yīng)證雙黃連注射劑：過(guò)敏及輸液反應(yīng)、注意單獨(dú)、滴速、適應(yīng)證葛根素注射液：過(guò)敏、皮疹，注意療程、劑量、適

2、應(yīng)證魚(yú)腥草注射液*：過(guò)敏性休克，已暫停莪術(shù)油注射液：過(guò)敏、皮疹，注意單獨(dú)、滴速、適應(yīng)證,4、清開(kāi)靈注射液,《溫病條辨》中安宮牛黃丸的前半部分改良劑型含板藍(lán)根、金銀花、梔子、水牛角、珍珠母、黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒神開(kāi)竅，治療高熱、炎性疾病及腦血管病主要ADR：過(guò)敏性休克 ，1-30分鐘建議配伍后的PH值在6.8-7.5 ，4小時(shí)內(nèi),4、清開(kāi)靈注射液－不可配伍制劑,維生復(fù)方電解質(zhì)MG3注射液（高糖維持液）

3、、復(fù)方乳酸鈉維生素C、維生素B6青霉素、乳糖酸紅霉素、鹽酸林可霉素丁胺卡那霉素、卡那霉素 、慶大霉素腎上腺素、重酒石酸間羥胺、多巴胺、鹽酸洛貝林,5、雙黃連注射劑,金銀花、黃芩、連翹，上呼吸道感染、支氣管炎等過(guò)敏性休克：過(guò)敏反應(yīng)增多，本身含綠原酸、黃芩苷等易過(guò)敏成分不超過(guò)說(shuō)明書(shū)用量，控制滴速,5、雙黃連注射劑 -不可配伍制劑,青霉素G含鉀的復(fù)方葡萄糖輸液-pH、成分下降地塞米松、氫化可的松-影響療效，病程延長(zhǎng) 氨基糖苷

4、類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素：慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素（阿米卡星）、鏈霉素、紅霉素－混濁或沉淀諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、維生素C 、白霉素、氯霉素,6、葛根素注射液,4,7-二羥基-8-ßD葡萄糖異黃酮擴(kuò)張外周血管，改善微循環(huán)，活血化瘀用于心肌梗塞，冠心病，心絞痛，視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈阻塞，突發(fā)性耳聾等不可配伍制劑：5%碳酸氫鈉注射液 －pH,6、葛根素注射液－嚴(yán)重ADR,過(guò)敏性休克溶血性貧血，肝臟、腎臟損傷：藥物免疫

5、原性抗原抗體反應(yīng)，特異性抗體與藥物形成免疫復(fù)合物吸附于紅細(xì)胞上，激活補(bǔ)體，紅細(xì)胞破壞，溶血。溶血產(chǎn)物（血紅蛋白）腎小管，急性腎功能衰竭，死亡國(guó)家SDA修改藥品說(shuō)明書(shū)：增加“偶見(jiàn)急性血管內(nèi)溶血”,7、魚(yú)腥草注射液,癸酰乙醛，揮發(fā)油提取 抗病毒、廣譜抗菌，對(duì)流感病毒、腺病毒有滅活作用，對(duì)肺炎球菌、流感桿菌有明顯抑制作用，提高肌體免疫力抗炎作用,7、魚(yú)腥草注射液,不可配伍制劑：普魯卡因 –醛基與伯氨基藥品質(zhì)量：全國(guó)40家生產(chǎn)，5個(gè)產(chǎn)

6、品質(zhì)量含量-高低差別410倍，不溶性微粒（1/5）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平參差不齊,8、莪術(shù)油注射液,呼吸道感染國(guó)家SDA藥品不良反應(yīng)通報(bào)：10歲以下兒童，221例（88-04年）過(guò)敏樣反應(yīng)21％，皮疹15％、呼吸困難6％、過(guò)敏性休克4％、死亡1例患者過(guò)敏史、過(guò)敏體質(zhì)慎用,8、莪術(shù)油注射液－不可配伍制劑,頭孢曲松、頭孢拉定、頭孢哌酮慶大霉素速尿,,毒理學(xué)研究,第一章 概述,基本概念 毒理學(xué): 從生物醫(yī)學(xué)角度研究外源性化合物對(duì)

7、 生物體的損害作用及其機(jī)制的學(xué)科。 分支學(xué)科: 藥物毒理學(xué)、食品毒理學(xué)、臨床毒理學(xué)、 分析毒理學(xué)、工業(yè)毒理學(xué)、環(huán)境毒理學(xué)、 生態(tài)毒理學(xué)、管理毒理學(xué)。,一、毒理試驗(yàn),以觀察、測(cè)定、了解藥物對(duì)機(jī)體引起的損害、機(jī)制為目的而設(shè)計(jì)的試驗(yàn)。 整體 器官 細(xì)胞

8、 分子,1.整體試驗(yàn)（In vivo）,哺乳動(dòng)物 急性毒性試驗(yàn) (LD50) 多次給藥急性毒性試驗(yàn) [LD50(n) ] 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn),2.體外試驗(yàn)（In vitro）,離體器官：心、肝、腎、肺、腦 條件:利用器官灌流技術(shù)將特定的液體通過(guò)血管流經(jīng)離體的臟器 . 目的: 保持生理狀態(tài) 指標(biāo):異常作用、代謝情況,In vitro,培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)

9、胞器 原代細(xì)胞 傳代細(xì)胞 細(xì)胞株 細(xì)胞器：線粒體、微粒體、核等,3. 一般毒性試驗(yàn),急性毒性試驗(yàn)、長(zhǎng)毒毒性試驗(yàn)特點(diǎn)： 毒性指標(biāo)具有廣泛性和不確定性。 綜合指標(biāo)：包括生理學(xué)、血液學(xué)、血液生化學(xué)、病理形態(tài)學(xué)。,4.特殊毒性,某些特定毒性反應(yīng) 毒性指標(biāo)具有明確性。 包括

10、：生殖毒性、遺傳毒性、依賴(lài) 性試驗(yàn)、過(guò)敏性試驗(yàn)、局部 刺激試驗(yàn)、光敏試驗(yàn)、免疫 毒性試驗(yàn),5.毒理病理學(xué),形態(tài)學(xué)試驗(yàn) 器官、組織、細(xì)胞及亞細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化： 確定損傷的靶器官 靶部位形態(tài)變化的性質(zhì)、程度 靶部位變化過(guò)程

11、和歸轉(zhuǎn),二、毒性作用種類(lèi),按毒性反應(yīng)分類(lèi) 過(guò)敏（變態(tài)）反應(yīng)、特異質(zhì)反應(yīng)、 光敏感反應(yīng)、局部毒性、全身毒性、 可逆和（或）不可逆毒性損傷、即 刻和（或）滯后毒性按作用靶器官分類(lèi)： 肝毒性、腎毒性、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)------等。,,（一）按毒性反應(yīng)分類(lèi),1.過(guò)敏（變態(tài)）反應(yīng),概念：藥物或其代謝物（作為抗原或半抗原） 刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體

12、或（和）致敏淋巴細(xì) 胞，當(dāng)再次用藥時(shí)，藥物與相應(yīng)的抗體 或（和）致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合 導(dǎo)致。特點(diǎn)：與已知藥物的藥理特性無(wú)關(guān)，效應(yīng)與劑 量無(wú)線性關(guān)系。,2.特異質(zhì)反應(yīng),概念：機(jī)體對(duì)外源化合物的一種遺傳性 異常反應(yīng)。 如：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷 血清膽堿脂酶缺乏,3.光敏

13、感反應(yīng),類(lèi)型：光毒性、光變應(yīng)性概念： 光敏感性藥物反應(yīng)：注射或內(nèi)服光敏性藥物 引發(fā)的皮膚炎癥。 光接觸性皮炎：外用藥引發(fā)。特點(diǎn)： 光毒性皮炎：與免疫機(jī)制無(wú)關(guān)。 光變應(yīng)性皮炎：與其他類(lèi)型的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)相同，第一次發(fā)生有一定的潛伏期。,貫葉連翹提取物光毒試驗(yàn)結(jié)果(豚鼠背部皮膚),A :對(duì)照組B :補(bǔ)骨脂素160mg/kg組

14、C路優(yōu)泰1.2g/kg組D貫葉連翹提取物1.2g/kg組E :貫葉連翹提取物0.6g/kg組1： UVA照射后一小時(shí)2 : UVA照射后二十四小時(shí)3： UVA照射后七十二小時(shí),貫葉連翹提取物光毒試驗(yàn)結(jié)果(豚鼠耳朵),A:對(duì)照組UVA照射后六天;B:補(bǔ)骨脂素160mg/kg組UVA照射后六天;C:路優(yōu)泰1.2g/kg組UVA照射后六天;D:貫葉連翹提取物1.2g/kg組UVA照射后六天;E:貫葉連翹提取物0.6g/kg組U

15、VA照射后六天,4.局部毒性,概念：藥物（外源性化合物）在與機(jī)體 第一接觸部位產(chǎn)生的毒性（損害）作用。,5.全身毒性,概念：藥物（外源性化合物）進(jìn)入機(jī)體 經(jīng)吸收和分布到達(dá)靶器官或全 身，產(chǎn)生的毒性作用。特點(diǎn)：對(duì)機(jī)體各器官損傷的程度不同。,6.可逆和（或）不可逆毒性損傷,特點(diǎn)：藥物（外源性化合物）進(jìn)入機(jī)體產(chǎn)生毒性作 用的可逆與否，主

16、要取決于受損病理組織修 復(fù)和再生的能力及程度。 可逆性損傷：如肝臟細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞 不可逆損傷：中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞、致癌、致突變、馬兜 鈴引起的腎損害,7.即刻和滯后毒性,概念： 即刻毒性：一次給藥后在短時(shí)間內(nèi) （<24h）出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。 滯后毒性：多次給藥后，經(jīng)一段時(shí)間 才出

17、現(xiàn)的毒性反應(yīng)。,（二）按作用靶器官分類(lèi),按作用靶器官分類(lèi)： 造血系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、 神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、肝臟、腎臟、 免疫、生殖,三、毒性反應(yīng)特征,（一）選擇毒性（二）耐受性（三）種屬和個(gè)體差異,（一）選擇毒性,概念：在接觸（暴露）情況（條件）完全相同的情況下， 化學(xué)物質(zhì)（工業(yè)毒物、藥品、農(nóng)藥）對(duì)生物體表現(xiàn)出 來(lái)的毒性（反應(yīng)）的差異。產(chǎn)生原因：

18、 1. 藥物對(duì)機(jī)體引起的毒性：組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞外毒性、器官的特有毒性、基本細(xì)胞毒性。 2.機(jī)體細(xì)胞兩方面的特性：基本細(xì)胞功能、器官特有功能。 3.藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化和排泄的差別，導(dǎo)致藥物在體內(nèi)的分布、蓄積不同。,（二）耐受性,概念：對(duì)先前給予過(guò)的化合物毒性反應(yīng)（作用）呈降低的狀態(tài)。產(chǎn)生原因： 處置耐受性 組織對(duì)化合物的反應(yīng)毒性作用降低,（三）種屬和個(gè)體差

19、異,種屬差異：藥物的毒性反應(yīng)在不同種屬或同一種屬不同品系動(dòng)物間的反應(yīng)差異。個(gè)體差異：藥物對(duì)同一種屬中不同個(gè)體表現(xiàn)出的不同反應(yīng)。,四、劑量效應(yīng)關(guān)系,（一）劑量（二）效應(yīng) 發(fā)生在分子、細(xì)胞、器官或組織水平上 局部的和（或）系統(tǒng)的 可逆的或不可逆的 即刻發(fā)生的或滯后發(fā)生的 量效應(yīng)或質(zhì)效應(yīng)的改變,五、毒性參數(shù),半數(shù)致死劑量或濃度（LD50或L

20、C50）最小致死劑量或濃度（MLD LD1或MLC LC1）最大耐受劑量或濃度（MTD LD0或MTC LC0）觀察到的有害作用的最低劑量（LOAEL）未觀察到有害作用的劑量（NOAEL）治療指數(shù)（TI）安全界限：LD1/ED99,,毒理學(xué)研究中的一些新進(jìn)展,,一、口服LD50實(shí)驗(yàn)的替代方法（一）經(jīng)典LD50求測(cè)法方法學(xué)上的不足 1.消耗的動(dòng)物量大 2.獲得的信息有限（二）OEC

21、D建議采納的急毒檢測(cè)方法 1.人性化的終點(diǎn)檢測(cè)指標(biāo)(毒性癥狀) 2.WHO推薦的外源化合物急性毒性五 級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（三）非致死性急性毒性試驗(yàn),,二、“3Rs”試驗(yàn)（一）替代模型(replacement models)： 相對(duì)替代：動(dòng)物只提供組織器官、細(xì)胞 絕對(duì)替代：細(xì)胞株、計(jì)算器模擬 選用人類(lèi)相應(yīng)的組織或培養(yǎng)的細(xì)胞

22、 從細(xì)胞分子水平闡述毒性作用機(jī)制 利于動(dòng)物福利主義的實(shí)施。 優(yōu)點(diǎn)：避免種屬差異（二）減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)方(reduction modele)（三）改良和精細(xì)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程(refinement procedures),,三、神經(jīng)毒性評(píng)價(jià) 方法學(xué)(肝腦共同培養(yǎng)的腦細(xì)胞) 例:環(huán)磷酰胺 代謝產(chǎn)物(腦毒性)四、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的細(xì)胞模型（一）中樞神經(jīng)系

23、統(tǒng)毒性的一般細(xì)胞功能： 膜電位下降、鈣超載、自由基損傷（二）一般檢測(cè)指標(biāo)：膜電壓、自由基生成、基因分析等。（三）中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性的特殊細(xì)胞功能：離子通道、GABA、 N-受體。,,五、眼刺激性的體外試驗(yàn)評(píng)價(jià),眼刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)眼刺激反應(yīng)分值角膜混濁（以最致密部位為準(zhǔn)） 無(wú)混濁0 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見(jiàn)1 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清2 出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，

24、虹膜細(xì)節(jié)不清，瞳孔大小勉強(qiáng)看輕3 角膜不透明，由于混濁，虹膜無(wú)法辨認(rèn)（角膜刺激最高4分）4虹膜 正常0 皺褶明顯加深，充血、腫脹、角膜周?chē)休p度充血，瞳孔對(duì)光仍有反應(yīng)1 出血、肉眼可見(jiàn)壞死、對(duì)光無(wú)反應(yīng)（或出現(xiàn)其中一種反應(yīng)）2（虹膜刺激最高2分）結(jié)膜 A．充血（系指眼結(jié)膜球結(jié)膜部位） 血管正常0 血管充血呈鮮紅色1 血管充血呈深紅色，血管不易分辨2 彌漫性充血呈紫紅色3

25、B．水腫 無(wú)水腫0 輕微水腫1 明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2 水腫至眼瞼半閉合3 水腫至眼瞼超過(guò)半閉合4 C．分泌物 無(wú)分泌物0 少量分泌物1 分泌物使眼瞼和結(jié)膜潮濕或粘著2 分泌物使整個(gè)眼區(qū)潮濕或粘著3（結(jié)膜刺激最高10分）眼刺激最高綜合評(píng)分16分,,眼刺激評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 0～3.9無(wú)刺激性 4～8.9輕度刺激性 9～12.9中度刺激性

26、 13～16重度刺激性,芎龍止痛滴鼻液對(duì)眼的影響,,,A1～４：滴 5% 吐溫80 0.2ml 后 1小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、7天的眼睛 B1～４：滴芎龍止痛滴鼻液 0.2ml 后 1小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、7天的眼睛,,新方法：動(dòng)物眼部組織器官 培養(yǎng)的狗腎單細(xì)胞層組成的實(shí) 驗(yàn)?zāi)Ｐ?應(yīng)用雞胚絨毛膜尿囊膜,,六、皮膚刺激性的體外試驗(yàn)評(píng)價(jià) 皮膚刺激性

27、反應(yīng)敏感的生物指標(biāo) 熱休克蛋白,,藥物毒性與藥物安全性評(píng)價(jià),一、藥物安全評(píng)價(jià)中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),（一）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是必需的（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 1. 種屬間差異 2. 性別（三）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中劑量—反應(yīng)關(guān)系（四）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋,二、毒性試驗(yàn)的終點(diǎn)和觀察指標(biāo),（一）藥物對(duì)機(jī)體的損害（毒性作用）（二）藥物對(duì)機(jī)體的非損害作用（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般狀況（四）臟器指數(shù)（五）毒

28、理病理學(xué)檢查（六）生理生化指標(biāo)（七）免疫毒性的觀察,三、體外毒性試驗(yàn)與藥物安全性評(píng)價(jià),注意因素： 細(xì)胞生物學(xué)特性的差異 體外、體內(nèi)藥代動(dòng)力和藥效動(dòng)力的差異,四、體內(nèi)、體外試驗(yàn)數(shù)據(jù)歸納、比較和評(píng)價(jià),（一）注意不可逆的毒性作用（二）闡明作用機(jī)制的重要性（三）安全系數(shù)（四）試驗(yàn)方法的可靠性、相關(guān)性 1. 只有當(dāng)特定目的檢測(cè)方法的應(yīng)用特征、優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)被適當(dāng)確定后才認(rèn)為它是可靠的

29、2. 替代方法（或體外離體試驗(yàn)）的應(yīng)用（五）綜合評(píng)價(jià),,第二章 中藥毒性研究,,肝臟毒性及安全性評(píng)價(jià),,,一、肝臟組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ),（一）肝臟的組織學(xué)特點(diǎn) 富有血管(入肝、出肝） 肝細(xì)胞在代謝上起重要作用 藥物毒性的主要靶器官,,（二）肝臟的生理功能 參于代謝（生化反應(yīng)500種以上）、糖原儲(chǔ)存、分泌膽汁、具解毒、吞噬、防御機(jī)能。,,藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化分

30、兩個(gè)步驟：第一步，在酶的催化下進(jìn)行氧化、還原或水解等。藥物經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化后，藥理活性可能出現(xiàn)、增加、減弱或被滅活。失活占大部分。水合氯醛還原成三氯乙醇，毒性增強(qiáng)。第二步，藥物或其代謝產(chǎn)物與體內(nèi)的某些物質(zhì)，如葡萄糖醛酸、甘氨酸、硫酸等結(jié)合，或發(fā)生甲基化或乙?；＝Y(jié)合以上基團(tuán)后，藥物極性增加，水溶性增加，活性減弱或消失，同時(shí)也有利于排出體外。某些生物堿（士的寧、嗎啡)可蓄積肝臟，緩慢釋放，減少中毒脫氨作用：在肝內(nèi)合成尿素排除,二、肝毒性反

31、應(yīng)及其機(jī)制,（一）肝毒性類(lèi)型及機(jī)制 1. 肝壞死: 肝細(xì)胞死亡、局灶性或彌漫性。 氯仿、甲醇、四環(huán)素、氨甲碟呤、川楝子、黃藥子、蓖麻子 機(jī)制（1）自由基學(xué)說(shuō)(ccl4)---脂質(zhì)過(guò)氧化 活性氧形成:P450在催化過(guò)程中,第二個(gè)電子被引入,產(chǎn)生過(guò)氧化氫,GSH大量消耗,細(xì)胞對(duì)活性氧的防御能力降低 （2）共價(jià)結(jié)合學(xué)說(shuō)

32、 （3）.破壞細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)(鈣超載),,類(lèi)脂沉積癥或脂肪肝(脂質(zhì)>5%) 癥狀：輕度不易觀察。肝重增加、體積增大、變硬、表面和切片 滑膩、光鏡可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)大量脂滴、蘇丹染色陽(yáng)性。 原因：酒精中毒、營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩或不足、中毒 機(jī)制：脂蛋白的蛋白質(zhì)部分合成受阻（高劑量四環(huán)素、乙硫酸） 極低密度脂蛋白的磷脂部分合成受阻 細(xì)胞內(nèi)丟鉀，脂肪的

33、運(yùn)輸受阻,,膽汁淤積 有肝外淤積、肝內(nèi)淤積 氯丙嗪、紅霉素、雌激素、五色梅 機(jī)制： 干擾或阻斷膽紅素正常代謝過(guò)程 膽汁分泌減少 膽汁流動(dòng)障礙 例：a –萘基異氫基酸脂（工具藥） 大鼠小鼠均可看到與劑量相關(guān)的

34、淤膽改變。24-48小時(shí)有相應(yīng)改變。,,血管損傷（小靜脈閉塞綜合癥） 微小靜脈內(nèi)膜受損、炎癥------靜脈壁水腫壞死，血管壁纖維化、管腔堵塞。 藥物：砷、喹啉類(lèi)生物堿、菊三七,,肝硬化 細(xì)胞變性壞死、纖維組織增生、顆粒狀硬結(jié) 三種病理改變交錯(cuò)進(jìn)行，肝小葉結(jié)構(gòu)和血循環(huán)途徑改建，肝變形變硬。 四氯化碳（工具藥）,,誘發(fā)腫瘤 黃曲

35、霉素、黃樟醚、千里光堿、蘇鐵苷、生物堿與亞硝胺結(jié)合物 機(jī)制：使體細(xì)胞核DNA螺旋紊亂 活潑雙鍵、環(huán)氧結(jié)構(gòu)—具烷化作用,（二）藥物性肝損害的機(jī)制和易感性,藥物性肝損害的機(jī)制 直接作用（與劑量有關(guān)） 宿主對(duì)藥物的特異敏感性（與劑量無(wú)關(guān)）肝毒性發(fā)展的兩個(gè)主要因素： 1. 混合功能氧化酶活性（將乙酰物水解，水解物以共價(jià)鍵與肝臟大分

36、子結(jié)合） 2.肝內(nèi)谷胱甘肽含量 肝臟對(duì)藥物損傷的易感性1.肝臟對(duì)藥物損傷的易感性：藥物代謝、聚集2.機(jī)體對(duì)肝損傷的易感性,四、中藥肝臟毒性的評(píng)價(jià),（一）能引起肝毒性的中藥 1. 引起肝毒性的中藥 姜半夏、桑寄生、蒲黃、光慈姑、天花粉或其注射制劑可引起肝功能異常； 千里光可造成肝內(nèi)血管閉塞； 野百合提取物野百合堿等會(huì)引起急性肝炎。,,川楝子、蒼耳子、草烏、黃藥子、蓖麻子、雷公藤煎劑可

37、致中毒性肝炎； 復(fù)方青黛丸、壯骨關(guān)節(jié)丸、華佗再造丸、大活絡(luò)丹、小柴胡湯等導(dǎo)致肝損害。 大黃、澤瀉或靜脈注射或滴注四季青注射液，會(huì)引起膽紅素代謝障礙導(dǎo)致黃疸。 引起肝毒性的中草藥還有：昆明山海棠、千里光、艾葉等 。,2. 生物堿引起的肝毒性（1）吡咯雙烷類(lèi)生物堿 千里光屬、豆科野百合屬 表現(xiàn)為肝細(xì)胞壞死、輕度脂肪聚集和肝靜脈小分支的阻塞性損傷。 損傷機(jī)制可能是由于吡咯衍生物與DNA和其他細(xì)胞成分

38、反應(yīng)損傷肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝血管。,,原因：所有吡咯雙烷生物堿含有吡咯雙烷類(lèi)的核心結(jié)構(gòu)，由兩個(gè)帶4位氮原子的五環(huán)分子融合組成，其肝毒性衍生物是1-羥甲基-1,2-脫氫-7-羥基吡咯雙烷酯。毒性在于其1、2位不飽和性和與分支鏈酸的酯化作用。（2）其他生物堿：八角楓、北豆根、喜樹(shù),3. 黃樟醚的肝毒性 黃樟醚是肝微粒體酶的強(qiáng)抑制劑，在體內(nèi)它能羥基化成致癌作用強(qiáng)于母體的1’-羥基黃樟醚。4. 黃藥子的肝毒性 它對(duì)肝臟的損害屬于對(duì)肝細(xì)

39、胞的直接毒性作用，是藥物及其代謝產(chǎn)物在肝臟達(dá)到一定濃度時(shí)，干擾細(xì)胞代謝的結(jié)果。,,5. 蛋白毒素引起的肝毒性（1）蒼耳子 含有毒蛋白、毒苷等，是一種細(xì)胞質(zhì)毒。（2）蓖麻子 含蓖麻毒蛋白及蓖麻毒堿 ，蓖麻毒蛋白是一種免疫毒素,是與植物毒素或細(xì)胞毒素共價(jià)結(jié)合的細(xì)胞結(jié)合性抗原或抗體。能抑制真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。LD50為6-12mg/kg,,6. 鞣質(zhì)的肝毒性 鞣質(zhì)及其他聚酚類(lèi)的植物成分在體內(nèi)催化亞硝酸鹽和二級(jí)胺發(fā)

40、生反應(yīng)，形成有致癌作用的N-亞硝胺。7. 其他類(lèi)的肝毒性:大黃、苦楝皮,,（二）肝毒性的安全評(píng)價(jià)方法 整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 體外試驗(yàn)方法,,1. 整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的方法（1）大體解剖檢查與稱(chēng)重重量計(jì)算臟器指數(shù)（2）血液生化學(xué)檢查 ALT、AST、ALP、LDH（3）肝臟生物化學(xué)成分和代謝過(guò)程檢查 三酰甘油、肝蛋白、肝糖原

41、 脂質(zhì)、GSH、丙二醛（4）膽汁排泄功能試驗(yàn)：BSP（磺溴鈦）排泄（5）形態(tài)學(xué)檢查,2. 體外試驗(yàn)方法,（1）肝勻漿:測(cè)定線粒體中Ca-Mg-ATP酶、微粒體中P450 3型前膠原等細(xì)胞外基質(zhì)（2）肝臟灌流：4小時(shí)為宜，測(cè)灌流液中酶、離子（3）游離肝細(xì)胞法：用膠原酶將肝細(xì)胞分離，成懸浮肝細(xì)胞。檢查細(xì)胞大分子變化，如：抑制蛋白質(zhì)和RNA的合成、增加DNA的合成、肝細(xì)胞的活性和生

42、長(zhǎng)。,,（4）原代培養(yǎng)肝細(xì)胞方法：可進(jìn)行多種指標(biāo)的觀察（5）肝細(xì)胞細(xì)胞器方法：探討作用靶點(diǎn) 微粒體、線粒體 細(xì)胞核、核膜、溶酶體（6）肝臟切片,,（三）方法學(xué)評(píng)價(jià) 定性、定量評(píng)價(jià)：顯微鏡 體積、表面積、密度 生化指標(biāo),,腎臟毒性及安全性評(píng)價(jià),,,一、組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ),（一）腎臟的組織學(xué)特點(diǎn)（二）腎臟的生理功能 1. 生成尿液

43、，排出代謝廢物、毒物和藥物 2. 調(diào)節(jié)體內(nèi)的水分和滲透壓 3. 調(diào)節(jié)電解質(zhì)的濃度 4. 腎臟的內(nèi)分泌功能 分泌腎素、紅細(xì)胞生成素（EPO）、1，25-二羥膽骨化醇、緩激肽與前列腺素,二、腎毒性反應(yīng)及機(jī)制 （一）藥物導(dǎo)致腎損害的原因和毒性作用機(jī)制,1. 腎毒性與腎臟組織學(xué)和生理特點(diǎn)有關(guān) * 腎臟血流量接受循環(huán)血流最多，通過(guò)藥物

44、量較多 * 具有豐富的毛細(xì)血管，易發(fā)生抗原抗體復(fù)合物沉積 * 近端小管的分泌和重吸收作用 * 腎髓質(zhì)的逆流倍增機(jī)制使乳頭部藥物濃度增高 * 腎小管pH改變，導(dǎo)致藥物在腎內(nèi)沉積 * 腎臟濃縮尿液，腎小管內(nèi)藥物濃度增加 * 藥物排泄時(shí)，腎臟多種酶活性被抑制或滅活,2. 藥物引起腎毒性的作用機(jī)制 * 藥物對(duì)細(xì)胞的直接作用（汞、氨基糖苷類(lèi)）

45、 * 與谷胱甘肽的結(jié)合作用 * 共價(jià)結(jié)合（四氯化碳）. * 免疫性因素 * 金屬硫蛋白的保護(hù)作用減弱（鎘）,（二）腎毒性類(lèi)型及特點(diǎn),1. 腎臟的病理反應(yīng) 急性腎衰竭、慢性腎衰竭、位點(diǎn)選擇性損害（腎小球損害、近曲腎小管損害、腎病綜合征、慢性間質(zhì)性腎炎）2. 腎臟對(duì)藥物毒性損傷的易感性3. 腎毒性損傷后的適應(yīng),三、中藥對(duì)腎臟的毒性及評(píng)價(jià),(一）常見(jiàn)引起腎臟毒性的中藥 關(guān)

46、木通、草烏、雷公藤、斑蝥、土牛膝、巴豆、蜈蚣、蜂毒、朱砂、益母草、苦楝皮、防已、厚樸、花粉等 1. 含馬兜鈴酸類(lèi)中藥引起的腎毒性 馬兜鈴酸（硝基菲類(lèi)）的毒性機(jī)制，有細(xì)胞毒假說(shuō)、腎缺血假說(shuō)、免疫反應(yīng)假說(shuō)、AA-DNA加合物致病假說(shuō)。,一般認(rèn)為，馬兜鈴酸可能通過(guò)以下途徑導(dǎo)致各種腎損害：（1）短期內(nèi)大劑量AA作用于腎小管上皮細(xì)胞，可致該細(xì)胞壞死及凋亡。（2）小劑量AA作用于腎小管上皮細(xì)胞，可使該細(xì)胞變性及萎縮，出現(xiàn)腎小管功

47、能障礙。（3）小劑量AA反復(fù)作用于腎小管上皮細(xì)胞，也可激活該細(xì)胞甚至使其活化，活化的腎小管上皮細(xì)胞可釋放TGF-β等因子，通過(guò)細(xì)胞間“串話”作用于腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞，使其激活分泌細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化，轉(zhuǎn)分化成纖維細(xì)胞，還能直接分泌細(xì)胞外基質(zhì)，加重腎間質(zhì)纖維化。,,（4）AA還能通過(guò)腎小管進(jìn)入腎間質(zhì)，直接刺激及激活間質(zhì)成纖維細(xì)胞，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致腎間質(zhì)成纖維化。2. 常見(jiàn)的引起腎毒性的中藥 光慈姑(秋水仙堿）、雷公藤（

48、甲、乙素）、蒼耳子（蒼耳苷、毒蛋白）、羊齒（莽草酸）、斑蝥（斑蝥素）、白降丹（氯化汞）,（二）腎毒性評(píng)價(jià)方法,1. 形態(tài)學(xué)檢查：大體解剖與稱(chēng)重、鏡檢、電子顯微鏡2. 腎功能試驗(yàn)：尿液收集、密度（或滲透壓）、蛋白尿、 尿糖、尿沉渣鏡檢 3. 血液生化分析：BUN、Cr4. 尿酶活性分析（LDH、ALP、LAP、NAG等）5. 腎臟清除功能試驗(yàn)：GFR（腎小球?yàn)V過(guò)率）

49、 RPF（腎血流量）6. 腎小球-腎小管損傷標(biāo)志物的組合分析7. 體外試驗(yàn)：腎片、腎灌流技術(shù)、游離腎細(xì)胞,,（三）方法學(xué)評(píng)價(jià) 1. 方法學(xué)評(píng)價(jià)：整體實(shí)驗(yàn)為主 2. 毒性評(píng)價(jià)；系列實(shí)驗(yàn),,神經(jīng)系統(tǒng)毒性及安全性評(píng)價(jià),,一、組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ)血-腦脊液屏障及腦的能量代謝特點(diǎn)耗氧量1/5，能量需求高二、神經(jīng)系統(tǒng)的毒性反應(yīng)及機(jī)制 （

50、一）神經(jīng)系統(tǒng)的毒性反應(yīng)：神經(jīng)原、軸束、髓鞘（二）神經(jīng)毒性的作用機(jī)制,（二）神經(jīng)毒性的作用機(jī)制,1.神經(jīng)遞質(zhì):遞質(zhì)攝取和降解障礙,干擾儲(chǔ)存和釋放.2.受體:影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo).(鈣、CAMP/CGMP)3.膠質(zhì)細(xì)胞:,三、中藥的神經(jīng)毒性及安全性評(píng)價(jià),(一）生物毒素的神經(jīng)毒性作用中藥本身所含的生物堿、酸或其他有機(jī)成分具有神經(jīng)毒性，如阿托品堿、天仙子胺、藏紅花堿。馬錢(qián)子，能引起驚厥、脊髓反射增強(qiáng)，以至失去對(duì)正常運(yùn)動(dòng)細(xì)胞刺激的抑制作用

51、。,,鬼臼毒素10-15mg/kg出現(xiàn)神經(jīng)毒性作用，表現(xiàn)為脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元水腫，較嚴(yán)重的、長(zhǎng)期性的損傷可出現(xiàn)在脊髓背角神經(jīng)元、中樞神經(jīng)軸突以及周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)，脊髓后根神經(jīng)元表現(xiàn)為尼氏體消失。,,(二）重金屬毒性（1）中藥本身含重金屬藥，如朱砂（2）中藥重金屬殘留 鉛中毒的神經(jīng)病變包括血管損害、腦水腫，且鉛對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的毒性比感覺(jué)神經(jīng)大。,,（三）中藥中的農(nóng)藥殘留 （四）中藥神經(jīng)毒性的評(píng)價(jià) 臨床評(píng)價(jià):腦損害、顱

52、損害、脊髓損害、神經(jīng)肌肉損害、 精神障礙。 動(dòng)物研究：結(jié)構(gòu)和神經(jīng)病理學(xué)終點(diǎn) 神經(jīng)生理學(xué)終點(diǎn) 神經(jīng)毒的化學(xué)終點(diǎn),,1.結(jié)構(gòu)或神經(jīng)病理學(xué)終點(diǎn)（1）大體形態(tài)變化，包括腦重量改變。（2）神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)的組織學(xué)改變（神經(jīng)元病變、軸突病變、髓鞘病變）。 在細(xì)胞水平神經(jīng)毒性作用表現(xiàn)為神經(jīng)元的染色質(zhì)溶解、空泡變、細(xì)胞死亡；軸突損傷

53、表現(xiàn)為軸突腫脹、變性和萎縮；而髓鞘改變可表現(xiàn)為折疊、水腫造成的撕裂、脫髓鞘。,,2.神經(jīng)毒性的神經(jīng)生理終點(diǎn)（1）神經(jīng)傳導(dǎo)研究（2）感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)及其他激發(fā)潛能研究（3）疾病發(fā)作和驚厥（4）腦電圖3.神經(jīng)毒性物質(zhì)的化學(xué)終點(diǎn) 影響神經(jīng)元內(nèi)的離子平衡；封閉神經(jīng)遞質(zhì)和其前體的回收；過(guò)度刺激受體；封閉神經(jīng)遞質(zhì)釋放；抑制遞質(zhì)的合成和代謝酶。,,造血系統(tǒng)毒性及安全性評(píng)價(jià),,一、組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ)(一）造血器官：胚胎期、出生后 (二

54、）血細(xì)胞的發(fā)育：造血干細(xì)胞階段、造血祖細(xì)胞階段、原始細(xì)胞及幼稚細(xì)胞階段 （三）造血調(diào)節(jié)：造血微環(huán)境、造血調(diào)節(jié)因子,二、造血系統(tǒng)毒性反應(yīng)及機(jī)制(一）粒細(xì)胞減少癥和粒細(xì)胞缺乏癥 (二）再生障礙性貧血 （三）純紅細(xì)胞性再生障礙性貧血 （四）缺鐵性貧血 （五）溶血性貧血：免疫性、非免疫性 （六）血小板減少性紫癜 （七）過(guò)敏性紫癜 （八）彌散性血管內(nèi)凝血 （九）藥物相關(guān)性白血病,三、中藥對(duì)造血系統(tǒng)的毒性及評(píng)價(jià)(一）中藥

55、對(duì)造血系統(tǒng)的毒性 粒細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、純紅細(xì)胞性再生障礙性貧血、缺鐵性貧血、溶血性貧血、血小板減少癥,1.對(duì)粒系細(xì)胞的毒性（1）雷公藤急性粒細(xì)胞減少、血小板減少、紅細(xì)胞減少、再生障礙性貧血和彌散性血管內(nèi)凝血等。雷公藤的毒性化學(xué)成分一般認(rèn)為是生物堿及有細(xì)胞毒的二萜類(lèi)環(huán)氧化合物。（2）青風(fēng)藤引起粒細(xì)胞減少或粒細(xì)胞缺乏癥（3）八角蓮主要毒性成分為鬼臼毒素，可致血小板減少、白細(xì)胞減少。（4）光慈姑含

56、秋水仙堿等多種生物堿，抑制骨髓而導(dǎo)致粒細(xì)胞缺乏癥和再生障礙性貧血。,2.對(duì)紅系細(xì)胞的毒性（1）雄黃 可使紅細(xì)胞形態(tài)改變，并抑制白細(xì)胞的產(chǎn)生。機(jī)制可能與硫化砷（As2S2）進(jìn)入體內(nèi)和組織中的巰基結(jié)合干擾組織代謝，引起血細(xì)胞再生不良有關(guān)。（2）大黃 可引起缺鐵性貧血，主要是大黃所含鞣酸與鐵結(jié)合成不溶性復(fù)合物，妨礙了鐵的吸收以及大黃的導(dǎo)瀉作用干擾了鐵的吸收所致。,,（3）鉛丹 可引起溶血性貧血。鉛的溶血

57、作用與鉛抑制細(xì)胞膜ATP酶活性，妨礙水鈉調(diào)節(jié)，以及鉛與紅細(xì)胞的結(jié)合引起機(jī)械脆性增加等原因有關(guān)。（4）蜈蚣 含兩種類(lèi)似蜂毒的有毒成分，即組胺樣物質(zhì)和溶血性蛋白質(zhì)，后者可引起溶血性貧血。,,3.對(duì)巨核系細(xì)胞的毒性（1）麝香、蟾酥對(duì)過(guò)敏性體質(zhì)者可導(dǎo)致免疫反應(yīng)，通過(guò)免疫機(jī)制破壞血小板（2）蝮蛇抗栓酶水解完整的血小板膜的磷脂。,,(二）造血系統(tǒng)毒性評(píng)價(jià)方法 一般血液學(xué)檢測(cè)及評(píng)價(jià) 骨髓造血功能檢測(cè)

58、及評(píng)價(jià) （三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 （四）中藥造血系統(tǒng)毒性的評(píng)價(jià) 粒系細(xì)胞、紅系細(xì)胞、巨核系細(xì)胞,,心血管毒性及安全評(píng)價(jià),,一、病理生理基礎(chǔ)(一）心功能不全 影響因素：收縮性能、前負(fù)荷、后負(fù)荷、心率 (二）心律失常 電生理機(jī)制：沖動(dòng)形成障礙、沖動(dòng)傳導(dǎo)障礙 （三）脂質(zhì)代謝失常,,二、心血管毒性反應(yīng)及機(jī)制(一）心臟毒作用機(jī)制 干擾心肌細(xì)胞代謝

59、 心肌受體和遞質(zhì)改變 缺氧的間接影響 (二）血管毒性的一般生化機(jī)制 引起血管栓塞的機(jī)制：對(duì)血管內(nèi)皮的損害、對(duì)血小 板、對(duì)凝血因子的影響 （三）血管細(xì)胞毒性損傷機(jī)制,三、中藥對(duì)心血管的毒性及評(píng)價(jià)(一）蟾酥：慢纖維作用、心律失常、房室傳導(dǎo)阻滯 （二）藜蘆：神經(jīng)毒、心臟毒性 能抑制心肌的興奮傳導(dǎo)，并具有反射性舒張血管的特征。

60、,（三）黃花夾竹桃：強(qiáng)心苷類(lèi)物質(zhì)的心臟毒性。 （四）烏頭堿：心血管系統(tǒng)損害（1）興奮迷走神經(jīng)引起竇房結(jié)抑制，房室傳導(dǎo)阻滯，從而導(dǎo)致心率減慢；（2）直接作用于心肌，引起心肌興奮性增多，引起早搏、室速、室顫；（3）抑制血管運(yùn)動(dòng)中樞，引起血壓下降。,,（五）自然存在的物質(zhì)：類(lèi)固醇激素、細(xì)胞因子、動(dòng)植物毒素（六）溶劑：異丙醇的CNS抑制（七）重金屬：鎘、鉛、鈷,,免疫毒性及安全性評(píng)價(jià),,一、免疫系統(tǒng)組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ)(一）免

61、疫系統(tǒng)的組成：免疫器官 免疫細(xì)胞 免疫分子 (二）免疫應(yīng)答：B細(xì)胞介導(dǎo) T細(xì)胞介導(dǎo) （三）免疫調(diào)節(jié) （四）主要組織相容性復(fù)合體 （五）免疫系統(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)的關(guān)系,,二、免疫毒性反應(yīng)及機(jī)制(一）免疫系統(tǒng)的敏感性 (二）免疫系統(tǒng)損傷的結(jié)果和機(jī)制

62、 超敏反應(yīng)：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型 免疫抑制和宿主抵抗力降低 自身免疫性疾病 （三）中藥對(duì)免疫系統(tǒng)作用的特點(diǎn) 反應(yīng)的靈敏性 反應(yīng)的差異性 反應(yīng)的復(fù)雜性,,三、免疫毒性及評(píng)價(jià)方法(一）體內(nèi)評(píng)價(jià)方法 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 人類(lèi)免疫毒理學(xué) 動(dòng)物模型的應(yīng)用 (二）體外研究

63、方法 細(xì)胞培養(yǎng)：鹽溶液、血清 中藥的體外免疫毒性研究 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,,(三）常用的試驗(yàn)技術(shù) 1.病理學(xué)常規(guī)檢查 2.免疫細(xì)胞的檢測(cè)：淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 細(xì)胞毒試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法 流式細(xì)

64、胞術(shù) 磁珠分離術(shù) 3.抗體的檢測(cè) 4.宿主抵抗力試驗(yàn)：腫瘤細(xì)胞攻擊試驗(yàn) 對(duì)病原體的抵抗試驗(yàn) 5.細(xì)胞因子的檢測(cè)技術(shù)：生物活性檢測(cè) 免疫學(xué)檢測(cè) 核酸分子雜交

65、 PCR,,(四）免疫毒性的評(píng)價(jià)方案和判斷 1.評(píng)價(jià)方案 2.免疫毒性的綜合判斷 各檢測(cè)指標(biāo)之間的關(guān)系 單味中藥或有效成分的毒性與復(fù)方的關(guān)系 體內(nèi)、體外試驗(yàn)的關(guān)系 動(dòng)物毒性與人毒性的關(guān)系,,(五）中藥的免疫毒性 1.免疫器官毒性 2.巨噬細(xì)胞毒性 3.體液免

66、疫毒性 4.細(xì)胞免疫毒性 5.超敏反應(yīng),,生殖毒理及安全性評(píng)價(jià),,,一、組織學(xué)及生理學(xué)基礎(chǔ)(一）生殖系統(tǒng)的組成：雄性、雌性生殖系統(tǒng)(二）生殖生理 二、生殖系統(tǒng)毒性反應(yīng)及機(jī)制(一）生殖毒性的表現(xiàn)(二）生殖毒性作用機(jī)制：親性腺作用、親胚體作用、 親胎盤(pán)作用、胎期毒性、

67、 哺乳期毒性特點(diǎn)：損害的多樣性；生殖過(guò)程較其它系統(tǒng)損害的更敏感性； 損害不僅影響本身，亦影響后代,,三、中藥生殖毒性的評(píng)價(jià) (一）整體動(dòng)物 (二）動(dòng)物選擇和劑量分組 （三）性激素水平檢測(cè)及性功能,,（四）雄性生殖毒性實(shí)驗(yàn) 1. 睪丸功能檢測(cè)：精子生成分析 精子穿透試驗(yàn)

68、 睪丸標(biāo)志酶活性的測(cè)定 2. 系列交配試驗(yàn) 3. 擴(kuò)展交配試驗(yàn) 4. 顯性致死試驗(yàn),,（五）雌性生殖毒性實(shí)驗(yàn) 1. 卵巢功能檢測(cè)：陰道上片細(xì)胞涂片 壓片法 形態(tài)檢測(cè) 2. 生殖試驗(yàn) 3.