伊馬替尼通過抑制p38MAPK信號通路治療急性脊髓損傷.pdf

1、目的:探討伊馬替尼對于急性脊髓損傷(Acute Spinal Cord Injury，ASCI)的治療作用及其機制。
　　方法:實驗一:選取健康的成年雌性Sprague Dawley大鼠（SD大鼠）62只，體重200-250g，隨機分為A、B、C3組，其中伊馬替尼給藥組（A組）22只，脊髓損傷組（B組）22只，假手術(shù)組（C組）18只。根據(jù)每組大鼠根據(jù)損傷后時間點的不同，又分為12h、24h、3d、28d四個亞組。使用脊髓打擊法制造

2、大鼠T8、9急性壓迫脊髓損傷模型，造模成功后，A組在脊髓損傷后1h、24h、2d、3d于腹腔注射50mg/kg伊馬替尼-PBS溶液，B組在脊髓損傷后相同時間點腹腔注射等量PBS(phosphate buffer solution，磷酸鹽緩沖液)，C組僅行椎板切除術(shù)，于相同時間點腹腔注射等量PBS。依次于損傷后12h、24h、3d分批處死各亞組大鼠，應(yīng)用HE染色法（hematoxylin-eosin staining，蘇木精-伊紅染色法）

3、觀察損傷脊髓形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用Western blot檢測PDGFR-α(platelet derived growth factoralpha，血小板衍生生長因子受體-α)、p38MAPK(p38 mitogen-activatedprotein，p38絲裂原活化蛋白激酶)、p-p38MAPK(p-p38，phospho-p38MAPK，磷酸化p38MAPK)、ATF-2(activating transcription factor-

4、2，轉(zhuǎn)錄激活因子-2)、p-ATF2（phospho-ATF2，磷酸化ATF-2）和緊密連接蛋白claudin-5表達(dá)變化，應(yīng)用明膠酶譜法測定基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9 MMP-9）的活性變化，應(yīng)用EB(Evans-blue，伊文思藍(lán))染色法檢測血脊髓屏障的完整性。采用BBB評分(Basso DM，Beattie MS，Bresnahan scale)評價損傷后運動神經(jīng)功能恢復(fù)情況。實驗二:

5、選取成年雌性SD大鼠8只，體重200-250g，隨機分為2組，分別為PDGFR激動劑PDGF-AA給藥組（D組）及PDGF-AA與p38MAPK抑制劑SB203580共同給藥組（E組），每組又分為損傷后24h和3d兩個亞組，每個亞組2只大鼠。行椎板切除術(shù)后，立即對兩者進行蛛網(wǎng)膜下腔注射，給予上述藥物。將兩組大鼠分別于相應(yīng)時間點處死，應(yīng)用伊文思藍(lán)染色法檢測血脊髓屏障完整性。
　　結(jié)果:實驗一:A、B兩組PDGFR-α的表達(dá)水平在脊髓

6、損傷后12h開始升高，24h達(dá)高峰，3d時下降，但仍高于C組，A組表達(dá)水平明顯低于B組;MMP-9的活性在脊髓損傷后24小時達(dá)高峰，傷后3d下降，仍高于假手術(shù)組水平，A組MMP-9活性雖升高，但較B組低，而C組幾乎無活化的MMP-9表達(dá);claudin-5在傷后24h及3d的表達(dá)，A組明顯高于B組，C組表達(dá)水平最高;p38MAPK和p-p38在損傷后24h和3d的表達(dá)水平，與C組相比，A、B兩組均升高，但A組低于B組。ATF-2在損傷后

7、24h及3d的表達(dá)水平，與C組相比，A、B兩組均升高，但A組低于B組，p-ATF2在相同時間點的表達(dá)水平與ATF-2具有相同趨勢。損傷后1d及3d伊文思藍(lán)滲出面積，A組明顯小于B組，而C組脊髓內(nèi)幾乎未見伊文思藍(lán)熒光信號，僅在硬膜表面有高熒光強度信號。A組的大鼠在損傷后3d、7d、14d、21d、28d的BBB評分均高于B組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗二:傷后24h和3d，D組和E組損傷脊髓中伊文思藍(lán)熒光強度均較C組明顯升高，但D組升高程度

8、較E組高。
　　結(jié)論:伊馬替尼能夠促進急性脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)。PDGFR-α在脊髓損傷早期高表達(dá)，它的激活能夠?qū)е卵?脊髓屏障的破壞，造成繼發(fā)性脊髓損傷，這一作用與p38MAPK通路激活相關(guān)。伊馬替尼通過與PDGFR-α結(jié)合，能夠抑制p38MAPK信號通路的激活，使該信號通路下游ATF-2的表達(dá)和磷酸化水平下降，MMP-9活性降低，減少MMP-9對緊密連接蛋白的降解，保護血脊髓屏障，是該藥治療急性脊髓損傷的機制。PDGFR-α