產(chǎn)前實驗室技術概要

1、產(chǎn)前實驗室技術,張紅國,吉林大學第一醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心電話：15804300880E-mail: zhanghguo@126.com,,,一、產(chǎn)前實驗室相關技術,,,二、唐氏篩查申請單填寫注意事項,,,三、我們實驗室開展的項目,,產(chǎn)前實驗室相關技術,衛(wèi)生部《產(chǎn)前診斷技術管理辦法》要求：,產(chǎn)前診斷實驗室能夠開展： ①生化免疫；②細胞遺傳；③分子遺傳,具體包括： 唐氏篩查

2、 染色體核型分析 羊水細胞培養(yǎng)染色體分析 臍帶血染色體核型分析 絨毛染色體核型分析 分子遺傳學基因診斷 熒光原位雜交 無創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測,1、唐氏篩查,可篩查：①唐氏綜合征（21-三體綜合征）②18-三體綜合征③開放性神經(jīng)管缺陷,（1）實驗室檢測的母體血清標記物方案， 選擇下列任

3、一種： a) 二聯(lián)法：血清甲胎蛋白（AFP）+血清人絨毛膜促性腺激素游離β亞基（Free β-HCG ）或者AFP+血清人絨毛膜促性腺激素（HCG） b)三聯(lián)法：AFP+ Free β-HCG+血清游離雌三醇（uE3）或者 AFP+HCG+uE3 或者AFP+ Free β-HCG+抑制素A（InH-A） c)四聯(lián)法： AFP+ Free β-HCG+uE3+ InH-A或者A

4、FP+ HCG+uE3+ InH-A,中孕期母血清學產(chǎn)前篩查標準,（2）結果的判別 篩查結果分為高風險和低風險： a)唐氏綜合征篩查結果可采用1/270為陽性切割值（臨界值），即篩查結果風險率≧1/270者為高風險妊娠； b)18-三體綜合征篩查結果可采用1/350為陽性切割值，篩查結果風險率≧1/350者為高風險妊娠； c)開放性神經(jīng)管缺陷宜以母血清AFP ≧2.0-2.5MOM，為

5、陽性切割值，篩查結果AFP ≧2.0-2.5MOM者為高風險妊娠。,（3）產(chǎn)前篩查的檢出率要求 二聯(lián)法： T21 ≧60% 假陽性率＜8% T18 ≧80% 假陽性率＜5% ONTD ≧85% 假陽性率＜5% 三聯(lián)法： T21 ≧70% 假陽性率＜5%

6、 T18 ≧85% 假陽性率＜5% ONTD ≧85% 假陽性率＜5% 四聯(lián)法： T21 ≧80% 假陽性率＜5% T18 ≧85% 假陽性率＜1% ONTD ≧85% 假陽性率＜5%,時間分辨熒光免疫法,時間分辨熒光免疫測定：是一種非同位素免疫分析技術。用鑭

7、系元素標記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點，用時間分辨技術測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數(shù)進行信號分辨。特異性好。發(fā)光時間長。由于蛋白質(zhì)等本底物質(zhì)所發(fā)出的熒光發(fā)光時間較短，因此可以通過延長時間去除本底干擾，提高準確性。穩(wěn)定。,抽母體外周血，檢測AFP、 β-hCG、uE3，結合孕婦年齡、 孕周、等信息，評估孕唐氏兒 的風險值。 時間分辨熒光免疫分析儀、 三聯(lián)篩查假陽性率小于5%時，

8、 檢出率70%,（4）我院的檢測方法,篩查出的高風險孕婦需要進一步診斷。21-三體高風險18-三體高風險 羊水穿刺 染色體核型分析NTD高風險 超聲診斷,2、細胞遺傳學檢查,染色體檢查、染色體核型分析,取樣方法,絨毛穿刺取樣羊膜腔穿刺取樣臍帶血穿刺取樣外周血取樣,,產(chǎn)前診斷,有自然流產(chǎn)史、死胎、葡萄胎、女性原發(fā)不孕、繼發(fā)不孕的夫婦；生過遺傳病患兒及先天畸形患兒的父

9、母；男性少精、弱精、畸精、死精癥及婚后不明原因不育的夫婦；兩性畸形及性器官發(fā)育異常的患者；原發(fā)閉經(jīng)、繼發(fā)閉經(jīng)的婦女；染色體異常的患者及患者的父母和同胞；,染色體檢查適應證：,原因不明的智力低下及生長發(fā)育遲緩的患者；本人及家系成員患有某種遺傳疾病或先天畸形的患者；未婚青年的相戀對方或其家屬患有某種遺傳病或先天畸形的患者；長期接觸不良環(huán)境因素的婚齡、育齡的男女青年；常規(guī)檢查或常見遺傳病篩查發(fā)現(xiàn)異常者；青年男女的婚（孕）前檢

10、查與咨詢。,A：正常二倍體細胞核內(nèi) 有2 個21號染色體信號 B：21-三體患者細胞核內(nèi)有3個 21號染色體信號,3、熒光原位雜交 以21號染色體的相應片段序列作探針，進行原位雜交，可快速、準確進行診斷。 21-三體綜合征患兒的細胞中呈現(xiàn)3個21號染色體的熒光信號。,FISH具有其不可比擬的優(yōu)點：1.操作簡便，探針標記后穩(wěn)定，一次標記后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到結

11、果。3.在同一標本上，可同時雜交幾種不同探針。4.不僅可用于分裂細胞染色體數(shù)量或結構變化的研究，而且還可用于靜止期細胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。,目前羊水FISH產(chǎn)前診斷： 可快速診斷胎兒13、18、21、X、Y染色體數(shù)目的異常。,4、無創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測,母體外周血含有的cffDNA，幾乎全部來源于胎盤滋養(yǎng)層細胞懷孕4周可檢出，8周后含量上升并穩(wěn)定存在母體外周血中的cffDNA含量在5%-50%之間。孕

12、周越大外周血中胚胎DNA的含量越高,無創(chuàng)：10ml外周血，無須空腹風險?。簾o流產(chǎn)、感染風險孕12周以上即可檢測DNA水平檢測，準確率99%以上檢測周期短，10個工作日出檢測結果,無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測技術與傳統(tǒng)診斷技術相比具有如下優(yōu)勢：,嵌合體和多胎目前不能檢 影響因素：,孕婦染色體異常孕婦近期接受過異體輸血、移植手術、干細胞治療胎兒其他染色體異常樣本自然溶血或因個體差異造成的cffDNA含量過低孕周計算不準確抽血時孕

13、婦體重超過100kg,局限性和風險：,,,一、產(chǎn)前實驗室相關技術,,,二、唐氏篩查申請單填寫注意事項,,,三、我們實驗室開展的項目,,唐氏篩查申請單填寫項目,中孕期唐氏綜合征血清學篩查檢測的孕周范圍為15-20周6天，早孕期唐氏篩查檢測的孕周范圍為9-13周6天。請開單醫(yī)生嚴格把關。孕婦的電話號碼一定要如實填寫，以便核實信息、高風險通知和日后隨訪。采血日期應填寫采血當日日期（公歷）。出生日期應為孕婦的實際出生日期（公歷）。如農(nóng)歷生

14、日應換算成公歷后再填寫或在申請單上清晰標注。,體重單位為公斤，填寫時需注意。唐氏篩查風險評估軟件中體重的檢測范圍為40-120公斤，如不在此范圍內(nèi)，將按最接近的臨界值計算（如孕婦體重為38公斤，軟件將按40公斤計算），因此在采樣時須告知孕婦，得到知情同意后方可送檢，并在申請單上標注。體重可以對孕婦血清中AFP， free-βhCG，uE3三個指標進行校正，以避免因體重的增加，使其在血液中濃度降低。唐氏篩查的風險評估軟件默認規(guī)則的月經(jīng)

15、周期為28-30天，超出此范圍均為不規(guī)則，不能應用末次月經(jīng)來推算孕周，因此必須提供一份超聲信息。單雙胎必須填寫。因為如為雙胎，血清學指標會較單胎時偏，因此高風險評估軟件會對結果進行校正。（從2013年4月7日開始，我中心不再對雙胎做中期篩查）,懷孕方式應注明自然懷孕或輔助生殖，如為IVF，應填寫取卵日期和植入日期，并提供超聲信息。軟件同樣會進行校正。每一位受檢孕婦均應提供一份超聲信息，超聲信息以孕早期超聲頭臀長（CRL）為最佳，如沒

16、有孕早期超聲，至少應提供一份包括胎兒雙頂徑數(shù)值（BPD）或超聲當日提示孕周，二者至少應有一項的超聲結果，并注明超聲日期。懷孕過程中是否有陰道流血的現(xiàn)象應如實填寫，請開單醫(yī)生在問診時注意。異常妊娠史主要包括不明原因流產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象。如孕婦曾生育過21-三體綜合征、18-三體綜合征，應直接建議孕婦做產(chǎn)前診斷，不建議做唐氏篩查。如孕婦特別要求，應交代清楚后再送檢，并在申請單上標注清楚。,胰島素依賴型糖尿病及吸煙史應如實填寫，且為必填項目。

17、因為有胰島素依賴型糖尿病病史的孕婦血清中hAFP 低10%；uE3 低7%；free hCGb 低11%。而吸煙的孕婦血清中free-βhCG較正常孕婦降低3%，AFP較正常升高3%?！爸性衅谀秆鍖W產(chǎn)前篩查知情同意書”應按照知情選擇、孕婦自愿的原則，醫(yī)務人員應事先告知孕婦或其家屬產(chǎn)前篩查的性質(zhì)，孕婦及醫(yī)生同時簽字，不可由他人代簽。年齡在35歲及35歲以上的孕婦，建議直接做遺傳咨詢。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

18、,,,,一、產(chǎn)前實驗室相關技術,,,二、唐氏篩查申請單填寫注意事項,,,三、我們實驗室開展的項目,,早孕期唐氏篩查中孕期唐氏篩查羊水細胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷臍帶血細胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷外周血染色體核型分析羊水熒光原位雜交（FISH）產(chǎn)前診斷流產(chǎn)絨毛組織熒光原位雜交（FISH）先天性心臟病FISH產(chǎn)前診斷,開展項目,早孕期篩查：（1）血清學篩查，是在孕9-13周6天進行，抽血檢測孕婦血清中生化指標（PAPP-A和Free-

19、β hCG），結合孕婦的年齡、體重、孕周等進行綜合風險評估，得出胎兒患21-三體、18-三體綜合征的風險。（2）一站式篩查，是在孕11周-13周6天做超聲NT掃描，確定孕周在11周-13周6天內(nèi)，然后抽血進行早孕期血清學指標檢測，將NT指標與血清學指標、孕婦年齡、體重、采血日期等進行結合，評估胎兒罹患21-三體、18-三體的風險。,早孕期篩查的優(yōu)勢：（1）早孕期篩查把產(chǎn)前篩查的孕周窗提前，使孕婦更早掌握胎兒罹患21-三體、18-

20、三體的風險，盡早進行相關產(chǎn)前診斷。（2）早孕期篩查還可以與中孕期篩查進行整合，提高21-三體、18-三體的檢出率。,流產(chǎn)絨毛組織FISH快速檢測,發(fā)生率：50%以上的早期流產(chǎn)是由胚胎染色體異常引起，且大多數(shù)為染色體數(shù)目異常。原理：FISH快速檢測使用13、16、18、21、22、X、Y探針，檢測7個染色體的非整倍體。檢測：取流產(chǎn)絨毛組織少許，浸泡生理鹽水中送到產(chǎn)前診斷中心4樓前臺，進行熒光原位雜交檢測。,先天性心臟病FISH

21、產(chǎn)前診斷,發(fā)生率：活產(chǎn)嬰兒中占8‰，每年新增15-20萬例。原因：遺傳因素——心臟調(diào)節(jié)基因的遺傳突變。 環(huán)境因素——藥物、感染、母親患病等。檢測： 妊娠11-14周進行B超檢查，測量胎兒頸背透明帶厚度。 中期18-22周用胎兒超聲心動圖檢測。 22q11熒光原位雜交檢測。,,,22q11熒光原位雜交檢測,合作開展項目,1、無創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測項目2、Array-CGH技術項目3、單

22、基因遺傳病檢測項目,1.無創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測,可篩查13、18、21染色體三倍體 （發(fā)報告） 還可觀測到其他染色體的非整倍體異常（口頭通知） 檢出率可達99%有專家建議： 可以代替產(chǎn)前篩查的精密篩查項目提示：可供孕婦及其家屬選擇，但費用高。,,,2. Array-CGH技術,Array-CGH技術 應用于羊水細胞檢測，是一種產(chǎn)前診斷技術。,Array-CGH技術原理與流程,3.

23、 單基因遺傳病檢測,關鍵：找到先證者；查夫妻雙方為攜帶者，可以指導下一胎生育。,,,目前開展700多種遺傳疾病的診斷。成功案例：一夫妻多次懷孕均為腦膨出，多次就醫(yī)，省內(nèi)多家 醫(yī)院均未查到原因。最近一次懷孕又是腦膨出，到 我中心就診。 我們的醫(yī)生懷疑為： Meckel綜合征 通過單基因檢測，胎兒診斷為：Meckel綜合征4型。