抗結(jié)核新藥研究進(jìn)展

1、抗結(jié)核新藥研究進(jìn)展,北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院陸 宇2015年11月,,,,,,新藥與新藥研發(fā)過(guò)程,,,3,,,,2,,,,抗結(jié)核新藥研發(fā)目標(biāo),,新藥研究的挑戰(zhàn),內(nèi) 容,新藥與新方案研究,4,,1,Process of Drug Development,新藥研發(fā)策略,作用于全細(xì)胞的新藥篩選根據(jù)其能同時(shí)作用于多個(gè)靶位的特點(diǎn)，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)具有新作用機(jī)制的化合物可發(fā)現(xiàn)只有經(jīng)過(guò)細(xì)菌修飾后才能產(chǎn)生抗菌活性的

2、前藥（INH和PZA)用該篩選途徑找到的化合物已經(jīng)具備在有效濃度下滲透入細(xì)胞內(nèi)并到達(dá)其作用靶位的能力候選藥物因在病原菌中的作用靶位與人體細(xì)胞的類似而宣告放棄,以作用靶位為基礎(chǔ)的新藥篩選注重于病原菌獨(dú)有的靶位和生化過(guò)程簡(jiǎn)便, 但獲得候選藥物的機(jī)會(huì)較全細(xì)胞篩選法小，發(fā)現(xiàn)的候選化合物也可能因其不能穿過(guò)細(xì)胞膜或不能繞過(guò)微生物防衛(wèi)系統(tǒng)而在全細(xì)胞分析中顯示無(wú)效,2024/3/20,抗結(jié)核新藥研發(fā)及其進(jìn)展,5,臨床前評(píng)價(jià),New Com

3、pounds,Mtb MIC,Solubility,Cytotoxicity,P450 Inhibition,Microsome Stability,PK in Mice/Rats,Mouse TB Model,hERG/QT,Mutagenicity,IND-Enabling,Mtb LORA,UV Spectrum,Mtb MIC,Mouse TB Model,,,,,,,,,,100%,~ 50%,~ 20%,10-20 comp

4、ounds,,1-2 compounds,Testing new drugs / combinations,Phase I (healthy volunteers)Dose finding / tolerabilityPK / Drug interactions,Phase II (TB patients)EBA (2 wks.) and SSCC (8 wks.)Quantitative Cultures / time to

5、conversion + PK/PD,Phase III (TB patients) Large scale clinical trials Treatment failure / relapseTolerability / safety,,,周期長(zhǎng),高投入、高風(fēng)險(xiǎn),涉及面廣，操作復(fù)雜,新藥研發(fā)的特點(diǎn),,Current Therapy and Unmet Needs in TB,2024/3/20,Need for new ant

6、ituberculosis drugs and regimens,,latent tuberculosisinfection from both drug-sensitive and drug-resistantstrains of M.TB,Improve treatment of latent tuberculosis infection ---the way forward for elimination of tuber

7、culosis.,縮短和簡(jiǎn)化療程克服抗多藥性 （MDR-TB 與 XDR-TB）治療 TB 與 HIV 共同感染對(duì)結(jié)核潛伏感染提供更有效的治療口服，每天一次，最好每周一次的治療方法,抗結(jié)核新藥的發(fā)展目標(biāo),縮短和簡(jiǎn)化療程,重點(diǎn)發(fā)展由具有獨(dú)特作用機(jī)理的藥物所組成的新藥組合，這些新藥組合應(yīng)該對(duì)MDR-TB同樣有效如果具有獨(dú)特作用機(jī)理的藥物不能縮短療程，可以專門發(fā)展成治療MDR-TB的二線藥物,提高多耐藥結(jié)核病的療效,所有研究項(xiàng)目都

8、進(jìn)行與P450酶相互作用的測(cè)試，對(duì)沒有P450酶相互作用的化合物會(huì)優(yōu)先考慮縮短和簡(jiǎn)化療程本身也會(huì)降低藥物相互作用的程度，對(duì)治療HIV陽(yáng)性的病人會(huì)有所幫助,治療 TB 與 HIV 共同感染,（有效的新藥影響巨大但成功的可能性小：需要對(duì)導(dǎo)致LTBI的生物過(guò)程有更深地了解；對(duì)藥物的安全性要求高；臨床試驗(yàn)昂貴并困難）如果發(fā)現(xiàn)某些新藥可以大大縮短療程并且非常安全，可以考慮進(jìn)行LTBI 的臨床試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)一步推動(dòng)生物學(xué)方面的研究以便對(duì)導(dǎo)致LTB

9、I的生物機(jī)理有更好地了解，從而設(shè)計(jì)更有效的藥物,對(duì)（LTBI）提供更有效的治療,,Need for new antituberculosis drugs and regimens,,,,,貝達(dá)喹啉 (Bedaquiline，TMC207),作用機(jī)制：抑制細(xì)菌的ATP合成酶，其作用的靶位為ATP合成酶的低聚體亞單位C（AtpE）。 Nat

10、 Chem Biol,2007,3(6):323-324. ? 研究表明，僅對(duì)分枝桿菌ATP合成酶有選擇性抑制作用，而對(duì)真核生物（如人類）的線粒體ATP合成酶無(wú)抑制作用。,分子量：74.92二芳基喹啉類美國(guó)強(qiáng)生公司研發(fā),In 2013 ………,Bedaquiline …….,貝達(dá)喹啉,TMC207 對(duì)結(jié)核分枝桿菌具有很好的選擇性和抑制活性(MIC 為0.03～0.12mg/L)對(duì)敏感菌株和耐藥菌株（包括耐SHREZ和FQ

11、）具有同等的抗菌活性，與傳統(tǒng)的抗結(jié)核藥物之間無(wú)交叉耐藥性。對(duì)非活躍增殖期的結(jié)核桿菌敏感，清除體內(nèi)潛伏菌的作用可能很強(qiáng) 對(duì)大多數(shù)NTM均具有良好的抗菌作用。休眠菌具有良好的滅菌效果。? 耐藥突變率低。耐藥的產(chǎn)生主要是63或66位點(diǎn)氨基酸基因突變，atpE,,貝達(dá)喹啉,服藥5h后達(dá)到血漿峰濃度(Cmax) 在人體內(nèi)具有很長(zhǎng)的終末半衰期—173h（可用于間歇給藥） 經(jīng)P450-CYP3A4氧化代謝,與利福平聯(lián)合使用會(huì)

12、使酶的作用降低50％。飲食可以將TMC207的吸收提高兩倍。,,貝達(dá)喹啉,This is a landmark study on TMC207,加Bedaquiline的患者2月痰菌陰轉(zhuǎn)率47.6%，第24周痰菌陰轉(zhuǎn)率81%，較加用安慰劑組高（第8周8.7%，第24周65.2%,,貝達(dá)喹啉,,WHO指南（2013年）適應(yīng)癥：<65歲的成年MDR-TB、無(wú)法組成有效方案（Z+4二線藥物）、對(duì)任一喹諾酮類耐藥。療程：6個(gè)月HIV

13、者慎用、孕婦及兒童不建議使用,Bedaquiline成為近40年來(lái)首個(gè)具有全新作用機(jī)制的抗結(jié)核藥物，同時(shí)也是有史以來(lái)首個(gè)明確用于MDR-TB治療的藥物。,2014年3月Situro（bedaquiline）獲歐盟委員會(huì)（EC）有條件批準(zhǔn)（conditional approval），作為組合療法的一部分，用于因耐藥性或耐受性使得一種有效治療方案不能用于其臨床治療的肺部耐多藥結(jié)核?。∕DR-TB）成人患者的治療,Bedaquiline能否成

14、為一線抗結(jié)核藥物,目前，作為二線抗結(jié)核藥物的有益補(bǔ)充 Bedaquiline成為一線抗結(jié)核藥物的可能性Bedaquiline要成為一線抗結(jié)核藥物仍存在問(wèn)題Mingote LR, Namutamba D, Apina F et al.The use of bedaquiline in regimens to treat drug-resistant and drug-susceptib

15、le tuberculosis: a perspective from tuberculosis-affected communities.Lancet. 2015 Jan 31;385(9966):477-9.,迪拉馬尼（DELTYBA，Delamanid ，OPC-67683),分子量:534.48,新型的作用機(jī)制:作用于細(xì)胞壁，分支桿菌的細(xì)胞壁具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu),其中豐富的霉菌酸是OPC-67683的作用靶點(diǎn), O

16、PC-67683能夠阻斷甲氧基霉菌酸和霉菌酸酮類的生物合成(類似異煙肼),但不阻斷α-霉菌酸的生物合成,這一點(diǎn)不同于異煙肼。它作為一種前藥需要在Rv3547基因編碼酶的催化下被MTB代謝性地激活，從而發(fā)揮抗結(jié)核作用。Matsumoto M，Hashizume H，Tomishige T，et a1．OPC-67683，a nitro—dihydro—imidazooxazole derivative with promising

17、 action against tuberculosis in vitro and in mice[J]，PLoSMed,2006，3(11)：e466．,Delamanid,對(duì)敏感和耐藥結(jié)核分枝桿菌的MIC值為0.006～0.024μg/mL。OPC-67683和一線藥物RFP、INH、EMB和SM的聯(lián)合給藥不產(chǎn)生相互的拮抗作用。另外,它和RFP或EMB聯(lián)合使用在體外的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出了較好的協(xié)同作用。小鼠慢性感染模型實(shí)驗(yàn)顯示,

18、該藥治療效果優(yōu)于現(xiàn)有藥物,且無(wú)交叉耐藥性。,,Delamanid,2014年5月，已獲得歐盟委員會(huì)的上市批準(zhǔn)在因耐藥或耐受性原因而無(wú)法組成有效治療方案的情況下，該藥可作為適當(dāng)聯(lián)合治療方案的一部分，用于成人耐多藥肺結(jié)核病（MDR-TB）患者的治療。成人推薦劑量為100毫克，每日2次，療程24周,臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，除QT間期延長(zhǎng)以外，Deltyba組的不良事件與安慰劑組接近,Delamanid,鑒于delamanid在不同條件治療方案

19、中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)不足及其治療耐多藥結(jié)核病患者收益的不確定性,WHO建議使用delamanid治療耐多藥結(jié)核病需滿足條件:,選擇合適的患者群體：目前推薦delamanid用于成年人(≥18歲)耐多藥肺結(jié)核疾病,包括艾滋病毒攜帶者。對(duì)于年齡≥65歲、或患有糖尿病、有嚴(yán)重肝腎功能損傷、飲酒者患者應(yīng)慎用；QT間期大于500ms的患者、兒童、孕婦、哺乳期婦女則不建議使用該藥。當(dāng)不良預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)較高（如藥物不耐受或禁忌，廣泛、進(jìn)展的疾?。?、對(duì)喹諾酮類或

20、注射類抗結(jié)核藥耐藥、泛耐藥結(jié)核病患者，可考慮使用delamanid。肺外結(jié)核患者如沒有絕對(duì)禁忌癥，潛在損害可能被效益預(yù)期抵消者可選用delamanid。嚴(yán)密觀察治療積極進(jìn)行藥物警戒、妥善管理藥物不良反應(yīng)確保患者知情同意,Delamanid,Delamanid最新數(shù)據(jù)顯示對(duì)廣泛耐藥性結(jié)核病亦有療效OBR+delamanid 有更高比率的2月痰菌陰轉(zhuǎn)率（7/16, 43.8% vs 1/10 ,10% P=0.0989

21、)給患者增加2倍治療成功的可能性接受delamanid 治療至少6個(gè)月的患者與安慰劑治療患者相比死亡風(fēng)險(xiǎn)低，盡管在隨訪時(shí)間點(diǎn)時(shí)這一結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。,Gupta R, Geiter LJ, Wells CD, et al.Delamanid for Extensively Drug-Resistant Tuberculosis.N Engl J Med. 2015 Jul 16;373(3):291-2.,,P

22、retomanid(PA-824),? 作用機(jī)制為抑制蛋白質(zhì)和細(xì)胞壁脂質(zhì)的合成? 僅對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群具有抗菌活性 ? 對(duì)繁殖期和非繁殖期結(jié)核分枝桿菌均有殺菌作用? 對(duì)敏感和耐藥菌株均有較強(qiáng)的抗菌活性，與傳統(tǒng)的抗結(jié)核藥物之間無(wú)交叉耐藥性。Ginsberg A M，Laurenzi M W，Rouse D J，et a1．Safety，tolerability，and pharmacokinetics of PA-824 in

23、healthy subj ects【J】．Antimicrob Agents Chemother，2009，53(9)：3720-3725．,,PA-824,PA-824通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)NO的釋放而殺滅休眠的結(jié)核分枝桿菌,PA-824,PaMZ方案的II期b臨床試驗(yàn)：,Dawson R, Diacon AH, Everitt D,et al.Efficiency and safety of the combination of moxif

24、loxacin, pretomanid (PA-824), and pyrazinamide during the first 8 weeks of antituberculosis treatment: a phase 2b, open-label, partly randomised trial in patients with drug-susceptible or drug-resistant pulmonary tubercu

25、losis.Lancet. 2015 May 2;385(9979):1738-47.,207名初治藥物敏感肺結(jié)核患者隨機(jī)分為3組，PA-824 200mg組的下降速度顯著快于接受常規(guī)治療的對(duì)照組，PA-824 100mg組與對(duì)照組的差別沒有達(dá)到顯著性標(biāo)準(zhǔn)。安全性，不良反應(yīng)的發(fā)生情況在3組相似，沒有明顯差別。,目前的研究結(jié)果需要在更長(zhǎng)期的臨床試驗(yàn)中進(jìn)行驗(yàn)證,PA-824,PaMZ三期臨床試驗(yàn)STAND研究已經(jīng)在全球范圍啟動(dòng)，計(jì)劃入組15

26、00例，分別在藥物敏感結(jié)核患者中4月和6月治療，和在MDR-TB患者中療程6個(gè)月的治療，隨訪期2年。B-Pa-Z 14天早期殺菌活性Bactericidal activity of pyrazinamide and clofazimine alone and in combinations with pretomanid andbedaquiline.Diacon AH, Dawson R, von Groote-Bidlingm

27、aier F, Symons G, Venter A, Donald PR, van Niekerk C, Everitt D, Hutchings J, Burger DA, Schall R, Mendel CM.Am J Respir Crit Care Med. 2015 Apr 15;191(8):943-53.,TBA-354,第二代硝基咪唑類，結(jié)構(gòu)改造而成，交叉耐藥對(duì)復(fù)制期及非復(fù)制期結(jié)核分枝桿菌的活性類似于OPC-67

28、683，強(qiáng)于PA-824改善了在動(dòng)物體內(nèi)的口服生物利用度，較長(zhǎng)的半衰期，很低的藥物間相互作用在急性及慢性動(dòng)物模型中的活性類似于OPC-67683，顯示劑量與時(shí)間的活性依賴。TBA-354與BDQ聯(lián)合應(yīng)用的活性較PA-824+BDQ強(qiáng)2-4倍，并在動(dòng)物模型中顯示了很強(qiáng)的滅菌活性，有望縮短療程。,TBA-354,In vitro and in vivo activities of the nitroimidazole TB

29、A-354 against Mycobacterium tuberculosis.Upton AM, Cho S, Yang TJ, Kim Y, Wang Y, Lu Y, Wang B, Xu J, Mdluli K, Ma Z, Franzblau SG.Antimicrob Agents Chemother. 2015 Jan;59(1):136-44,Contribution of the nitroimidaz

30、oles PA-824 and TBA-354 to the activity of novel regimens in murine models of tuberculosis.Tasneen R, Williams K, Amoabeng O, Minkowski A, Mdluli KE, Upton AM, Nuermberger EL.Antimicrob Agents Chemother. 2015

31、 Jan;59(1):129-35,2015年進(jìn)入一期臨床試驗(yàn)，是自2009年后6年的一個(gè)新的里程碑,,乙二胺類-SQ109,對(duì)敏感菌株和耐藥菌株具有同樣的抗菌作用。 對(duì)細(xì)胞內(nèi)外的菌群均有良好的殺菌活性，與INH相仿，優(yōu)于EMB。 耐藥突變發(fā)生率低（2.18╳10-9） 。,達(dá)峰時(shí)間短，為0.31h? Cmax較低，為0.135μg/ml ? 血半衰期長(zhǎng)，為5.2h ? 組織中濃度很高：其在肺組織中濃度最高達(dá)MI

32、C值120倍以上 ，且這種組織的高濃度可維持10h以上,,乙二胺類-SQ109,,吡咯類（LL-3858）,對(duì)結(jié)核分枝桿菌敏感株的MIC為0.06-0.5μg /ml，對(duì)耐藥菌株(也同樣具有抑菌作用，胞內(nèi)外的菌群均有良好的殺菌潔性。NTM菌群對(duì)此化合物也相當(dāng)敏感。小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ惋@示,單獨(dú)使用療效優(yōu)于INH,與抗結(jié)核藥物INH、 RIF、PZA和EMB合用效果優(yōu)于單獨(dú)使用其中的任何一種。對(duì)小鼠和狗進(jìn)行口服給藥(25mg，12．5mg

33、)和靜注給藥(12.5mg)后，其體內(nèi)半衰期為3.41-5.07h，口服低劑量時(shí)的絕對(duì)生物利用度為56.4％。在一定劑量范圍 (200～800mg)內(nèi)人體的藥動(dòng)學(xué)呈線性。與異煙肼和利福平的聯(lián)合使用可使其藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)得到進(jìn)一步改善。Ⅰ期臨床試驗(yàn)已經(jīng)完成，在單劑給藥達(dá)1000mg時(shí)，未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用;II期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。,噁唑烷酮類化合物PNU - 10048和AZD5847,抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮抗結(jié)核作用PNU - 1

34、00480結(jié)核分枝桿菌的體外活性優(yōu)于利奈唑胺，對(duì)MTB敏感株的MIC為0.25ug/mL在結(jié)核病小鼠模型中的活性明顯,PNU–10048與莫西沙星、吡嗪酰胺的聯(lián)合方案顯示較標(biāo)準(zhǔn)方案的利福平、異煙肼、吡嗪酰胺更好的活性。長(zhǎng)期、復(fù)發(fā)研究顯示，PNU-100480與TMC207聯(lián)合具有很強(qiáng)的抗結(jié)核作用結(jié)果表明，PNU - 10048有可能縮短藥物敏感和耐藥性肺結(jié)核的治療。人體給藥1000mg時(shí)，可在1～2h達(dá)最大血藥濃度, 在Ⅰ期臨床試

35、驗(yàn)及健康受試者藥代動(dòng)力學(xué)的研究中，PNU-100480顯示耐受性良好，未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。AZD5847(Posizolid)是阿斯利康研發(fā)的新的噁唑烷酮類化合物，I期臨床試驗(yàn)已經(jīng)完成， IIa期臨床試驗(yàn)在2012年開始進(jìn)行。噁唑烷酮類藥物對(duì)結(jié)核分枝桿菌的活性很好，問(wèn)題在于它們的毒性，希望PNU -100480和AZD5847具有與利奈唑胺同樣或更好的療效而降低毒性。,,,,,,,,RIFAQUIN,Jindani A, Har

36、rison TS, Nunn AJ, et al. High-dose rifapentine with moxiflxacin for pulmonary tuberculosis. N Engl J Med 2014;371: 1599–608.,4個(gè)月含大劑量利福噴汀及莫西沙星方案療效不及6個(gè)月方案,Merle CS, Fielding K, Sow OB, et al. A four-month gatifl oxacin-co

37、ntaining regimen for treating tuberculosis. N Engl J Med 2014; 371: 1588–98,OFLOTUB,4個(gè)月含加替沙星方案療效差于6個(gè)月方案,Gillespie SH, Crook AM, McHugh TD, et al. Four-month moxifl oxacinbased regimens for drug-sensitive tuberculosis. N

38、Engl J Med 2014;371: 1577–87.,REMoxTB,4個(gè)月含莫西沙星方案與6月方案比較，細(xì)菌數(shù)量早期有很快下降，然而，長(zhǎng)期使用的療效不優(yōu)于對(duì)照組,,Lancet Infect Dis. 2015 Feb;15(2):141-3Shortening treatment of tuberculosis: lessons from fluoroquinolone trials.Nimmo C, 

39、Lipman M, Phillips PP, et al.,目前方案中加入氟喹諾酮類藥物，不能縮短療程 動(dòng)物模型 ？ 2月痰菌陰轉(zhuǎn) ？ 臨床試驗(yàn)方法？,Discovery and Development Process,TB Drug/Regimen Development,Discovery,,Example of a 5-arm phase 2 trial

40、with a 3-stage multi-arm multi-stage design.,Patrick P. J. Phillips et al. J Infect Dis. 2012;205:S250-S257,© The Author 2012. Published by Oxford University Press on behalf of the Infectious Diseases Society of Ame

41、rica. All rights reserved. For Permissions, please e-mail: journals.permissions@oup.com,Initiated Discussion on This Riminophenazine project in March 2006Project Started from January 2007 Project Team: Institu

42、te of Materia Medica Beijing Turbuculosis Tumor and Tuberculosis Research Institute University of Ilinois at Chicago,Collaboration History,,Goal: Identify a clinical candidate with (1) an equivalent/imp

43、roved therapeutic index (2) increased solubility and shorter half-life to reduce accumulation and skin discoloration, compared to clofazimine,Program Goal and Lead Optimization Strategy,,Attributes:Novel MOA (ox. phos.

44、) – active against M(X)DR-TBLow frequency of resistance developmentPotent anaerobic and intracellular activityClinical efficacy in treatment of leprosyGood safety record among leprosy patientsEfficacious against acu

45、te/established murine TBLow cost of goodsChallenges:Dose and duration-dependent skin discoloration, GI and ocular issues. Our survey indicates main drivers are:Intrinsic color (skin discoloration)High lipophilicity

46、; cLog P > 7.5 – intracellular precipitation Human T1/2 > 70 days – accumulationLimited “modern” safety/tox/DMPK data available,Discovered in 1954, launched in 1969 as Lamprene against leprosy (Novartis),Riminoph

47、enazine Class: Clofazimine,,Attributes:Novel MOA (ox. phos.) – active against M(X)DR-TBLow frequency of resistance developmentPotent anaerobic and intracellular activityClinical efficacy in treatment of leprosyGood

48、safety record among leprosy patientsEfficacious against acute/established murine TBLow cost of goodsChallenges:Dose and duration-dependent skin discoloration, GI and ocular issues. Our survey indicates main drivers

49、are:Intrinsic color (skin discoloration)High lipophilicity; cLog P > 7.5 – intracellular precipitation Human T1/2 > 70 days – accumulationLimited “modern” safety/tox/DMPK data available,Discovered in 1954, laun

50、ched in 1969 as Lamprene against leprosy (Novartis),Riminophenazine Class: Clofazimine,對(duì)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv體外抑菌活性研究,,與六種常用的抗結(jié)核藥物相比，TBI-166具有最強(qiáng)的體外抗結(jié)核活性。,藥理研究,小鼠急性感染結(jié)核敏感菌的體內(nèi)活性研究,,Balb/c小鼠急性感染模型，感染后連續(xù)給藥 3 周，每周給藥 5 次,,抗結(jié)核新藥研發(fā)面臨的挑

51、戰(zhàn),闡明結(jié)核分枝桿菌持留性和潛伏性的本質(zhì)開發(fā)對(duì)持留菌有效具有嶄新作用機(jī)制的藥物管線尋找并確證預(yù)示療效的生物標(biāo)志和標(biāo)志物用以縮短臨床試驗(yàn)周期建立新的臨床前實(shí)驗(yàn)方法判斷最佳的藥物聯(lián)合以及新的臨床試驗(yàn)方法測(cè)試二三期臨床試驗(yàn)的藥物聯(lián)合方案結(jié)果提高高負(fù)擔(dān)國(guó)家和地區(qū)臨床試驗(yàn)?zāi)芰?,希望在不遠(yuǎn)的將來(lái),THANKS FOR YOUR ATTENTION Tel:010- 89509357Email:luyu4876@hotm