豬繁殖與呼吸綜合征DNA疫苗的免疫效力和安全性評(píng)價(jià).pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀為特征的傳染病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)侵害免疫系統(tǒng)并且易發(fā)生變異，常規(guī)的疫苗難以產(chǎn)生理想的效果，所以，研制安全有效的基因工程疫苗具有重要的意義。 本研究將表達(dá)PRRSVGP5蛋白的DNA重組質(zhì)粒pCI-GP5分別與表達(dá)豬IL-2和IL-4的重組質(zhì)粒(pc

2、DNA-IL-2和pcDNA-IL-4)聯(lián)合免疫25頭健康仔豬，經(jīng)三次免疫后宰殺部分豬只，通過質(zhì)粒殘留試驗(yàn)、染色體整合試驗(yàn)、抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體檢測(cè)和質(zhì)粒在環(huán)境中釋放的可能性試驗(yàn)，綜合評(píng)價(jià)DNA疫苗的安全性；同時(shí)人工感染PRRSVHB-2株，檢測(cè)仔豬的體液免疫以及攻毒保護(hù)性反應(yīng)，評(píng)價(jià)pCI-GP5的免疫效力及pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4的免疫佐劑效應(yīng)。 安全性檢測(cè)結(jié)果表明，DNA疫苗免疫仔豬后不會(huì)引起病理

3、性損傷；通過PCR方法檢測(cè)重組質(zhì)粒在豬體內(nèi)的殘留及分布，結(jié)果三免后15天在腦、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟和注射部位肌肉等組織器官中能檢測(cè)到目的片段，第42天陽性組織檢出率明顯減少；重組質(zhì)粒不與宿主細(xì)胞染色體整合；免疫后也不產(chǎn)生抗dsDNA抗體；并且未在環(huán)境中發(fā)生擴(kuò)散。 免疫效力檢測(cè)證實(shí)，pCI-GP5可誘導(dǎo)免疫豬產(chǎn)生抗GP5抗體，ELISA抗體效價(jià)最高可達(dá)1∶285，中和抗體效價(jià)達(dá)1∶19。三免后攻毒，組織中PRRSV核酸的檢

4、出率下降30.3％，與對(duì)照組相比差異顯著(p＜0.05)。pcDNA-IL-2與pCI-GP5聯(lián)合免疫后，可將中和抗體效價(jià)提高到1∶24.5；病毒血癥的出現(xiàn)頻率減少38.9％，PRRSV陽性組織檢出率下降28.8％，與對(duì)照組相比差異顯著(p＜0.05)；pcDNA-IL-4與pCI-GP5聯(lián)合免疫后，ELISA抗體效價(jià)最高可達(dá)1∶320，中和抗體效價(jià)可達(dá)1∶24.1。病毒血癥的出現(xiàn)頻率下降38.9％，PRRSV陽性組織檢出率減少34.8