臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證解讀

1、臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證,貴陽市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科張正君,臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證,概念目的具體操作其他,一.概念,確認(rèn)（validation）驗(yàn)證（verification）,確認(rèn)（validation）,在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前條件下，證實(shí)所得檢驗(yàn)結(jié)果是否可以滿足臨床需要，能為患者提供可靠的的臨床結(jié)果過程。本質(zhì)上實(shí)際就是誤差評價（error assessment），如果誤差太大將會造成結(jié)果不正確的解釋！確認(rèn)的手段應(yīng)是是實(shí)際的或是

2、模擬的！,驗(yàn)證（verification）,實(shí)驗(yàn)室按廠商說明的方法能否得到預(yù)期結(jié)果驗(yàn)證的手段可以是下述活動，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評審。,確認(rèn)（validation） 通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。注：①“已確認(rèn)”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確 認(rèn)所使用的條件可以是實(shí)際的或是模擬的。驗(yàn)證（verification） 通過提

3、供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定注：① “已驗(yàn)證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認(rèn)定可包括下述活動，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評審。,ISO15189的概念,確認(rèn)（validation） 通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。注：①“已確認(rèn)”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確 認(rèn)所使用的條件可以是實(shí)際的或是模擬的。驗(yàn)證（verifica

4、tion） 通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定注：① “已驗(yàn)證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認(rèn)定可包括下述活動，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評審。,二.目的,結(jié)果互認(rèn)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室管理辦法CLIA’88CNAS-CL02,,,,,,,,三.具體操作,（一）統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)知識（二）檢驗(yàn)方法分類（三）方法的選擇（四）常用物質(zhì)（五）一些基本術(shù)語（六）質(zhì)量規(guī)范

5、（七）具體操作,（一）統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)知識,概述臨床檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的分類統(tǒng)計(jì)方法的分類隨機(jī)變量及其分布正態(tài)分布抽樣分布大數(shù)定律和中心極限定律平均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差均數(shù)的抽樣誤差與t分布兩均數(shù)差別的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義檢驗(yàn)方差分析直線回歸與相關(guān)觀察值一致性,（二）檢驗(yàn)方法分類,決定性方法（ definitive method ）： 經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn) 不準(zhǔn)確度或不確定性原因的方法； 參考方法（ reference method ）

6、： 經(jīng)詳盡研究證實(shí)其不準(zhǔn)確度與不 精密度可以忽略的方法； 常規(guī)方法（ routine method ）： 可滿足臨床或其他目的需要的日常使用的方法。,（三）方法的選擇,足夠特異、靈敏、精密度好校準(zhǔn)可溯源有實(shí)驗(yàn)證據(jù)（雜志、自）與其他檢驗(yàn)項(xiàng)目相比有點(diǎn)何在,（四）常用物質(zhì),1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/參考物質(zhì)（ reference material ） 2.校準(zhǔn)品（ calibrator ） 3.質(zhì)控物/控制品（ control materia

7、l ）,1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),概念：又稱參考物質(zhì)（ reference material ），是一類充分均勻，并具有一個（或多個）確定的特性值的材料或物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果一般表示為：標(biāo)準(zhǔn)值 ± 總不確定度。 “ 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書“是介紹標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的技術(shù)文件，是研制單位向用戶提出的質(zhì)量保證書和使用說明。附有證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱為有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（ certified reference material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序

8、確定，可溯源至準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)該特性值的計(jì)量單位，且每個標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。 作用：校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評價測量方法，或給其它物質(zhì)賦值分類：一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（ primary reference material ）：穩(wěn)定、均一，采用高度準(zhǔn)確、可靠的若干方法定值，可用于校準(zhǔn)決定性方法及為二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值。在我國，一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是測量準(zhǔn)確度達(dá)到國內(nèi)最高水平的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，由國家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)、頒布并授權(quán)生產(chǎn)。如： 人血清無機(jī)成分分析標(biāo)準(zhǔn)

9、物質(zhì)（ GBW09135 ）和血清膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（ GBW 09138 ）。二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（ secondary reference material ）：用一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)，參考方法定值。如： 紅細(xì)胞微粒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) — GBW （ E ） 090001 、膽紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) — GBW （ E ） 090002 、氰化高鐵血紅蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) — GBW （ E ） 090004 和純化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) — GBW （ E ） 090011

10、。,2.校準(zhǔn)品,3.質(zhì)控品,概念：分類：定值質(zhì)控品 非定值質(zhì)控品 檢測系統(tǒng)配套的控制品 正確度控制品,質(zhì)控品概念,具有與檢測過程相適應(yīng)的特性，其成份與檢測樣本的基質(zhì)相同或相似。應(yīng)使用充分均 一 和穩(wěn)定的質(zhì)控物， 其瓶間變異 必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異，其常規(guī)檢測應(yīng)有助于確認(rèn)報告范圍。,定值質(zhì)控品,,定值質(zhì)控品,,但是公司的定值是從保護(hù)自己利益出發(fā)的。它標(biāo)示的預(yù)期范

11、圍只是想告訴用戶，只要你的測定值在范圍，說明它的控制品是好的。因此不要將預(yù)期范圍認(rèn)為是控制的允許范圍?。?！不定值控制品質(zhì)量和定值的一樣，只是廠商沒有邀請實(shí)驗(yàn)室為控制品定值，在說明書上除定值內(nèi)容外，其余都有，還告訴了用戶高值或低值，當(dāng)然更便宜！！但無論定值或不定值，用戶在使用時，須使用自己的檢測系統(tǒng)建立自己的均值和標(biāo)準(zhǔn)差??！只是定值控制品有一個預(yù)期的范圍便于用戶對照！！但僅為對照，若兩者相似不能說明用戶結(jié)果準(zhǔn)確，不相似也不說明結(jié)果有問

12、題。國內(nèi)限于條件國產(chǎn)控制品很少，由經(jīng)銷商推出的國外控制品真正屬于定值的也不多，定值控制品因?yàn)閮r格貴，用戶不接受，但用戶又要求是定值的控制品，因此不少經(jīng)銷商要求生產(chǎn)廠商提供一個公司自己檢測的值，附在不定值控制品上，變成用戶可接受的“定值”控制品?。。?！至于定值所用的檢測系統(tǒng)，方法學(xué)原理、儀器、試劑盒來源、操作程序都無可奉告?。?！此時如果用戶的靶值和“所為定值”相差甚遠(yuǎn)，我們應(yīng)該可以理解，并不是控制品質(zhì)量有問題造成的?。?！,檢測系統(tǒng)配套的

13、控制品為了使用戶及時了解檢測系統(tǒng)的質(zhì)量狀況，大的診斷產(chǎn)品廠商（國際上六大），除提供儀器、試劑、校準(zhǔn)品外，還提供檢測系統(tǒng)專用的控制品，必要時還為使用相同檢測系統(tǒng)的用戶提供相同批號的控制品，同時組織質(zhì)量服務(wù)??！此類控制品專用性強(qiáng)。如羅氏的正常與病理控制品Precinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校準(zhǔn)品定值程序獲得?。?！而且定值一旦發(fā)現(xiàn)中間環(huán)節(jié)出錯，還在網(wǎng)上為用戶提供更新！！正確度控制品為了隨時保證檢測系統(tǒng)對病人樣本

14、的檢測結(jié)果具有溯源性，此時引入了正確度控制品，ISO17511標(biāo)準(zhǔn)定義正確度控制品為：用于評估檢測系統(tǒng)檢測偏倚的參考物質(zhì)。而且有專門的定值過程，該定制過程比校準(zhǔn)品定值還要嚴(yán)格，與定值控制品的定值屬于相同檢測系統(tǒng)測定值的簡單統(tǒng)計(jì)處理一定要分開??！,（五）一些基本術(shù)語,準(zhǔn)確度正確度精密度溯源性,a.準(zhǔn)確度與誤差準(zhǔn)確度（accuracy）的完整表達(dá)應(yīng)是檢測準(zhǔn)確度（accuracy of measurement）：檢測結(jié)果與被測量真值或

15、約定真值（可接受參照值）之間的一致程度（GB/T3358.1、GB/T6379）.可接受參照值：用來做比較的經(jīng)協(xié)商同意的值，它可以是理論值（真值），賦值，公認(rèn)值或由程序確定的值。準(zhǔn)確度不能直接得出，只能用偏離（deviation）也就是誤差從反面衡量誤差：測量值與真值之間的偏離，包括RE和SE。誤差是用來度量不準(zhǔn)確度的。這樣對于檢測結(jié)果只做一次時，結(jié)果的偏離即不準(zhǔn)確度=分析過程的不正確度+分析過程的不精密度也即不準(zhǔn)確度=總誤差

16、=分析過程的隨機(jī)誤差+分析過程的系統(tǒng)誤差b.正確度與偏倚正確度（trunees）即真實(shí)度，完整表達(dá)檢測真實(shí)度：大量檢測結(jié)果得到的均值與可接受參考值之間的一致程度（GB/T6379），用偏倚（bias）來表示,即測試結(jié)果的期望與真值（可接受參考值）之差。（GB/T6379）系統(tǒng)誤差：在可重復(fù)的條件下，大量檢測結(jié)果的均值與真值之差偏倚表示的是一種系統(tǒng)誤差。c.精密度和標(biāo)準(zhǔn)差精密度（precision），完整表達(dá)檢測精密度：在規(guī)定

17、條件下獨(dú)立測試結(jié)果之間一致程度（GB/T6379）。用標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)來表示。分為兩種，“重復(fù)性（repeatability）”相同條件下執(zhí)行連續(xù)測量結(jié)果之間的一致性程度，又稱為序列內(nèi)精密度和批內(nèi)精密度?！霸佻F(xiàn)性（reproducibility）”在改變測量條件下執(zhí)行測量結(jié)果之間的一致性程度。隨機(jī)誤差（random error）：在可重復(fù)的條件下，對相同的被測量無數(shù)次檢測結(jié)果的均值，與檢測結(jié)果的差異。用標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)度量。d.總誤

18、差總誤差（total error,TE）:能影響分析準(zhǔn)確度的確定誤差的組合【CLSI EP15-A2】,即偏倚和不精密度的和?；诳茖W(xué)原理的理論或確定值基于一些國家或組織的實(shí)驗(yàn)工作的指定值或認(rèn)證值基于科學(xué)或工程組織贊助下合作實(shí)驗(yàn)工作中的同意值或認(rèn)證值。以上三點(diǎn)不能獲得時，則用可獲得的期望，即規(guī)定測量總體的均值。,溯源性,通過一條連續(xù)的比較連，使FPS檢測結(jié)果與國際或國家的參考系統(tǒng)（在參考實(shí)驗(yàn)室，使用參考方法，參考品得到的結(jié)果）

19、聯(lián)系起來的特性,（六）質(zhì)量規(guī)范,質(zhì)量規(guī)范簡史 1963年加拿大臨床化學(xué)家David Tonks建議用參考區(qū)間的寬度1/4表示允許誤差。 1968年臨床化學(xué)家Roy Barnett博士提出標(biāo)準(zhǔn)差表示允許誤差。 1976年CAP舉辦的分析目標(biāo)討論會議，Westgard提出了以“允許總誤差”作為規(guī)定質(zhì)量的最佳形式，一直沿用至今。,1999年斯德哥爾摩協(xié)商大會匯集了臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的許多專家協(xié)商一致的“建立全球分析質(zhì)量規(guī)范”，其結(jié)

20、果提出了“質(zhì)量規(guī)范（quality specifications）”的層次結(jié)構(gòu)：,1.評價在特定情況下分析性能對臨床結(jié)果的影響2.評價在一般情況下分析性能對臨床決策的影響3.基于生物學(xué)變異的規(guī)范4.基于臨床醫(yī)生觀點(diǎn)的分析5.已發(fā)表專業(yè)推薦來自國家和國際的專家組來自地方組織或某個國家6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范法規(guī)機(jī)構(gòu)能力驗(yàn)證（PT）和（或）室間質(zhì)評計(jì)劃（EQAS）組織者7.基于當(dāng)前分析技術(shù)的目標(biāo)有時間質(zhì)量質(zhì)量評價

21、或能力驗(yàn)證計(jì)劃數(shù)據(jù)證實(shí)由當(dāng)前發(fā)表方法學(xué)性能文章,3.基于生物學(xué)變異的規(guī)范。,用法,CVA<1/2CVIBA<1/4（CVI2+CVG2）1/2CV儀器之間<1/3CVITE<1.65CVA+BA(α<0.05) TE<2.33CVA+BA(α<0.01)不精密度CV： 用于室內(nèi)質(zhì)控精密度分析 用于方法學(xué)性能驗(yàn)證：1.與客觀比較

22、 2.與廠家比較偏差Bias：用于方法學(xué)比較，即考核真實(shí)度。允許總誤差Tea：用于EQA,,5.已發(fā)表專業(yè)推薦,,6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范,,,（七）具體操作,內(nèi)容常用的方案具體方案,方法確認(rèn),內(nèi)容： 總是包括可報告范圍、精密度、準(zhǔn)確度和參考區(qū)間。某些研究還應(yīng)包括檢出限（或靈敏度）、特異度、干擾和回收以及校準(zhǔn)品確認(rèn)。CLIA規(guī)則規(guī)定對不同復(fù)雜程度分類的方法需要確認(rèn)不同的特征。對不太

23、復(fù)雜的方法，要求很少的研究。對于自建檢測系統(tǒng)或?qū)嶒?yàn)室修改的方法需要更多的實(shí)驗(yàn)。,方法驗(yàn)證,除應(yīng)驗(yàn)證儀器的安裝和檢驗(yàn)程序的操作外對于定量方法 應(yīng)驗(yàn)證：測量精密度：包括重復(fù)性和再現(xiàn)性、患者結(jié)果與以前方法或參考程序之間的一致性、在整個分析測量范圍內(nèi)被測量的回收、高濃度的攜帶污染、干擾或非特異性（溶血、脂血、黃疸、容器添加劑、藥物）、參考區(qū)間。對于定性方法 應(yīng)驗(yàn)證陽性和陰性及臨界值上和下標(biāo)本的再現(xiàn)性和重復(fù)性、患者結(jié)果的一

24、致性、攜帶污染、干擾或非特異性。,常用的方案,1.相關(guān)機(jī)構(gòu)：NCCLA/CLSI、CLIA2.具體方案定量實(shí)驗(yàn)室方法的初步評價: CLSI EP10定性測試性能評估：CLSI EP12基質(zhì)效應(yīng)的評價：CLSI EP14精密度和正確度性能的用戶驗(yàn)證：CLSI EP15-A使用ROC曲線實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)臨床準(zhǔn)確度評價：CLSI GP10總誤差估計(jì) :CLSI EP21-A：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的估計(jì)精密度評價: EP5-A，臨床

25、化學(xué)設(shè)備精密性能的評價準(zhǔn)確度評價：方法比較試驗(yàn)EP9-A，使用病人樣本進(jìn)行方法比較和偏倚估計(jì) 回收實(shí)驗(yàn) 干擾試驗(yàn)EP7-P，臨床化學(xué)干擾試驗(yàn)總誤差估計(jì) :CLSI EP21-A：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的估計(jì)患者結(jié)果可報告范圍（即線性范圍）的驗(yàn)證：EP6-A：定量分析方法線性的評價 臨床可報告范圍的確立參考范圍 ：NCCLS/CLSI

26、 C28-A ：臨床實(shí)驗(yàn)室如何定義和確定參照區(qū)間交叉污染:NCCLS/CLSI EP10-A 分析靈敏度:CLSI EP17-A：檢出限和定量下限確定方案分析特異性:NCCLA/CLSI EP7-A: 臨床化學(xué)干擾試驗(yàn),評價檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度,除按ISO/IEC l7025對實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系評價外，在實(shí)際工作中我們常用以下幾種方法來核驗(yàn)、評價檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)評價檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度（t檢驗(yàn)）用標(biāo)準(zhǔn)方法評價分析結(jié)果的準(zhǔn)確度

27、回收率試驗(yàn),Westgard確定不精密度的方法,考慮因素1.實(shí)驗(yàn)周期：20天以內(nèi)2.樣本基質(zhì)3.檢測材料數(shù)量和濃度水平：MDL4.檢測樣本個數(shù)：20次5.數(shù)據(jù)計(jì)算：CV/S6.可接受性能準(zhǔn)則 Sw-run/Sw-day<1/4TEa SI-run<1/3TEa7.廠家聲明的驗(yàn)證8.推薦的最低程度研究9.基于未來的考慮,廠家聲明的驗(yàn)證,CLIA并沒有嚴(yán)格地要求實(shí)驗(yàn)室確定性能的可接受性。更確切地，C

28、LIA主張實(shí)驗(yàn)室應(yīng)驗(yàn)證廠家精密度的聲明。這可由F檢驗(yàn)完成，如下：1.從廠家聲明材料（通常包括在儀器的文件中）中獲得用于重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)差和測量個數(shù)，如基于31次測量的標(biāo)準(zhǔn)差（s）為3mg/dl。2.從你的重復(fù)實(shí)驗(yàn)獲得的標(biāo)準(zhǔn)差和測量結(jié)果個數(shù)，如基于21個測量的標(biāo)準(zhǔn)差為4mg/dl。3.計(jì)算F值，較大s平方除較小s平方，即= 16/9 =1.78。4.查F值表，查分子自由度為20，分母自由度為30的臨界F值，其值為1.

29、93。5.在這一實(shí)例中，計(jì)算的F值小于臨界F值，其表示實(shí)驗(yàn)室觀測的s與廠家聲明的s之間沒有真正的差異。6.結(jié)論——已驗(yàn)證廠家的聲明。,推薦的最低程度研究,選擇至少2個不同濃度控制物代表了研究項(xiàng)目的低和高的醫(yī) 學(xué)決定性濃度。每一個濃度在一批內(nèi)或一天內(nèi)對每一控制物 檢測20個樣本獲得短期的不精密度估計(jì)值。計(jì)算每一控制物 的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。在進(jìn)行更進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)之前確定 短期不精密度是否可接受

30、。在20個不同天對兩個控制物的每一種分析1個樣本，確定長 期的不精密度。計(jì)算每一材料的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。 確定長期不精密度是否可接受。,基于未來的考慮,采用更為詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供關(guān)于短期和長期變異量的信息。這些設(shè)計(jì)通常使用方差分析（analysis ofvariance , ANOVA)，如CLSI精密度方案所闡述EP5方案預(yù)期用于廠家的精密度評價，而EP15方案預(yù)期用于臨床實(shí)驗(yàn)室用戶進(jìn)行的評價。EP15明確

31、指出在5天的時間內(nèi)每天最少是采用3個重復(fù)測量，給出總的15個測量值。為了估計(jì)總的不精密度，計(jì)算提供確定批內(nèi)和批間分量的方式，然后將其結(jié)合來提供總的不精密度。在EP15附錄中描述了所需要的計(jì)算，以及一組數(shù)據(jù)實(shí)例顯示如何驗(yàn)證廠家的聲明。給出的EP15允許僅只有5天的數(shù)據(jù)就可進(jìn)行精密度驗(yàn)證，很有可能它將成為許多實(shí)驗(yàn)室采用的方案。,CLSI EP5-A2,定量方法精密度性能評價Evaluation of Precision Performanc

32、e of Quantitative Methods; Approved Guideline—Second Edition,精密度的內(nèi)容,批內(nèi)精密度（重復(fù)性：repeatability）批間精密度日內(nèi)精密度日間精密度實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度（within-laboratory precision）,實(shí)驗(yàn)方法,試劑和校準(zhǔn)物：同一批號樣本：基質(zhì)與臨床樣本相似，2個以上濃度 （參考醫(yī)學(xué)決定水平）。實(shí)驗(yàn)天數(shù)：20天以上實(shí)驗(yàn)次數(shù)：每天2批，

33、每批2個樣本，每個 樣本重復(fù)2次,Westgard確定偏倚的方法,概述 由新方法（試驗(yàn)方法）和可比較方法同時分析患者樣本的實(shí)驗(yàn)，基于兩方法觀測的差值估計(jì)系統(tǒng)誤差?？紤]因素1.可比較方法2.患者標(biāo)本數(shù)量3.單次或雙份測量4.時間周期5.標(biāo)本穩(wěn)定性6.數(shù)據(jù)分析7.圖形顯示數(shù)據(jù)8.計(jì)算適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)量9.可接受性能標(biāo)準(zhǔn)10.廠家聲明的驗(yàn)證11.推薦的最低程度的研究12.未來的發(fā)展方向,1.可比較方法,“可比

34、較方法” 并不意味方法已證明其正確性。大多數(shù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法歸為此類。必須仔細(xì)解釋試驗(yàn)方法和常規(guī)方法之間的任何差異。如果差別很小，則兩方法具有相同的相對的準(zhǔn)確度。如果差別很大并醫(yī)學(xué)上不可接受，則需要識別哪一方法是不準(zhǔn)確的?？刹捎没厥蘸透蓴_實(shí)驗(yàn)提供這一額外的信息。,2.患者標(biāo)本數(shù)量,兩個方法檢測最少40份不同的患者標(biāo)本。選擇的這些標(biāo)本覆蓋整個方法的可報告范圍及代表方法在常規(guī)應(yīng)用預(yù)期疾病的濃度范圍。檢測標(biāo)本的實(shí)際個數(shù)沒有標(biāo)本的質(zhì)量重要。,3.單

35、次或雙份測量,雙份測定不同的批、或至少不同的順序（而不是在同一樣本杯中來回重復(fù)）不同的樣本（或杯）,4.時間周期,一般建議最少5天每天檢測2至5個患者標(biāo)本,5.標(biāo)本穩(wěn)定性,一般由試驗(yàn)和可比較方法在兩個小時內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行檢測，除非標(biāo)本有很短的穩(wěn)定性,6.數(shù)據(jù)分析,方式存在爭論和討論,7.圖形顯示數(shù)據(jù),差值圖（difference plot） 比對圖” （comparison plot）,8.計(jì)算適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)量,1.以比較方法測定

36、值Xc為橫坐標(biāo)，試驗(yàn)方法測定值Yc為縱坐標(biāo)，采用直線回歸或最小二乘法擬合直線，建立回歸方Y(jié)c=a+bXc，并由此計(jì)算在MDL時的SE，SE=Yc- Xc2.另一常計(jì)算的指標(biāo)是相關(guān)系數(shù)r，主要用于評價數(shù)據(jù)范圍是否足夠?qū)捯员闾峁┬甭屎徒鼐喔玫墓烙?jì)。而不是判斷方法的可接受性。當(dāng)r為0.99或更大時，簡單的線性回歸計(jì)算可提供斜率和截距可靠的估計(jì)。如果r小于0.99，最好是收集額外的數(shù)據(jù)擴(kuò)大濃度范圍?？紤]到使用t-檢驗(yàn)計(jì)算估計(jì)數(shù)據(jù)均值的系統(tǒng)

37、誤差，或使用更復(fù)雜的回歸計(jì)算適合于數(shù)據(jù)更窄的范圍。3.對于比對結(jié)果覆蓋較窄的分析范圍，如：鈉或鈣等，計(jì)算兩方法平均值之間的差，也通常稱為偏倚。這種計(jì)算的偏倚從統(tǒng)計(jì)程序可獲得提供配對t-檢驗(yàn)計(jì)算。例如，如果鈉試驗(yàn)方法40個分析的均值是141.0mmol/L，相同樣本比較方法的均值為138.5，則平均系統(tǒng)誤差或偏倚是2.5mmol/L（141.0 ～ 138.5）。,9.可接受性能標(biāo)準(zhǔn),判斷可接受性依賴于允許分析誤差的大小，任何單個試驗(yàn)

38、的總誤差（TE）包括系統(tǒng)誤差（SE）加隨機(jī)誤差（RE）?！翱傉`差”計(jì)算公式如下：TEcalc =SE+ RE TEcalc = Biasmeas+3Smeas S meas是重復(fù)性試驗(yàn)估計(jì)的方法標(biāo)準(zhǔn)差，Biasmeas是從回歸方程Yc=a+bXc計(jì)算的Yc-Xc或從配對t-檢驗(yàn)計(jì)算的平均差，當(dāng)TEcalc<TEa方法性能是可接受的方法決定圖,10.廠家聲明的驗(yàn)證,CLIA并沒有嚴(yán)格地

39、要求實(shí)驗(yàn)室參照任何質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，甚至是其 能力驗(yàn)證可接受性能準(zhǔn)則判斷任何觀測的偏倚或系統(tǒng)誤差的可接受性。代之，CLIA強(qiáng)調(diào)驗(yàn)證廠家的準(zhǔn)確度（或不準(zhǔn)確度、偏倚，系統(tǒng)誤差）聲明。如果廠家的聲明沒有偏倚，t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量將揭示出實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)證實(shí)其聲明是否符合。如果從配對t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)計(jì)算的t值小于臨界t值，則沒有顯著性差異，或觀測到?jīng)]有真實(shí)的偏倚。如果廠家聲明有限的偏倚，則有用的是確定你估計(jì)偏倚的置信區(qū)間，并將其與廠家的聲明的偏倚進(jìn)行比較。如果

40、廠家的聲明偏倚落在觀測偏倚的上下置信限之內(nèi)，則證實(shí)了聲明；如果不在此區(qū)間內(nèi)，則沒有驗(yàn)證聲明。,,11.推薦的最低程度的研究,選擇40份患者標(biāo)本覆蓋方法的整個可報告范圍。由試驗(yàn)和比較方法在2小時內(nèi)一天分析8份標(biāo)本。很快地將結(jié)果繪制差值圖并檢查差異；重新分析給出差異結(jié)果的標(biāo)本消除離群值，識別潛在的干擾。如果沒有觀測到差異的結(jié)果，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)5天。如果在頭5天觀測到差異，繼續(xù)另外的5天。繪制所有數(shù)據(jù)的比對圖評價范圍，離群值和線性。計(jì)算相關(guān)系數(shù)，如

41、果r為0.99或更大，計(jì)算簡單直線回歸統(tǒng)計(jì)量及在醫(yī)學(xué)決定濃度水平上估計(jì)系統(tǒng)誤差。如果r<0.975，從t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量估計(jì)數(shù)據(jù)均值的偏倚或另外從更為復(fù)雜的回歸技術(shù)進(jìn)行估計(jì)。使用方法決定圖結(jié)合估計(jì)的系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差，并對方法觀測的總誤差作出判斷。,12.未來的發(fā)展方向,CLIA當(dāng)前指南給出20為方法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的“經(jīng)驗(yàn)法則”。CLSI’s EP15指南“真實(shí)度”或偏倚的用戶驗(yàn)證也建議最少為20個患者樣本。另外，EP15包括備選方法使用最

42、少2個具有制定值參考物質(zhì)，以在3到5批中以雙份測定方式進(jìn)行測量.在此參考物質(zhì)可包括有證參考物質(zhì)，如從國家標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究院獲得，但也可來自能力驗(yàn)證樣本，質(zhì)量控制材料，或具有指定值的相同方法比對材料,CLSI EP9-A2,使用病人樣本進(jìn)行方法比較和偏倚估計(jì),目的及用途,引進(jìn)新方法前或用一種方法替代另一種方法時進(jìn)行偏倚分析；評價同一分析項(xiàng)目的兩種分析方法間的偏倚。,評價操作要求,熟悉儀器操作熟悉評價方案質(zhì)量控制足夠的數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)樣本要

43、求,來源于健康人或患者，無干擾，盡量避免儲存；測定物濃度范圍應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布；樣本數(shù)至少40例，增加數(shù)量能提高可信性,對比方法,廠家要求的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法或公認(rèn)的參考方法。具有好的精密度沒有已知的干擾物相同單位相對國家標(biāo)準(zhǔn)或參考方法的偏倚是已知的,測定方法,每天分別用兩種方法進(jìn)行測定，測定順序： 1、2、3、4、5、6、7、8 8、7、6、5、4、3、2、1測定次數(shù)：至少測定5天，共40個樣本,數(shù)

44、據(jù)監(jiān)督,常規(guī)質(zhì)控：系統(tǒng)誤差人為誤差,實(shí)驗(yàn)步驟,? 熟悉儀器及方法? 收集數(shù)據(jù)? 檢查方法內(nèi)的離群點(diǎn) 界限： （雙份測定）相對差值均值的4倍,繪圖,散點(diǎn)圖： 均值散點(diǎn)圖（X，Y） 所有值散點(diǎn)圖（Yij，Xi）偏倚圖： 散點(diǎn)圖（（ Yij -Xij），Xi）,均值散點(diǎn)圖（X，Y）,,偏差圖：每次測定的Y均值與X均值 之差-相應(yīng)X均值圖,,相關(guān)指標(biāo)計(jì)算,適合范圍： 計(jì)算r，

45、r2 >= 0.95 范圍適合 r2 < 0.95 擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍線性回歸： 回歸方程計(jì)算： 截距 a = - 9.05 斜率b = 1.17 Y = 1.17 X – 9.05 均勻離散度的直觀檢查,結(jié)果判讀,預(yù)期偏倚及可信范圍 線性回歸方程 計(jì)算偏倚（高、中

46、、低3組）解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)比較,CLSI EP15-A,精密度和正確度性能的用戶驗(yàn)證：User Verification of Performance forPrecision and Trueness）,主要的3種方案：,1.精密度基于5天，每天分析3份重復(fù)控制樣本；2.真實(shí)度基于分析20份患者標(biāo)本；3.真實(shí)度基于分析至少2份具有指定值的參考物質(zhì)。,EP15 精密度方案,規(guī)定熟悉時期學(xué)習(xí)分析系統(tǒng)的適當(dāng)操作，包括校準(zhǔn)、

47、維護(hù)程序和監(jiān)測程序（質(zhì)量控制）。使用廠家推薦的質(zhì)量控制程序監(jiān)測在EP15檢測方案期的性能。選擇的控制物應(yīng)具有的濃度水平接近醫(yī)學(xué)決定性點(diǎn)。用于聲明驗(yàn)證的控制物應(yīng)選擇接近于醫(yī)學(xué)決定點(diǎn)的濃度及接近于廠家進(jìn)行其精密度聲明試驗(yàn)所具有的濃度。如果可能，它們應(yīng)該與建立廠家聲明使用相同的材料，或非常類似的材料（類似的基質(zhì)）。,實(shí)驗(yàn)方案,1．五天，每日一分析批，每日兩個濃度水平，每一水平上同一樣本三次重復(fù)測定。2．如果因?yàn)橘|(zhì)量控制程序或操作困難判斷一批

48、為 失控，剔除數(shù)據(jù)，并執(zhí)行額外的批。3．包括正常地使用每日質(zhì)量控制樣本。4．真實(shí)度試驗(yàn)樣本可在同一批內(nèi)進(jìn)行檢測。5．操作者按照廠家說明書規(guī)定進(jìn)行校準(zhǔn)。如果廠家指出在其聲明它的精密度數(shù)據(jù)是在多個校準(zhǔn)周期下產(chǎn)生的，則操作者在實(shí)驗(yàn)期間選擇重新校準(zhǔn)。,統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算,建立EXCEL表格,用EXCEL表格計(jì)算T值,精密度聲明的驗(yàn)證,EP15使用患者樣本的真實(shí)度方案,推薦采用如下的實(shí)驗(yàn)方案：1．檢測20份患者樣本，其濃度水平覆蓋方法的

49、可報告范圍。2．在實(shí)驗(yàn)室以常規(guī)操作方式檢測新鮮患者樣本。3．在3到4天時間內(nèi)，每天由試驗(yàn)和可比較方法在4小時內(nèi)測量5至7份樣本。4．評價質(zhì)量控制確保穩(wěn)定的操作條件和有效的試驗(yàn)結(jié)果。5．檢查比較數(shù)據(jù)識別任何差異的結(jié)果。6．計(jì)算配對結(jié)果之間的差值，并繪制差值與比較值之間的差值圖提供數(shù)據(jù)的圖形顯示。7．將數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t-檢驗(yàn)計(jì)算確定方法之間的平均差值（偏倚），以及差值的標(biāo)準(zhǔn)差；8．計(jì)算置信區(qū)間和（或）驗(yàn)證限，將觀測的偏倚與廠家的

50、聲明進(jìn)行比較。,建立EXCEL表格,計(jì)算偏倚的置信區(qū)間,EP15使用參考物質(zhì)的真實(shí)度方案,推薦的物質(zhì)包括：1．從美國國家標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究院（NIST）可獲得某些分析物的有證參考物質(zhì)（CRM）。2．能力驗(yàn)證計(jì)劃中具有指定值的參考物質(zhì)。3．廠家具有指定值的物質(zhì)。4．室間質(zhì)量評價(EQA)計(jì)劃中的物質(zhì)。5．由幾家實(shí)驗(yàn)室分析具有指定值來自第三方銷售商的物質(zhì)。6．制備的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。,EP15使用參考物質(zhì)的真實(shí)度方案,EP15推薦

51、至少選擇2個物質(zhì)代表方法可報告范圍中高和低的決定性濃度。應(yīng)根據(jù)廠家說明書制備物質(zhì)，在3到5天時間內(nèi)每批進(jìn)行2次重復(fù)，然后計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，以及置信區(qū)間幫助指定值的驗(yàn)證。,建立EXCEL表格,計(jì)算的95%置信區(qū)間為36.7~38.7mg/dl，其并沒有包括指定值40.0mg/dl，因此由這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能證實(shí)真實(shí)度。,評價方法可接受性,允許不精密度制定,根據(jù)我國各實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)變異系數(shù)水平確定。根據(jù)室間質(zhì)量評價允許總誤差（TEa)確定允許的C

52、V%: 1/4TEa, 1/5TEa, 1/6TEa? 根據(jù)生物學(xué)變異確定允許的CV%:,四.其他,同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同檢測系統(tǒng)上可比性的驗(yàn)證用ROC曲線進(jìn)行方法的臨床評價,同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同檢測系統(tǒng)上可比性的驗(yàn)證,采用極差檢驗(yàn)方案 以實(shí)驗(yàn)室需要評價兩臺分析儀器AST測量的可比性為例1.長期IQC（至少6個月）得出兩個質(zhì)控物各自的總均和合成CV。如果兩臺分析儀器各自的CV的比值小于2，就可

53、使用極差檢驗(yàn)方案。,2.樣本選擇二個質(zhì)控物總均± 20%,本例選擇40.95 ± 20% ， 210.32 ± 20% ， 范圍內(nèi)的樣本各一個。假設(shè)選擇在比對儀器分析儀A上測得的37.8 (樣本#1) 和245.1 U/L (樣本#2)的兩個樣本。,3.確定允許差值或臨界差值：1/3CVI,計(jì)算允許差值或臨界差值大約為1/3個體內(nèi)生物學(xué)變異，即11.9%/3=3.9

54、7%。,4.查極差檢驗(yàn)的臨界差值表確定重復(fù)次數(shù),依據(jù)比對個數(shù)確定重復(fù)次數(shù)大概所在的行依據(jù)合成CV確定臨界差值在表中所在的列具體確定重復(fù)次數(shù)例如：對于樣本#1（混合CV=1.50%）和樣本#2(混合CV = 1.95%)，可以確定臨界差值表中的行和列相當(dāng)于具有1.0%和2.0%混合分析CV兩方法比對的位置。 選擇的臨界差值為3.97%處于重復(fù)3次表格臨界差值之間（2.266968% < 3.97% < 4.533