運(yùn)用寡核苷酸芯片鑒定檢測(cè)食源性致病菌技術(shù)的研究.pdf

1、致病菌污染食品可導(dǎo)致多種疾病的暴發(fā)與流行，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康。因此，若想有效控制食品細(xì)菌性疾病的發(fā)生，快速而準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中致病菌是關(guān)鍵的技術(shù)基礎(chǔ)之一。傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法及生化鑒定，操作繁瑣，且需要數(shù)天才能得到結(jié)果。免疫學(xué)方法和探針雜交技術(shù)也存在特異性或敏感性的問(wèn)題。常規(guī)PCR一次只能檢出一種致病菌，對(duì)食品中分離的未知菌，或有多種細(xì)菌污染的樣品則顯得無(wú)從下手。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中致病菌的快速檢測(cè)與鑒定，預(yù)防腸道細(xì)菌性疾病的發(fā)生，我們運(yùn)用寡核

2、苷酸芯片技術(shù)建立了對(duì)常見(jiàn)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)的方法，檢測(cè)的目的菌株是霍亂弧菌、腸出血性大腸桿菌O157：H7、副溶血性弧菌、耶爾森氏菌、單增李氏菌、富氏志賀氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌。我們利用在細(xì)菌分類(lèi)學(xué)上具有重要意義的16SrRNA和23SrRNA基因作為檢測(cè)的靶分子，并在其間設(shè)計(jì)探針，建立一套食品致病菌的基因芯片快速檢測(cè)技術(shù)。不同細(xì)菌的16SrRNA和23SrRNA基因具有序列一致的恒定區(qū)和序列不同的可變區(qū)，恒

3、定區(qū)和可變區(qū)交錯(cuò)排列。這樣，我們?cè)诤愣▍^(qū)設(shè)計(jì)PCR引物，在可變區(qū)設(shè)計(jì)檢測(cè)探針；用四對(duì)引物在同一反應(yīng)條件下就可以將全部九種致病菌的相應(yīng)基因片段擴(kuò)增出來(lái)，再用每種細(xì)菌的特異性探針陣列與標(biāo)記的靶片段進(jìn)行雜交反應(yīng)，雜交后用專(zhuān)用設(shè)備讀取分析熒光信號(hào)，可以定性和半定量地檢出致病菌。通過(guò)雜交結(jié)果可以看出設(shè)計(jì)的探針特異性強(qiáng)，并且相對(duì)于傳統(tǒng)的方法操作簡(jiǎn)單、用時(shí)少，穩(wěn)定性、重復(fù)性都非常好，靈敏度可達(dá)到1.6×103cfu/mL，另外，我們還對(duì)單獨(dú)DNA模板