CUMULATIVE EFFECT OF ELECTRO-ACUPUNCTURE ON VISCERAL PAIN AND SPINAL p38MAPK AND C-FOS EXPRESSION IN GOATS WITH VISCERAL HYPERS.pdf

1、內(nèi)臟超敏(VH)是人和動(dòng)物胃腸道疾病的一個(gè)重要特征。它通常是指內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏（對(duì)傷害性刺激的反應(yīng)增強(qiáng)），或/和觸敏痛（對(duì)非傷害性刺激產(chǎn)生疼痛反應(yīng)），并伴有腸道運(yùn)動(dòng)改變以及腸黏液分泌物增加。內(nèi)臟疼痛常伴隨內(nèi)臟超敏發(fā)生。VH或者內(nèi)臟疼痛對(duì)日常生活有相當(dāng)大的負(fù)面影響，會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并且對(duì)全球醫(yī)療體系帶來(lái)巨大的壓力。相對(duì)于其它腸段，小腸長(zhǎng)度更長(zhǎng)并且蠕動(dòng)性更強(qiáng)，所以更容易發(fā)生炎性疾病，引起內(nèi)臟疼痛和痛覺(jué)過(guò)敏。在腸道，小腸是臨床疾病最易發(fā)生的

2、部位。VH因病理發(fā)生尚不完全清楚，其治療仍是個(gè)難題。多數(shù)研究采用結(jié)腸炎模型研究VH。然而，這個(gè)模型不適合研究小腸炎癥（例如回腸炎）誘發(fā)VH的確切機(jī)制，因?yàn)樗奈恢?，持續(xù)時(shí)間和中樞調(diào)節(jié)機(jī)制都不相同。因此，需要采用動(dòng)物小腸炎性模型來(lái)研究小腸炎癥誘發(fā)VH和疼痛的機(jī)制，并評(píng)估其治療效果。
　　越來(lái)越多的證據(jù)表明p38MAPK信號(hào)通路在介導(dǎo)炎癥、疼痛的形成和維持方面有重要作用。然而，尚不清楚脊髓p38MAPK信號(hào)通路的激活是否可以促進(jìn)VH的

3、形成。目前臨床上治療疼痛管理主要包括幾類藥物的組合應(yīng)用，例如阿片類藥物、抗抑郁藥、抗痙攣/抗驚厥藥、或非甾體類抗炎藥。長(zhǎng)期服用這些藥物有明顯的副作用，包括鎮(zhèn)痛不全、上癮、耐受、疲勞以及腸胃功能和心血管毒性。探索一種安全、有效的抗炎和鎮(zhèn)痛的治療方案和低風(fēng)險(xiǎn)的補(bǔ)充療法非常必要。針灸，古代的中國(guó)藝術(shù)，在各種疼痛疾病治療方面應(yīng)用了3000多年?，F(xiàn)在，電針(EA)是將電流通過(guò)針刺針應(yīng)用到穴位，使針灸具有高療效、低風(fēng)險(xiǎn)的特征，因此而風(fēng)靡全球。c-F

4、os被認(rèn)為是神經(jīng)元激活的標(biāo)志，因此被用于標(biāo)記中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周感受相關(guān)的神經(jīng)元激活。一些研究表明，電針對(duì)內(nèi)臟痛和VH有效。其他一些研究表明可以通過(guò)下調(diào)p38MAPK抑制炎癥和神經(jīng)性疼痛。然而，EA是否可以通過(guò)調(diào)節(jié)p38MAPK來(lái)改變內(nèi)臟痛或VH尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用TNBS誘導(dǎo)回腸炎，并采用行為變化評(píng)分評(píng)估山羊內(nèi)臟疼痛強(qiáng)度。在此基礎(chǔ)上，對(duì)回腸炎山羊進(jìn)行連續(xù)電針，研究EA的累積鎮(zhèn)痛效果，以及EA對(duì)脊髓p38MAPK和c-Fos蛋白表達(dá)的影響

5、。
　　1.通過(guò)牽引回腸炎山羊的回盲腸韌帶觸發(fā)內(nèi)臟痛
　　目的:通過(guò)牽引TNBS誘導(dǎo)的回腸炎山羊的回盲腸韌帶來(lái)量化內(nèi)臟痛的強(qiáng)度。
　　方法:36頭雄性山羊，體重為20.05±2.1kg，隨機(jī)平均分成TNBS組(18頭)和生理鹽水對(duì)照組（18頭）。將30mg的2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）溶解于30％的乙醇，通過(guò)開(kāi)腹手術(shù)注射到回腸壁建立回腸炎模型。于對(duì)照組山羊，將等量的生理鹽水替代TNBS溶液，注射到回腸壁上。于3

6、、7和14天觀察牽拉回盲腸韌帶（2、4和6牛頓）引起的行為反應(yīng)。于第3、7和14天行為測(cè)試后，隨即每組取6頭山羊，進(jìn)行開(kāi)腹手術(shù)，切除部分回腸。評(píng)估回腸病理組織變化，并用ELISA檢測(cè)過(guò)氧化物酶、IL-1β、IL-6和TNF-α的濃度。
　　結(jié)果:與生理鹽水對(duì)照組相比，TNBS組山羊，在第3天和第7天眼觀病理變化積分、肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)、髓過(guò)氧化物酶和腫瘤壞死因子濃度均顯著增加，第3天到第14天顯微病理學(xué)變化積分、白介素-1β以及白介素6

7、濃度均增加。TNBS組山羊行為變化隨著牽引力增加而明顯，并與顯微病理學(xué)變化及細(xì)胞因子水平變化一致。因此，牽引力與疼痛行為反應(yīng)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:在回腸炎山羊回盲腸韌帶施加牽引力，引起了顯著、穩(wěn)定和可重現(xiàn)的回腸源性疼痛。該模型有助于評(píng)估新藥控制內(nèi)臟痛的效果，并研究其機(jī)理。
　　2.電針累計(jì)效應(yīng)對(duì)p38MAPK和c-Fos在內(nèi)臟超敏山羊脊髓背角表達(dá)的影響
　　目的:研究多次電針對(duì)山羊回腸炎誘導(dǎo)的內(nèi)臟超敏及脊髓p38MAP

8、K和c-Fos激活的影響。
　　方法:30只試驗(yàn)山羊被隨機(jī)分成:生理鹽水組(n=9)、假針組(n=6)、2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)組(n=9)和TNBS+EA組(n=6)。經(jīng)開(kāi)腹暴露山羊回腸，于假針組、TNBS組及TNBS+EA組山羊回腸壁注射TNBS溶液(30mgTNBS溶解于1.2mL40％乙醇中)誘導(dǎo)內(nèi)臟痛。生理鹽水組山羊以同樣的方式注射等體積生理鹽水以替代TNBS溶液。于第7天，取Saline組和TNBS組山羊3

9、只，經(jīng)剖腹暴露回腸，切除部分腸道以評(píng)估炎癥。于7、10、13、16、19和22天應(yīng)用電針雙側(cè)“足三里”穴(ST36)30min（連續(xù)波60Hz，強(qiáng)度3mA）。以內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)刺激（強(qiáng)度20、40、60、80和100mmHg），采用肌電圖(EMG)記錄內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)反應(yīng)（VMR），評(píng)估內(nèi)臟超敏。于第22天，試驗(yàn)山羊施實(shí)安樂(lè)死，采用western blotting檢測(cè)第11胸椎脊髓段(T11) p38和c-Fos蛋白表達(dá)，RT-q

10、PCR檢測(cè)p38和c-Fos的mRNA水平。同時(shí)，每頭山羊取距近回盲交接處15cm的6cm回盲腸段，用于組織病理學(xué)檢測(cè)。一
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與對(duì)照組相比TNBS組的VMR顯著升高(P＜0.01)，并且脊髓p38MAPK和c-Fos蛋白和基因表達(dá)也顯著性升高(P＜0.01)。相比之下，TNBS+EA組的山羊在20、40、60、80和100mmHg的CRD刺激下VMR顯著降低。雙側(cè)足三里穴位重復(fù)EA可以降低山羊回腸壁注射TNBS