食源性疾實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)要點(diǎn)

1、食源性疾病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)要點(diǎn),溫州市CDC微生物檢驗(yàn)科 李毅,,,前言,食物中毒應(yīng)急處理與現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查,,現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查中的實(shí)驗(yàn)室支持,概念與分類(lèi),,前言,《食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范》 衛(wèi)監(jiān)督發(fā)〔2011〕86號(hào) 本規(guī)范自2012年1月1日起施行,食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范,主要內(nèi)容包括1 、總則2 、調(diào)查機(jī)構(gòu)管理3 、調(diào)查內(nèi)容和程序

2、 5部分主要內(nèi)容和總共23條4 、調(diào)查結(jié)論和報(bào)告5 、附則,第三條 事故流行病學(xué)調(diào)查包括人群流行病學(xué)調(diào)查、危害因素調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，具體調(diào)查技術(shù)應(yīng)當(dāng)遵循流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)技術(shù)指南。第六條 事故流行病學(xué)調(diào)查實(shí)行調(diào)查員制度。各級(jí)調(diào)查機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)根據(jù)工作需要配備事故流行病學(xué)調(diào)查員。 調(diào)查員應(yīng)當(dāng)由具有1年以上流行病學(xué)調(diào)查工作經(jīng)驗(yàn)的衛(wèi)生相關(guān)專(zhuān)業(yè)人員擔(dān)任。經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)考核合格后，由同級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)聘任。,食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范,

3、食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范,第九條 事故流行病學(xué)調(diào)查由調(diào)查機(jī)構(gòu)成立的事故流行病學(xué)調(diào)查組（以下簡(jiǎn)稱(chēng)調(diào)查組）具體實(shí)施。調(diào)查組應(yīng)當(dāng)由3名以上調(diào)查員組成，并指定1名負(fù)責(zé)人。第十一條 開(kāi)展人群流行病學(xué)調(diào)查應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容： （一）制訂病例定義，開(kāi)展病例搜索；（二）統(tǒng)一個(gè)案調(diào)查方法，開(kāi)展個(gè)案調(diào)查；（三）采集有關(guān)標(biāo)本和樣品；（四）描述發(fā)病人群、發(fā)病時(shí)間和發(fā)病地區(qū)分布特征；（五）初步判斷事故可疑致病因素、可疑餐次和可疑食品；（六）

4、根據(jù)調(diào)查需要，開(kāi)展病例對(duì)照研究或隊(duì)列研究。,食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范,第十二條 開(kāi)展危害因素調(diào)查應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：（一）訪(fǎng)談相關(guān)人員，查閱有關(guān)資料，獲取就餐環(huán)境、可疑食品、配方、加工工藝流程、生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)過(guò)程危害因素控制、生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)記錄、從業(yè)人員健康狀況等信息（二）現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查可疑食品的原料、生產(chǎn)加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷(xiāo)售、食用等過(guò)程中的相關(guān)危害因素；（三）采集可疑食品、原料、半成品、環(huán)境樣品等，以及相關(guān)從業(yè)人員生物標(biāo)本。,食品安全事

5、故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范,第十三條 送檢標(biāo)本和樣品應(yīng)當(dāng)由調(diào)查員提供檢驗(yàn)項(xiàng)目和樣品相關(guān)信息，由具備檢驗(yàn)?zāi)芰Φ募夹g(shù)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)。標(biāo)本和樣品應(yīng)當(dāng)盡可能在采集后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)妥善保存標(biāo)本和樣品，并按照規(guī)定期限留樣。,(一)概念,食源性疾病 指通過(guò)攝食而進(jìn)入人體的有毒有害物質(zhì)（包括生物性病原體）等致病因子所造成的疾病。一般可分為感染性和中毒性，包括常見(jiàn)的食物中毒、腸道傳染病、人畜共患傳染病、寄生蟲(chóng)

6、病以及化學(xué)性有毒有害物質(zhì)所引起的疾病。 （WHO）食物中毒 指食用了被有毒有害物質(zhì)污染或含有有毒有害物質(zhì)的食品后出現(xiàn)的急性、亞急性疾病； 食源性疾病有暴發(fā)和散發(fā)兩種形式，食物中毒是食源性疾病的暴發(fā)形式,,食品安全事故,指食物中毒、食源性疾病、食品污染等源于食品，對(duì)人體健康有危害或者可能有危害的事故。,食源性疾病的分類(lèi),食物中毒（急性）食源性腸道傳染病食源性寄生蟲(chóng)病變態(tài)反應(yīng)性疾?。ㄊ澄镞^(guò)敏）暴飲暴食引起的急性胃腸炎等

7、一次大量或長(zhǎng)期低劑量攝入某些有毒、有害物質(zhì)引起的以慢性毒害為主要特征的疾病，食物營(yíng)養(yǎng)不平衡所造成的某些慢性疾病等,,,概述,食物中毒應(yīng)急處理與現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查,,為了及時(shí)準(zhǔn)確掌握食物中毒發(fā)生原因，積極采取有效防范措施，在食物 中毒調(diào)查時(shí)，要按照一定程序開(kāi)展工作。 《食物中毒事故處理辦法》 衛(wèi)生部1999 《突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急條例》 國(guó)務(wù)院2003年5月7日 《食品安全法》 20

8、09年2月28日《中華人民共和國(guó)食品安全法實(shí)施條例》 《食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查工作規(guī)范》 2011年,相關(guān)法律法規(guī),食物中毒應(yīng)急處理組織與職責(zé),食物中毒應(yīng)急處理涉及 衛(wèi)生行政部門(mén) 衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu) 疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu) 醫(yī)療救治機(jī)構(gòu) 其他有關(guān)部門(mén),食物中毒報(bào)告、信息管理制度,1

9、.食物中毒一般報(bào)告制度2.食物中毒緊急報(bào)告制度（1）中毒人數(shù)超過(guò)30人的應(yīng)當(dāng)于6小時(shí)內(nèi)報(bào)告同級(jí)人民政府和上級(jí)人民政府衛(wèi)生行政部門(mén)；（2）中毒人數(shù)超過(guò)100人或者死亡1人以上的，應(yīng)當(dāng)于6小時(shí)內(nèi)上報(bào)衛(wèi)生部，并同時(shí)報(bào)告同級(jí)人民政府和上級(jí)人民政府衛(wèi)生行政部門(mén)；（3）中毒事故發(fā)生在學(xué)校、地區(qū)性或全國(guó)性重要活動(dòng)期間的應(yīng)當(dāng)于6小時(shí)內(nèi)上報(bào)衛(wèi)生部，并同時(shí)報(bào)告同級(jí)人民政府和上級(jí)人民政府衛(wèi)生行政部門(mén)；（4）其它需要實(shí)施緊急報(bào)告制度的食物中毒事故。,

10、食物中毒應(yīng)急處理準(zhǔn)備,一、應(yīng)急處理準(zhǔn)備原則要求“預(yù)防為主、常備不懈” 二、重大食物中毒應(yīng)急處理準(zhǔn)備與支援（一）食物中毒監(jiān)測(cè)與預(yù)警（二）資金儲(chǔ)備（三）食物中毒物資準(zhǔn)備三、食物中毒應(yīng)急處理演練四、預(yù)防和控制食物中毒的宣傳和公眾教育,食物中毒應(yīng)急物資準(zhǔn)備,1.食物中毒事故應(yīng)急處理專(zhuān)用車(chē)輛：配備救護(hù)頂燈、車(chē)載電話(huà)、儲(chǔ)物小冰箱、打印傳真機(jī)等。2.采樣用物品 （食品、現(xiàn)場(chǎng)涂抹樣品、便樣、患者嘔吐物、血樣等） 3.音像取證工具：錄音

11、機(jī)（筆）、照相機(jī)、攝像機(jī)各1部。4.現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)、測(cè)量設(shè)備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測(cè)試計(jì)、消毒劑濃度檢測(cè)試紙等。5.法律文書(shū)：食物中毒事故個(gè)案調(diào)查登記表、現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生監(jiān)督筆錄、現(xiàn)場(chǎng)檢查筆錄、調(diào)查筆錄、樣品采集記錄表、采樣記錄、樣品送檢單、先行登記保存證物通知書(shū)及存根、衛(wèi)生監(jiān)督意見(jiàn)書(shū)、責(zé)令改正通知書(shū)、衛(wèi)生行政控制決定書(shū)、封條、送達(dá)回執(zhí)等。6.參考資料：食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)、有關(guān)衛(wèi)生部規(guī)章、參考書(shū)籍等。7.其它有關(guān)物品：如便攜式電腦、

12、手機(jī)或?qū)χv機(jī)等通訊設(shè)施以及用于保存運(yùn)送培養(yǎng)基的冰箱、冰塊等,病因初步判斷,癥狀體征 微生物食物中毒大多為急性胃腸炎癥狀。如霍亂弧菌中毒表現(xiàn)為嘔吐、瀉水、脫水、體溫下降等；沙門(mén)菌、志賀菌中毒表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、發(fā)熱等；變形桿菌中毒以上腹部刀絞樣疼痛及急性胃腸炎癥狀為主；葡萄球菌腸毒素引起胃腸炎，神經(jīng)系統(tǒng)癥狀（肉毒毒素、真菌毒素、化學(xué)毒物）；呼吸道癥狀（鏈球菌等）；甲醇中毒主要表現(xiàn)為視覺(jué)障礙、復(fù)視、失明；亞硝酸鹽中毒主要表現(xiàn)為缺

13、氧癥狀，呼吸淺表、窒息；毒鼠強(qiáng)、氟乙酰胺主要表現(xiàn)為惡心、頭痛、痙攣、肌肉震顫、流涎、大小便失禁等；有機(jī)磷中毒主要表現(xiàn)為毒蕈堿樣和煙堿樣中毒癥狀；氰化物中毒主要表現(xiàn)為閃電樣擊倒，迅速死亡；安眠鎮(zhèn)靜藥、一氧化碳、嗎啡中毒主要表現(xiàn)為昏睡，等等。,病因初步判斷,潛伏期 平均潛伏期意義：是確診標(biāo)準(zhǔn)之一；用于估計(jì)事故發(fā)生發(fā)展態(tài)勢(shì)；決定調(diào)查起點(diǎn)餐次；確定采取防治措施的時(shí)間范圍，并考核防治措施效果。,病因初步判斷,4類(lèi)食物中毒的潛伏期

14、一般是： ① < 1 h 時(shí)，可能是化學(xué)性食物中毒；② 1～7 h時(shí)，可能是金葡菌或臘樣芽胞桿菌 ；③ 8～14 h時(shí)，可能是細(xì)菌性； ④ ≥15 h 時(shí)，可能是其它因素 。5. 我省常見(jiàn)的食物中毒及其平均潛伏期　　(1) 副溶血性弧菌(嗜鹽菌)食物中毒：海產(chǎn)品食物引起為主(魚(yú)鮮、蟶、蛤、熟魚(yú)、咸魚(yú)、蝦等)，海產(chǎn)品帶菌率可高達(dá)45～85%，潛伏期10～18 h (3～30 h)?！　?2)沙門(mén)氏菌

15、食物中毒：蛋、禽、肉、奶食物為主(例如1987年某市食用污染蛋品制造的冰淇淋，導(dǎo)致1113人發(fā)病)，潛伏期12～14 h (6～48 h),病因初步判斷,(3)有毒動(dòng)植物中毒：我省山區(qū)蘑菇有毒者可占50%以上。 毒蘑菇毒素中毒潛伏期 ≤2 h。(4)河豚魚(yú)中毒：病死率可達(dá)33%。魚(yú)類(lèi)組織胺中毒潛伏期1‘～3 h；河豚魚(yú)10’～45‘(10’～3 h)。(5)有機(jī)磷農(nóng)藥中毒：食用污染蔬菜或農(nóng)田施藥者發(fā)病，潛伏期可短至幾分鐘。(6)臘

16、樣芽胞桿菌中毒：致吐性毒素0.5～2 h (1～6 h)；致瀉性毒素10～12 h (6～16 h)。(7)葡萄球菌腸毒素中毒：潛伏期2～4 h (0.5～7 h)。(8)霍亂(可造成食物中毒型暴發(fā))：潛伏期1～5天。(9)化學(xué)性食物中毒潛伏期較為復(fù)雜，有食后幾分鐘到幾小時(shí)內(nèi)發(fā)病的如亞硝酸鹽、砷化物、磷化物、發(fā)芽土豆、苦杏仁、生物堿等，有潛伏期較長(zhǎng)的如毒蕈、敵鼠鈉鹽，一般進(jìn)食后l～3 d內(nèi)發(fā)病,病因初步判斷,季節(jié)性:微生物食物中毒

17、具有季節(jié)性，多發(fā)生在夏秋季。而化學(xué)性食物中毒沒(méi)有季節(jié)性 相關(guān)食品 肉奶蛋（沙門(mén)菌、彎曲菌、金葡） 水產(chǎn)品（弧菌、河豚魚(yú)、貝類(lèi)毒素） 剩米飯（蠟樣芽孢桿菌） 變質(zhì)甘蔗、酵米面、變質(zhì)銀耳、扁豆、魚(yú)膽… …,細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn),,細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn),,細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn),,細(xì)菌性食源性疾病的主要表現(xiàn),,,現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查,參與搶救病人

18、,患者調(diào)查,可疑食物調(diào)查,從業(yè)人員健康調(diào)查,,,,臨床癥狀,進(jìn)餐史,采樣,,,加工制售環(huán)節(jié),環(huán)境衛(wèi)生,采樣,醫(yī)務(wù)室查詢(xún),病假情況,采樣,,,,,,,,,,,,,,,現(xiàn)場(chǎng)處理,行政控制,追回銷(xiāo)毀中毒食物,指導(dǎo)現(xiàn)場(chǎng)消毒處理,修定治療方案,,,,,,,,,,,,流學(xué)病學(xué)資料,定案,實(shí)驗(yàn)室診斷,行政處罰,結(jié)案,上報(bào),,,,,,,,,食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理,《食物中毒事故個(gè)

19、案調(diào)查登記表》對(duì)病人的調(diào)查應(yīng)注意以下環(huán)節(jié)：1. 對(duì)最早發(fā)病和癥狀較重的病人進(jìn)行重點(diǎn)調(diào)查。 2. 盡可能調(diào)查到所有中毒病人，當(dāng)出現(xiàn)大規(guī)模食物中毒（數(shù)百人中毒）時(shí)，可以先整群抽樣進(jìn)行調(diào)查。3. 對(duì)每項(xiàng)癥狀和體征進(jìn)行仔細(xì)詢(xún)問(wèn)和記錄。不僅要調(diào)查是否出現(xiàn)發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀，還應(yīng)注意其程度、頻率、部位、出現(xiàn)的先后順序等，這些情況對(duì)鑒別診斷均有重要意義。,食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理,4.應(yīng)特別注意是否出現(xiàn)特殊臨床表現(xiàn)5.確定最早發(fā)

20、病和最晚發(fā)病的病人6.臨床檢驗(yàn)結(jié)果調(diào)查。如血常規(guī)、便常規(guī)對(duì)診斷細(xì)菌性食物中毒有重要意義7.對(duì)臨床治療措施及其效果進(jìn)行詢(xún)問(wèn)和記錄8.仔細(xì)詢(xún)問(wèn)病人進(jìn)餐情況。首先要求供餐者提供真實(shí)的食譜，根據(jù)食譜詢(xún)問(wèn)進(jìn)餐史。,食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理,9.一餐食品品種較多時(shí)，可以先把各種食品列表分別進(jìn)行詢(xún)問(wèn)調(diào)查，再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。10.對(duì)一定數(shù)量的同餐就餐而沒(méi)有發(fā)病者的進(jìn)餐情況進(jìn)行調(diào)查11.調(diào)查時(shí)應(yīng)注意了解是否存在食物之外的其它可能與發(fā)病有關(guān)的暴露因素，

21、以排除或確定非食源性疾病。,食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理,可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢驗(yàn)，也可進(jìn)行簡(jiǎn)易動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行快速檢驗(yàn)時(shí)一定要設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，并由有一定檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的調(diào)查人員進(jìn)行操作。樣品還應(yīng)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步按照標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。簡(jiǎn)易動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)快速查明含有毒性很強(qiáng)致病物質(zhì)的中毒食品可以起到很大幫助。,現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)、簡(jiǎn)易動(dòng)物實(shí)驗(yàn),調(diào)查可疑中毒食品加工銷(xiāo)售過(guò)程,確定調(diào)查的重點(diǎn)食品。 食物的來(lái)源、加工方法、加工過(guò)程（包括使用的原料和配料、調(diào)料、

22、食品容器）、存放條件和食用方法、進(jìn)食人員及食用量等情況。了解廚師或其它食品加工人員的健康狀況。不能僅僅檢查健康證，是否患有腹瀉、手外傷、皮膚病等有礙食品衛(wèi)生的疾病?？梢芍卸臼称芳庸さ臄?shù)量、銷(xiāo)售數(shù)量及流向。對(duì)違反法律、法規(guī)的情況均應(yīng)以現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生監(jiān)督筆錄或調(diào)查筆錄的形式予以記錄，必要時(shí)進(jìn)行照相、錄相。,調(diào)查時(shí)應(yīng)對(duì)加工人員敘述的每一句話(huà)、每一個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行分析，根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)情況和所提供的證據(jù)判斷其真?zhèn)?，必要時(shí)現(xiàn)場(chǎng)重復(fù)模擬操作。 對(duì)加

23、工人員應(yīng)分別單獨(dú)進(jìn)行調(diào)查，以相互印證提供的情況。,調(diào)查可疑中毒食品加工銷(xiāo)售過(guò)程,食物中毒調(diào)查的整個(gè)過(guò)程從某種意義上是一個(gè)取證的過(guò)程，調(diào)查人員必須注意證據(jù)的客觀性，關(guān)聯(lián)性和法律性，要充分利用錄音機(jī)、照相機(jī)、攝像機(jī)等手段，記錄下當(dāng)事人談話(huà)和現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生狀況。 在同有關(guān)人員進(jìn)行詢(xún)問(wèn)調(diào)查時(shí)，必須做好個(gè)案詢(xún)問(wèn)筆錄，現(xiàn)場(chǎng)檢查完畢，如實(shí)、客觀記錄下現(xiàn)場(chǎng)檢查情況，并經(jīng)被調(diào)查人閱后簽字認(rèn)可。 衛(wèi)生行政部門(mén)應(yīng)認(rèn)真審查食物中毒的全部

24、證據(jù)材料，不足的，及時(shí)補(bǔ)充或糾正，要求事實(shí)清楚、證據(jù)確鑿充分。,取 證,● 嚴(yán)格控制封存范圍，盡量縮短控制時(shí)間，避免將不相干的食品和物品列入封存范圍，能封存部分的，不封存全部。對(duì)易腐易壞的食品物品，應(yīng)盡量縮短封存時(shí)限，在責(zé)令當(dāng)事人承擔(dān)保全責(zé)任時(shí)，酌情予以一定幫助。 ● 對(duì)封存價(jià)值高，批量大的食品、物品時(shí)要注意聽(tīng)取當(dāng)事人的陳述和申辯，要把法律的規(guī)定講深講透，避免簡(jiǎn)單、粗暴。盡量減少敵對(duì)情緒。當(dāng)周?chē)罕姳硎静粷M(mǎn)時(shí)，應(yīng)做出

25、必要的解釋?zhuān)瑺?zhēng)取支持與協(xié)助 ● 檢驗(yàn)和衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)后認(rèn)為可解封的應(yīng)盡快解封。,行政控制的注意事項(xiàng),現(xiàn) 場(chǎng) 調(diào) 查 中 的 實(shí) 驗(yàn) 室 支 持,,實(shí)驗(yàn)室診斷的目的意義,? 識(shí)別暴發(fā)、確定病因 ? 確定傳染來(lái)源? 確定流行范圍? 確定傳播鏈 ? 發(fā)現(xiàn)特殊的毒株? 判斷院內(nèi)交叉感染? 疫苗實(shí)施項(xiàng)目的考核 ? 仲裁依據(jù),,,,臨床,實(shí)驗(yàn)室,流調(diào),圍繞病因假設(shè)進(jìn)行進(jìn)一步證實(shí)共同的危險(xiǎn)因素

26、,專(zhuān)業(yè)知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)充分物質(zhì)準(zhǔn)備高度的責(zé)任心,圍繞病因假設(shè),采集實(shí)驗(yàn)樣品、確定檢驗(yàn)項(xiàng)目,采 樣,樣品的采集對(duì)食源性疾病的明確的診斷和對(duì)病人的急救治療都有重要意義。調(diào)查員(經(jīng)過(guò)培訓(xùn))應(yīng)認(rèn)真準(zhǔn)備好采樣器材(滅菌采樣容器，運(yùn)送培養(yǎng)基、無(wú)菌棉簽、采血針筒、試管等)，與其他調(diào)查員共同深人現(xiàn)場(chǎng)，分析中毒的原因。明確檢驗(yàn)?zāi)康?，突出重點(diǎn)。 采樣應(yīng)做到及時(shí)、正確、有代表性并注意無(wú)菌操作。,樣 品 采 集,,1.食品樣品采集 可疑食品是食物中毒檢

27、驗(yàn)最重要的樣品，由于食物中毒是群發(fā)性的，所以患者共同食用，且在加工、儲(chǔ)藏過(guò)程中，最有可能受到細(xì)菌污染的食物是首選的采集樣品。包括成品、半成品、調(diào)料、生鮮原料、蘑菇等。 （1）調(diào)查人員應(yīng)對(duì)食品加工場(chǎng)所進(jìn)行認(rèn)真全面搜查，以客觀結(jié)果判斷是否還存在剩余食品或者原料。（2）餐桌上的剩余食物為最好的樣品，應(yīng)及時(shí)采取；殘余食物將殘余食物用滅菌鑷子或勺采取，置入滅菌之容器內(nèi). （3）如無(wú)剩余食物時(shí)，可用滅菌棉拭涂擦盛可疑食物的容器表面或采取容器的

28、滅菌生理鹽水洗液作為樣品。（4）體積較大的肉食與魚(yú)類(lèi)等，應(yīng)將表面消毒后，取內(nèi)部樣品置于無(wú)菌容器內(nèi)；（5）采集同一加工場(chǎng)所加工的其它直接入口食品；（6）必要時(shí)也可采取半成品或原料。若是化學(xué)性、有毒動(dòng)植物食物中毒采集食品原料尤為重要。（7）罐頭檢樣直接采取，若僅?？蘸?，可將空盒送檢。,樣 品 采 集,2. 炊具、食具、容器：對(duì)于刀、墩、容器、冰箱、水池、下水道口、設(shè)備、工具等可能直接或間接接觸可疑中毒食品的物品表面，可用滅菌棉拭蘸取

29、滅菌鹽水反復(fù)涂檫后，將棉拭置于滅菌容器內(nèi)。菜墩表面用滅菌刀刮取木屑置于滅菌容器內(nèi)。抹布可用滅菌剪刀剪取一塊置于滅菌容器內(nèi)。這類(lèi)采樣主要針對(duì)細(xì)菌性食源性疾病； 3.大便樣品采集 （1）最好用便盒或采便管采集腹瀉病人大便；（2）無(wú)論中毒病人是否已經(jīng)服藥，均應(yīng)進(jìn)行大便采集。（3）應(yīng)選擇發(fā)病初期具有同樣癥狀且較嚴(yán)重病例的大便。（4）采集時(shí)應(yīng)避免混入其他物質(zhì)。,樣 品 采 集,肛拭采樣,A、采樣人員采樣前檢查肛拭管表面是否光滑、有無(wú)破損

30、及裂痕以防意外；B、采樣者采樣時(shí)囑被檢者放松，充分暴露其肛門(mén)，避開(kāi)內(nèi)外痔，將肛拭管輕輕插入肛門(mén)約5cm，兒童約２-3cm,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)幾圈，擦取直腸表面的粘液后取出，放入增菌液或C-B運(yùn)送培養(yǎng)基中。C、為防止污染，采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)將裝有增菌液的試管口在酒精燈火焰上滅菌。,4.嘔吐物采集 嘔吐物已被處理掉時(shí)，涂抹被嘔吐物污染的物品,或采集洗胃液。5.血液采集如懷疑是沙門(mén)菌、變形桿菌、致瀉大腸艾希菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者急性期（3天以?xún)?nèi)）

31、和恢復(fù)期（2周左右）各采取血液2-3毫升，待凝固時(shí)分離血清，做抗體滴度測(cè)定。同時(shí)采集正常人靜脈血作為對(duì)照。 6.食品加工人員帶菌情況在細(xì)菌性食物中毒的調(diào)查、檢驗(yàn)過(guò)程中，除必須確定致病菌外，還必須追蹤這些致病菌的來(lái)源，應(yīng)根據(jù)食物中毒情況，采集售貨員或制做食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關(guān)人員的檢樣，特別是那些在中毒發(fā)生前或正在患有腸炎、發(fā)燒、化膿及可疑帶菌者進(jìn)行采樣?？刹蓸邮?、鼻、咽和有感染灶的皮膚等涂抹樣、便樣。7.尿液采集,

32、樣 品 采 集,,8.水樣采集在調(diào)查水域污染狀況時(shí)，需進(jìn)行綜合分析判斷，抓住基本點(diǎn)（如水流入前、流入后充分混合的地點(diǎn)，用水地點(diǎn)，流出地點(diǎn)等），以取得代表性水樣。對(duì)江河、湖泊、泉水、井水等水源采樣時(shí)，將容器浸入水體中，待水至容器2／3處時(shí)取出。在采集管網(wǎng)系統(tǒng)水樣前，先消毒，再放水5分鐘，以保證樣品具有代表性。嚴(yán)格按無(wú)菌采樣規(guī)范要求采樣。,采什么樣,9.組織器官標(biāo)本：組織器官采集包括尸解或手術(shù)后采取的胃、肝、腎、肺等重要器官標(biāo)本,尸

33、解最好在病人死亡后48 h內(nèi)進(jìn)行,要注意防止所用器械帶來(lái)污染。 每一采集部位應(yīng)更換消毒器械,每種組織應(yīng)多部位采集,每份標(biāo)本應(yīng)采集50～100 g 于無(wú)菌潔凈容器中,分別保存冷藏送檢。 10.其它采樣 對(duì)廚房、倉(cāng)庫(kù)、儲(chǔ)藏室中發(fā)現(xiàn)的鼠及糞便、貓、狗等亦需采樣。在肉毒中性毒素中毒時(shí)，對(duì)做食品的原料和周?chē)耐寥酪嘈璨蓸印?樣 品 采 集,食物中毒采樣數(shù)量 樣品種類(lèi) 檢驗(yàn)?zāi)康?

34、 樣品量 飲用水 全分析及致病菌 >5 L 液體食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200ml 固體食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200g 嘔吐物 致病菌或毒物分析

35、 >50g(ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 >200ml 腹瀉物 致病菌或毒物分析 >50g(ml) 血液 病原分離、抗體分析 >5ml 腦脊液 病原分離

36、 >2ml 皮損分泌物 病原分析 滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取,,,,,采多少,所有標(biāo)本在采集時(shí)立即分裝，一式 N 份(不同檢驗(yàn)項(xiàng)目、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、其它實(shí)驗(yàn)室復(fù)核、留樣),采什么樣,對(duì) 照內(nèi)對(duì)照外對(duì)照,暴發(fā)性食源性疾病,多途徑傳播疾?。ù竽c桿菌O157:H7 ）潛伏期長(zhǎng)的疾病（傷寒、李斯特菌等）非消化道癥狀的疾病水源性傳播疾病,,需注意,什么

37、時(shí)間采,采樣時(shí)間氟乙酰胺在體內(nèi)數(shù)小時(shí)后就開(kāi)始轉(zhuǎn)化為氟乙酸，血中在十余小時(shí)或數(shù)天后就檢不出了氟乙酰胺，這個(gè)階段體內(nèi)氟乙酸濃度仍較高，所以應(yīng)該采集患者的血樣或尿樣來(lái)檢測(cè)氟乙酸；毒鼠強(qiáng)在體內(nèi)代謝緩慢，中毒后數(shù)月后采集的血樣對(duì)病因確定仍有重要價(jià)值。血清：如懷疑是沙門(mén)菌、變形桿菌、致瀉大腸艾希菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者急性期（3天以?xún)?nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各采取血液2~3毫升，待凝固時(shí)分離血清，做抗體滴度測(cè)定。如做血液細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)將采取的血

38、液直接注入含有玻璃株的無(wú)菌小燒瓶中進(jìn)行振搖，然后加入相應(yīng)培養(yǎng)基或直接將血液注入培養(yǎng)基中。如懷疑副溶血性弧菌食物中毒時(shí)，應(yīng)分別在患者中毒1~2天和1周時(shí)采取血液做抗體滴度測(cè)定。（因1周后抗體就降低或消失）。病毒分離標(biāo)本最好在發(fā)病初期（1-2天）采,樣 品 采 集,怎么采,不同檢驗(yàn)?zāi)康牡臉悠芳?xì)菌分離 病毒分離抗原-抗體檢測(cè)化學(xué)毒物檢測(cè)無(wú)菌部位基因檢測(cè)——木制的棉拭子 ？,食物中毒事件怎么采,① 糞便可直接采取或

39、采便管插入直腸采集；嘔吐物可注入滅菌試管內(nèi)，由于胃酸能使樣品為酸性，不利于細(xì)菌的存活，所以應(yīng)在采集的嘔吐物內(nèi)加入10％蘇打予以中和，以保持細(xì)菌的活性。咽喉涂抹樣可用棉簽涂擦咽喉部采取②洗胃液直接抽取注入滅菌容器內(nèi)。③血液血樣的采集應(yīng)盡早抽取患者的血液，在中毒患者急性期必要時(shí)可作血樣培養(yǎng)，但主要是用來(lái)檢測(cè)患者血液中的抗體。一般需采血二次以上，第一次在發(fā)病初期(3天以?xún)?nèi))，第二次是在恢復(fù)期(2周左右)，若患者血中抗體呈明顯上升趨勢(shì)，即可

40、證實(shí)其受到過(guò)相應(yīng)致病菌的感染。方法是從肘靜脈采取血液2—3ml，注入干熱滅菌試管內(nèi)，使成斜面，待凝固后，分出血清送檢。如做血液細(xì)菌培養(yǎng)，可直接注入滅菌并帶有玻璃珠的三角瓶中，立即振搖數(shù)分鐘，以防凝固，然后送檢。,食物中毒事件怎么采,(3)對(duì)可疑中毒患者在解剖前不要將尸體用福爾馬林、酒精等化學(xué)物處理，解剖臺(tái)要沖洗干凈，所用的解剖器具、手套要預(yù)先沖洗干凈、晾干備用，不要沾染消毒藥液（如來(lái)蘇、酒精、升汞溶液等）以免污染了檢材。例如在解剖時(shí)使用

41、了升汞溶液浸泡過(guò)的手套，手套上的升汞就可能對(duì)樣本污染，會(huì)干擾了病因的判定。在尸體周?chē)灰獓姙⑥r(nóng)藥滅蚊蠅，以免污染可能用于毒物分析的檢材。尸體解剖檢樣可采取胃腸內(nèi)容物、臟器、腸系膜淋巴結(jié)及血液等。內(nèi)容物用滅菌注射器或滅菌器械采取，置入滅菌瓶?jī)?nèi)；臟器應(yīng)先用烙鐵燒灼消毒表面，再用解剖刀剪和鑷子取內(nèi)部檢樣10—20克，置于滅菌容器內(nèi)送檢。血液及體液用滅菌注射器直接抽取或用滅菌棉簽蘸取。對(duì)死亡患者一般從心腔內(nèi)采集血液，也可采集腋下靜脈、頸靜脈

42、、股靜脈血液，心腔內(nèi)血液和周?chē)卸疚餄舛炔煌?食物中毒事件怎么采,疑為百草枯中毒患者的血液不能用玻璃試管，因?yàn)椴ＡЭ梢允拱俨菘葩g化，鈍化后的百草枯實(shí)驗(yàn)室是不能檢出的。疑為一氧化碳中毒者應(yīng)盡早抽血5-15毫升注入玻璃試管內(nèi)，量要直裝至瓶口，必須用密封玻璃塞塞緊，避免瓶中殘留空氣，血液是分析一氧化碳中毒的唯一檢體。其他易揮發(fā)毒物樣本也要盡量密封保存，盡快檢測(cè)。如氰化物。,怎么采,樣品采集程序 采樣用物品準(zhǔn)備 采樣程序

43、方法 采樣紀(jì)錄 樣品編號(hào) 樣品保存,使用衛(wèi)生部統(tǒng)一制定的采樣記錄文書(shū)，經(jīng)有關(guān)責(zé)任人員簽字后送檢；,注意,樣 品 采 集,影響采樣的主要因素,缺乏及時(shí)性： 由于一些消費(fèi)者對(duì)《食品安全法》觀念淡薄，缺乏自我保護(hù)意識(shí)，食源性疾病發(fā)生后他們不是首先及時(shí)向相關(guān)部門(mén)報(bào)告疫情，而是自己先與經(jīng)營(yíng)者交涉，在不能如愿的情況下才向衛(wèi)生監(jiān)督部門(mén)舉報(bào)，因此造成一是經(jīng)營(yíng)者在得知發(fā)生食源性疾病的情況后，首先處理掉

44、一切可疑剩余食品，對(duì)加工經(jīng)營(yíng)現(xiàn)場(chǎng)、工具、容器作了相應(yīng)的處理；二是延誤了報(bào)告的時(shí)間，從而影響了對(duì)可疑食品和病人排泄物的采集。采樣缺乏代表性： 由于食源性疾病多是突發(fā)性的，如細(xì)菌性食物中毒都有特定的潛伏期，最短1h ～ 3h，一般5h～ 10h ，但當(dāng)相關(guān)部門(mén)接到疫情到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后，往往時(shí)間周期間隔較長(zhǎng)，可疑食物已清理，即使采到幾份剩余食物，也可能不是當(dāng)日餐桌上剩余菜肴，因此，常常出現(xiàn)食品中檢出的細(xì)菌與病人排泄物中檢出的細(xì)菌不相符，影響了

45、結(jié)果的分析。,影響采樣的主要因素,食品加工制作現(xiàn)場(chǎng)各環(huán)節(jié)的采樣往往能提供一些線(xiàn)索，但常常見(jiàn)到現(xiàn)場(chǎng)已被清掃，食具和用具已清洗干凈，同樣也影響了食品加工工具、容器、場(chǎng)所的采樣和檢驗(yàn)。采樣缺乏典型性：中毒病人發(fā)病后，患者一般開(kāi)始時(shí)自行用抗菌毒，嚴(yán)重時(shí)才去當(dāng)?shù)蒯t(yī)院治療，由于一些醫(yī)務(wù)人員對(duì)食源性疾病報(bào)告制度意識(shí)不強(qiáng)，導(dǎo)致了只管用藥治療，忽視了對(duì)病人嘔吐物和排泄物的留取，大量的抗菌素抑制了致病菌繁殖，從而影響了致病菌的檢出率。采樣缺乏完整性：

46、一般中毒病人發(fā)病期的血液能采集到，但是采集恢復(fù)期的血液，由于病人的不配合或外出經(jīng)常采不全．也影響了檢驗(yàn)結(jié)果的全面分析。,樣品的處理,(1)固體食物如系大塊魚(yú)肉、組織臟器等，先用烙鐵燒灼表面，或在沸水中燙3—5秒鐘，然后再取內(nèi)部檢樣5—10克，按無(wú)菌要求，剪碎后置無(wú)菌乳缽內(nèi)，加人適量滅菌海沙研細(xì)，再加人無(wú)菌生理鹽水作1：5稀釋?zhuān)靹虺恋砗螅∩锨逡哼M(jìn)行接種和涂片染色鏡檢。(2)液體食物可將液體食物直接接種培養(yǎng)基，或離心(每分鐘3000

47、轉(zhuǎn)以上)半小時(shí)后，采取沉淀物進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。(3)罐頭食品如罐頭尚未打開(kāi)，先用溫水洗凈表面，并以95％酒精燃燒消毒，然后用滅菌開(kāi)口刀將罐頭打開(kāi)，以無(wú)菌操作將檢樣取出進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)。如罐頭為空盒，可用肉湯培養(yǎng)基沖洗盒內(nèi)壁，以洗液做細(xì)菌培養(yǎng)。,樣品的處理,(4)糞便和嘔吐物以無(wú)菌生理鹽水，充分?jǐn)嚢杌靹?、靜置，待其中粗塊下沉后，取上清液進(jìn)行接種及涂片染色鏡檢。(5)洗胃液用無(wú)菌試管低速離心后，取沉淀物進(jìn)行檢驗(yàn)。(6)血液檢樣用做細(xì)菌培養(yǎng)的抗

48、凝血，以滅菌吸管吸取，注人肉湯或其他培養(yǎng)基內(nèi)增菌。用于測(cè)定患者血清效價(jià)的血樣，可用離心沉淀法或自然析出法將血清分出，與可疑中毒菌株作試管凝集試驗(yàn)。(7)炊事用具擦洗水等可直接接種培養(yǎng)基。,樣本標(biāo)簽內(nèi)容,樣本編號(hào)——唯一性樣本來(lái)源——從什么物質(zhì)、材料中采集的，如病理采集的肝臟就可標(biāo) 注為某某患者肝臟；樣本數(shù)量——包裝中樣本的數(shù)量，如此包裝中同時(shí)采集了2塊肝臟樣本

49、 就要標(biāo)注為2 采樣時(shí)間：采樣地點(diǎn)：采樣人：樣本處理情況：抗凝劑 、運(yùn)送培養(yǎng)基、標(biāo)本狀況（開(kāi)封食品）,樣本標(biāo)簽內(nèi)容,最小包裝（每個(gè)標(biāo)本） 每個(gè)包裝箱 每批樣本后要附上一個(gè)樣本清單，詳細(xì)列出此批樣本的名稱(chēng)、狀態(tài)和注意事項(xiàng)。,,樣品的包裝,感染性樣本 放射性樣本 易腐性樣本 揮發(fā)性樣本,樣品的運(yùn)送,標(biāo)本應(yīng)由專(zhuān)業(yè)人員專(zhuān)人運(yùn)送，最好使用專(zhuān)

50、車(chē)。郵寄樣品除患者檢測(cè)血漿外，其他樣本不宜通過(guò)郵寄方式轉(zhuǎn)運(yùn)。檢測(cè)血漿用帶蓋的小塑料管盛裝，外襯緩沖包裝和吸附材料，通過(guò)EMS郵寄。在送郵件時(shí)要明確向郵局說(shuō)明郵寄物品的成分及安全性。在運(yùn)送過(guò)程中，要保證條件能夠持續(xù)保障。,樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度,檢測(cè)目的 細(xì)菌 病毒 寄生蟲(chóng) 抗原抗體 核酸 化學(xué)毒物預(yù)期保存時(shí)間,樣品的保存運(yùn)送,安全性 樣品的安全 環(huán)境的安全（不泄漏

51、、不污染）交接手續(xù),樣品送檢注意事項(xiàng),1）采集的樣品一般應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)接種完畢，故必須及時(shí)送檢。2）夏季送檢樣品時(shí)，應(yīng)注意冷藏。不得加入任何防腐劑。3）應(yīng)附詳細(xì)送檢單，應(yīng)填明樣品名稱(chēng)、份數(shù)、重量、來(lái)源、中毒表現(xiàn)、送檢時(shí)間、有范圍的檢驗(yàn)項(xiàng)目、采樣條件（容器是否滅菌、有無(wú)封條）、送樣人。4）樣品必須有牢固的標(biāo)簽，包裝嚴(yán)密封閉。5）注意無(wú)菌操作，防止污染，以免影響結(jié)果。6）采樣過(guò)程中履行必要的采樣手術(shù)。（發(fā)生中毒單位負(fù)責(zé)人簽封與開(kāi)具

52、收據(jù)等）7）采集肛拭人數(shù)，中毒事件規(guī)模較小，患者人數(shù)10人以下的，全部采樣；中毒事件規(guī)模較大，患者人數(shù)較多，至少應(yīng)對(duì)30%-50%臨床癥狀典型的患者進(jìn)行采集。,檢 驗(yàn),檢什么,●實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目要結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查.臨床.血檢.電生理.影像學(xué)檢查等結(jié)果?！翊_定實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)同時(shí)考慮以下幾點(diǎn): 早期IgM和雙份IgG血清學(xué)檢驗(yàn)； 排泄物.分泌物.血液中的病原體的形態(tài)學(xué).血清學(xué)和核酸分型鑒定。 人體外環(huán)境病原鑒定

53、結(jié)果與人體內(nèi)抗原、抗體的吻合、匹配； 毒力分析和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥糇C； 病原侵入與發(fā)病的時(shí)間順序； 主導(dǎo)病原與併發(fā)病原的甄別;,● 安排檢驗(yàn)項(xiàng)目要有幾套預(yù)備方案,實(shí)驗(yàn)的無(wú)果和失敗。,檢什么,病原分離 細(xì)菌——需氧菌、厭氧菌、兼性厭氧菌、L型菌 病毒 寄生蟲(chóng)血清學(xué)檢查： 抗原 抗體 急性期IgM抗體 急性期和恢復(fù)期雙份靜脈血測(cè)定特異性IgG抗體。核酸檢測(cè) 特征基因、毒

54、力基因、溯源比較定性/定量,細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室診斷,致病菌的定量檢驗(yàn)對(duì)細(xì)菌性食物中毒的調(diào)查 ?需要做定量檢驗(yàn)的細(xì)菌（食物中毒與攝入量有關(guān)）產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌 ?樣品：中毒相關(guān)食品、糞便、嘔吐物收集致病菌對(duì)人的最低感染劑量的資料危險(xiǎn)性分析中對(duì)暴露量的評(píng)估攝入的菌量與產(chǎn)生有害健康作用的概率和程度成正相關(guān)，但通常不是呈線(xiàn)性關(guān)系。攝入菌量的增加通常降低腸道疾病的潛伏期。,怎么檢,靈敏度、準(zhǔn)確度、

55、重現(xiàn)性、不同方法結(jié)果的可比較性用什么標(biāo)本用什么方法用什么試劑,對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開(kāi)展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的影響。,檢測(cè)項(xiàng)目和方法的確定,分析方法的選用要考慮待測(cè)樣品（原形、代謝物）、分析要求（定性、定量）、樣品類(lèi)型、實(shí)驗(yàn)室條件，分析目的等因素，還要考慮時(shí)效性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性等要求。有時(shí)毒物有定性結(jié)果即可說(shuō)明問(wèn)題，而對(duì)于那些有環(huán)境或內(nèi)源性本底的毒物，或需用于現(xiàn)場(chǎng)評(píng)

56、價(jià)、應(yīng)急處理方法選擇或用于患者治療效果評(píng)價(jià)的要用定量分析。臨床治療藥物監(jiān)測(cè)必須進(jìn)行定量分析。,,,食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)國(guó)家檢驗(yàn)的演變,怎么檢,快速靈敏方法的應(yīng)用儀器自動(dòng)化方法分離培養(yǎng)方法的改進(jìn),快速靈敏方法的應(yīng)用,1.細(xì)菌培養(yǎng)的前、后處理方法的自動(dòng)化 培養(yǎng)法的前處理包括采樣、稱(chēng)量、分樣、勻漿、制作瓊脂培養(yǎng)基、樣品與培養(yǎng)基混釋等。這些操作自動(dòng)化儀器有：自動(dòng)稱(chēng)量分注裝置、均化器、培養(yǎng)基制作裝置、菌液自動(dòng)涂抹裝置等。培養(yǎng)

57、后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的自動(dòng)化裝置有：筆型手動(dòng)式計(jì)數(shù)器、用圖像將平板內(nèi)菌落攝錄下來(lái)的自動(dòng)計(jì)數(shù)儀、彩色圖像菌種鑒定儀。,快速靈敏方法的應(yīng)用,各種簡(jiǎn)易培養(yǎng)基：簡(jiǎn)易培養(yǎng)基是食品微生物檢驗(yàn)中應(yīng)用較為普遍的一種快速簡(jiǎn)便的方法。培養(yǎng)基有印花型、平板型、濾膜型等多種類(lèi)型。例如，日本幾家公司生產(chǎn)的含有酶顯色底物的印花型培養(yǎng)基，由于有酶顯色底物，因而有快速易判斷等特點(diǎn)。液體樣品檢測(cè)用培養(yǎng)基有多種形式，有的在孔板上固定有無(wú)菌液體培養(yǎng)基，檢測(cè)時(shí)只要注入液體樣品即可

58、判斷結(jié)果；顆粒狀培養(yǎng)基加入液體樣品培養(yǎng)即可判斷結(jié)果；而干燥型培養(yǎng)基是將培養(yǎng)基成分和膠體化物質(zhì)涂布在培養(yǎng)基墊上，它便于攜帶，操作簡(jiǎn)便。,快速靈敏方法的應(yīng)用,快速靈敏方法的應(yīng)用,檢測(cè)活菌數(shù)方法與器材 不需進(jìn)行培養(yǎng)即可直接檢測(cè)活菌數(shù)的方法有：觀察細(xì)菌引起電流阻抗值變化的阻抗測(cè)定法；以細(xì)胞內(nèi)ATP為指標(biāo)的生物發(fā)光法；用熒光劑標(biāo)記微生物細(xì)胞測(cè)定發(fā)光量的熒光染色法；用濾膜集菌，用ATP發(fā)光試劑標(biāo)記，然后進(jìn)行測(cè)定的濾膜光子檢測(cè)法等。這些方法是直接檢

59、測(cè)活菌數(shù)，因而適于觀察細(xì)菌隨時(shí)問(wèn)發(fā)生的變化，可用于發(fā)酵食品的質(zhì)量管理、飲料生產(chǎn)工藝的監(jiān)測(cè)等。,快速靈敏方法的應(yīng)用,高選擇性顯色培養(yǎng)基,食物中毒致病菌簡(jiǎn)易快速的檢測(cè)方法與器材,沙門(mén)氏菌、O157大腸菌、李斯特菌等食物中毒致病菌如用培養(yǎng)法檢測(cè)，由于菌量少，需進(jìn)行前培養(yǎng)和增菌培養(yǎng)，故費(fèi)時(shí)較多，且需熟練的檢測(cè)技術(shù)。因此，近年來(lái)國(guó)外對(duì)食物中毒致病菌簡(jiǎn)易快速的檢測(cè)方法與器材的研究十分重視，許多公司紛紛研制出省時(shí)、容易判斷結(jié)果的簡(jiǎn)易細(xì)菌檢測(cè)方法與器材

60、。目前，已達(dá)到實(shí)用化程度的快速、簡(jiǎn)易的細(xì)菌檢測(cè)方法有：應(yīng)用抗原體反應(yīng)原理的免疫凝集法、免疫沉降法、免疫熒光法、 EIA法，免疫色譜法、以及磁珠法等，DNA探針?lè)?，PCR法。,分子生物學(xué)技術(shù)在檢測(cè)食源性病原微生物中的應(yīng)用,DNA探針技術(shù) DNA探針技術(shù)是最新發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)特異、靈敏、快速的檢測(cè)方法，但因有一定比例的假陽(yáng)性反應(yīng)，故所有陽(yáng)性結(jié)果必須用標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)方法加以確證。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù) PCR技術(shù)原理為提高DNA探針

61、的敏感性，可先將靶 DNA序列擴(kuò)增，增加 DNA數(shù)量，使其達(dá)到足夠的檢測(cè)量，若反應(yīng)以動(dòng)力學(xué)為基礎(chǔ)，則能定量分析。在PCR反應(yīng)中引人Taq聚合酶使反應(yīng)得以半自動(dòng)化和簡(jiǎn)便反應(yīng)程序。用擴(kuò)增DNA進(jìn)行的PCR反應(yīng)具有無(wú)與倫比的優(yōu)越性。,快速檢出細(xì)菌的毒素,自臨床標(biāo)本中直接檢出細(xì)菌的毒素，常比細(xì)菌培養(yǎng)更可靠。如難辨梭菌在正常腸道中也可出現(xiàn)，故對(duì)抗生素相關(guān)性腸炎的診斷，檢出其毒素比細(xì)菌培養(yǎng)更有意義。已應(yīng)用此類(lèi)毒素的單抗以快速凝集或EIA法自糞便標(biāo)本

62、中直接檢出毒素A或B進(jìn)行診斷。產(chǎn)毒素埃希氏菌（ETEC）感染的診斷主要依靠檢查細(xì)菌的LT（熱敏毒素）與ST（耐熱毒素）可應(yīng)用其單抗以多種免疫學(xué)手段檢出。腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC）的重要特征是產(chǎn)生Vero細(xì)胞毒素（VT）或稱(chēng)志賀樣毒素（SLT）。由于EHEC的血清型繁多，生化反應(yīng)也可不典型，故檢查該菌的毒素極具診斷價(jià)值。,快速檢出細(xì)菌的毒素,英國(guó)Unipaih公司已研制出VTEC的PRLA乳膠凝集試劑分別檢查VT-1與VT-2，試驗(yàn)

63、時(shí)以多粘菌素裂解菌體，釋出VT，與乳膠試劑在U形板中溫育24小時(shí)，肉眼判定有無(wú)凝集。日本生研公司的VIEC -RPLA也為快速凝集試劑。Bentin等注意到90%的VTEC在洗過(guò)的羊血肉湯平板上經(jīng)37℃溫育過(guò)夜可表現(xiàn)出溶血；而非溶血菌落均無(wú)VT或SLT基因。這一發(fā)現(xiàn)為VTEC的檢測(cè)提供一迅速的篩查方法?！　?金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的多種腸毒素也用單抗的協(xié)同凝集試驗(yàn)迅速檢出，是診斷該菌致成的事物中毒的可靠手段。應(yīng)用反向被動(dòng)乳膠凝集法（Oxo

64、id公司試劑）快速檢測(cè)葡萄球菌的TSST1，可及時(shí)診斷出由葡萄球菌致成的中毒性休克綜合征。,快速的細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感性試驗(yàn),新的檢測(cè)手段，如分子生物學(xué)手段檢測(cè)細(xì)菌的耐藥基因，自動(dòng)化的藥敏試驗(yàn)儀器，E test法等可提高準(zhǔn)確性與效率 。　　 快速紙片法（Nitrocefin）檢查β內(nèi)酰胺酶，對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，卡他莫拉菌有重要意義。　 快速乳膠凝集試驗(yàn)（日本生研公司）可檢出變異的青霉素結(jié)合蛋白（PBP2a）經(jīng)與

65、mecA基因檢測(cè)比較，其敏感性98.5%，特異性達(dá)100%。,細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序,1 樣品采集 以無(wú)菌容器采集可疑樣品及病人的排泄物。2分離培養(yǎng) 在病原菌不明確的情況下，多準(zhǔn)備一些各類(lèi)菌的選擇性培養(yǎng)基，如ss平板，伊紅美蘭平板作沙門(mén)菌、志賀菌；血平板、P-K瓊脂平板作金黃色葡萄球菌分離用；氯化鈉蔗糖瓊脂或TCBS瓊脂作副溶血性弧菌及溶藻性弧菌用；甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂作蠟樣芽孢桿菌分離用等等。接種：取適量可疑樣品放置無(wú)菌平皿

66、中，加入與樣品等量的無(wú)菌生理鹽水，將樣品與生理鹽水充分混勻，用取菌環(huán)分別接種于各種平板培養(yǎng)基上，置37℃ 培養(yǎng)20h左右，觀察各平皿菌落特征，進(jìn)一步鑒定。,細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序,3. 取優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行系統(tǒng)鑒定 對(duì)優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行涂片鏡檢，革蘭染色，以形態(tài)特征、菌落特點(diǎn)做出意向性判斷進(jìn)行下步鑒定，接種克氏雙糖含鐵瓊脂培養(yǎng)，然后做血清凝集，生化實(shí)驗(yàn)，毒性實(shí)驗(yàn)等，報(bào)結(jié)果 4.活菌數(shù)的測(cè)定某些細(xì)菌在食品中須達(dá)到一定量時(shí)才可引起中毒癥狀

67、(如金黃色 葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等)。方法是取樣品的各個(gè)稀釋液（包括1:10）0.1mL接種2只相應(yīng)的平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30℃培養(yǎng)24小時(shí)， 數(shù)出可疑菌落數(shù)，然后挑取典型菌落5個(gè)或更多的可疑菌落，經(jīng)過(guò)證實(shí)試驗(yàn)后，計(jì)算出菌落數(shù)。,細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序,5.毒素測(cè)定 有些細(xì)菌性食物中毒并不是細(xì)菌本身所引起，而是由其所產(chǎn)生的毒素引起的，如金黃色葡萄球菌腸毒素、肉毒梭菌毒素，故須做其毒素

68、的測(cè)定。 動(dòng)物試驗(yàn)將可疑食物制備浸出液，或分離所得的上清液，皮下或腹腔注射動(dòng)物(小白鼠 )體內(nèi)，觀察數(shù)日，看有無(wú)中毒 。,細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)程序,6.血清凝集試驗(yàn) 將中毒患者急性期和恢復(fù)期的血清，與自中毒檢樣中分離的致病菌所制成的菌體抗原(將分離菌接種培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，待其生長(zhǎng)旺盛后，刮取菌苔至滅菌鹽水中，混散均勻，用生理鹽水稀釋成6億，毫升即成)做試管凝集試驗(yàn)，觀察凝集價(jià)有無(wú)上升趨勢(shì)，如恢復(fù)期的血清效價(jià)比發(fā)病初

69、期有明顯增高（增高4倍或以上）即有診斷價(jià)值。,經(jīng)驗(yàn),1.對(duì)所有樣品進(jìn)行致病菌分離和鑒定時(shí)應(yīng)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法和已公認(rèn)的微生物檢驗(yàn)程序，應(yīng)用直接分離及增菌雙重培養(yǎng)，直接分離可檢出樣品中的優(yōu)勢(shì)菌(包括一些條件致病菌)．增菌可將樣品中污染的但又菌量較少的病原菌撿出，同時(shí)對(duì)服藥患者肛試樣品中被抗菌素抑制的細(xì)菌達(dá)到復(fù)蘇和增加菌量帕作用 2.由于多種病原菌引起的食物中毒，有相類(lèi)似的臨床癥狀，因此對(duì)致病菌的檢測(cè)范圍應(yīng)擴(kuò)大，在分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)多準(zhǔn)備一