家蠶表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征疫苗蛋白E和M的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的新傳染病。臨床上以妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為特征。PRRSV屬動(dòng)脈炎病毒科,系單股正鏈RNA病毒,基因組大小為15kb,包括8個(gè)開放閱讀框,可編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白和2種非結(jié)構(gòu)蛋白,其中ORF5編碼病毒的糖

2、基化包膜蛋白(GP5蛋白,又稱E蛋白),是主要的結(jié)構(gòu)蛋白,也是一種多功能蛋白,參與細(xì)胞免疫與體液免疫;ORF6編碼基質(zhì)蛋白(又稱M蛋白),為非糖基化蛋白。由0RF6、ORF5分別編碼的M、E蛋白是PRRSV是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白,它們?cè)诓《镜闹虏⌒?、病毒?fù)制、病毒裝配、病毒變異和保護(hù)性反應(yīng)等方面可能具有重要意義,是發(fā)展新型疫苗的良好目標(biāo)基因。桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(baculovirus expression vector system,

3、BEVS)被廣泛應(yīng)用于重組蛋白的表達(dá),并且已經(jīng)成功表達(dá)了大量的蛋白質(zhì)。該系統(tǒng)表達(dá)有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),比如,在大腸桿菌中不能表達(dá)的真核生物蛋白,都能在BEVS中表達(dá)。而且該系統(tǒng)還可以在昆蟲細(xì)胞中對(duì)重組蛋白進(jìn)行翻譯后的加工修飾,使表達(dá)的真核蛋白具有與天然產(chǎn)物幾乎相同的生物活性。最近,研究人員開發(fā)出了一種針對(duì)BmNPV的bacmid(桿狀病毒穿梭載體)的表達(dá)系統(tǒng)。BmNPV bacmid可以像質(zhì)粒一樣在大腸桿菌E.coli中復(fù)制,并保持其對(duì)昆蟲細(xì)

4、胞的感染能力。由于這種技術(shù)大大縮短了病毒純化和擴(kuò)增的周期,從而明顯減少了篩選病毒在技術(shù)上的困難和時(shí)間上的要求。重組蛋白在家蠶體內(nèi)的表達(dá)水平比在其細(xì)胞系中要高出10-100倍,足以說明利用家蠶規(guī)?；a(chǎn)重組蛋白非常理想,是理想的真核蛋白生物反應(yīng)器。本研究通過對(duì)目前廣泛應(yīng)用的桿狀病毒Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行改造,建立了能簡(jiǎn)便、快速獲得重組桿狀病毒的表達(dá)系統(tǒng),并通過這一改造的系統(tǒng)使PRRSV ORF5、ORF6基因在家蠶細(xì)胞中獲得高效