疫苗與抗體工程

1、疫苗和抗體工程,,制作組：中英1303第二小分組,免疫的基本概念,免疫是指機(jī)體的一種生理性保護(hù)功能。它包括機(jī)體對異物( 病原生物性或非病原生物性的)的識別、排除或消滅等一系列過程。這種過程可能引起自身組織損傷，也可能沒有組織損傷。概括起來說，免疫系統(tǒng)的功能主要表現(xiàn)為三方面，即防御功能、穩(wěn)定功能及免疫監(jiān)視作用，這些功能一旦失調(diào)，即產(chǎn)生免疫病理反應(yīng)。 （以毒攻毒）。免疫的概念歸納為：免疫是機(jī)體的一種保護(hù)性生理反應(yīng)，其作用是“識別”和排除

2、抗原性異物(如病原微生物，衰老的自身細(xì)胞，突變產(chǎn)生的異常體細(xì)胞等)，以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡和穩(wěn)定。免疫反應(yīng)在正常的情況下對機(jī)體是有利的，但在某些情況下也可能造成不利的后果。,機(jī)體的抗感染免疫: 抗感染免疫系統(tǒng)分先天性免疫和獲得性免疫兩大類。 人工免疫分為:人工自動免疫，人工被動免疫； 人工自動免疫：輸入抗原,使人體產(chǎn)生抗體； 人工被動免疫:輸入免疫血清(含有特異性抗體),使人體獲得一定的免疫力,可立即發(fā)揮免疫作用

3、。,疫苗的定義和分類,疫苗定義：凡具有抗原性接種于機(jī)體可產(chǎn)生特異的自動免疫力，可抵御感染病的發(fā)生或流行，總稱為疫苗。根據(jù)用途，可將疫苗分成預(yù)防類，治療類和診斷類三大類?！熬纭保阂约?xì)菌制備的制劑；“疫苗”：病毒及立克次氏體制備的制劑；“類毒素”：以細(xì)菌代謝產(chǎn)物——毒素制備的制劑。,疫苗分類,（1） 減毒活疫苗（2） 滅活疫苗（3）  多糖疫苗,（4）   組分疫苗（5） 

4、0; 基因工程疫苗,（6）   合成肽疫苗,（7）   抗獨(dú)特型抗體疫苗,（8）   基因疫苗,疫苗的種類,目前在我國應(yīng)用的疫苗有幾十種到上百種。最常用的有十種。新型的疫苗正在不斷研制,乙腦疫苗,用于預(yù)防流行性乙型腦炎(簡稱乙腦)。將流行性乙型腦炎病毒感染地鼠腎細(xì)胞，培育后收獲病毒液凍干制成減毒活疫苗，用于預(yù)防流行性乙型腦炎。,乙肝疫苗,用以預(yù)防乙型肝炎。目前我國使用的主要有

5、乙型肝炎血源疫苗和乙肝基因工程疫苗兩種，適用于所有可能感染乙肝者。    乙型肝炎血源疫苗系由無癥狀乙型肝炎表面抗原(HBsAg)攜帶者血漿提取的HBsAg經(jīng)純化滅活及加佐劑吸附后制成。,狂犬疫苗,用于狂犬病的預(yù)防?？袢∈侵滤缆蔬_(dá)100％的烈性傳染病，及時、全程接種疫苗是預(yù)防此病的重要措施之一。目前我國應(yīng)用的主要有國產(chǎn)普通濃縮疫苗、國產(chǎn)精制疫苗和法國進(jìn)口“維爾博”疫苗三種，其中普通疫苗由于副反應(yīng)過

6、強(qiáng)、反應(yīng)率較高而面臨淘汰，而精制疫苗正逐步在我國得到推廣，“維爾博”疫苗則是目前國內(nèi)質(zhì)量最好的一種，但價格略高。,甲肝疫苗,用于預(yù)防甲型肝炎。將對人無害，具有良好免疫原性的甲型肝炎病毒減毒株接種于人二倍體細(xì)胞，培養(yǎng)后經(jīng)抽提和純化溶于含氨基酸的鹽平衡溶液，用于預(yù)防甲型病毒性肝炎。,新型疫苗,預(yù)防SARS疫苗預(yù)防禽流感疫苗預(yù)防甲型H1N1流感疫苗預(yù)防艾滋病疫苗,組合疫苗,疫苗作為抗原往往組合起來使用。最常用的組合是白喉-破傷風(fēng)-百日

7、咳（DTP）；白喉-破傷風(fēng)-百日咳-乙型肝炎（DTP-HepB）；五價疫苗：白喉-破傷風(fēng)-百日咳-乙型肝炎-b型流感嗜血桿菌；麻疹-腮腺炎-風(fēng)疹（MMR）,滅活的目的:破壞疫苗的毒力，但同時要減少疫苗免疫力的損失。 滅活方法:甲醛溶液，酚溶液，掌握好溫度和時間。 疫苗的純化： 去除存在的動物組織，降低疫苗接種后可能引起的不良反應(yīng)。 凍干：疫苗一般只能在2-8℃保存12個月。 凍干:如冷凍干燥法等。,疫苗的處理,基

8、因工程疫苗,基因工程疫苗：如基因工程乙型肝炎疫苗用于乙肝的預(yù)防。構(gòu)建活疫苗：可將外源DNA插入載體，該載體能在宿主內(nèi)復(fù)制，得到減毒疫苗。,例： 乙型肝炎表面抗原生產(chǎn)工藝,功能:乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒表面包被的抗原（一種蛋白質(zhì)），是乙肝疫苗的有效成分，預(yù)先注射可使人產(chǎn)生抗體，故可預(yù)防乙肝病毒的感染。,疫苗的接種方法,直接注射法：裸質(zhì)粒DNA或經(jīng)脂質(zhì)體包裹的裸質(zhì)粒DNA直接從肌肉，皮肉，皮下，黏膜，靜脈內(nèi)注射。包裹

9、DNA的脂質(zhì)體能與組織細(xì)胞發(fā)生膜融合，而將DNA攝入。減少核酸酶對DNA的破壞?；驑屴Z擊法：將質(zhì)粒DNA包被在金微粒子表面，用基因槍將包被DNA的金微粒子高速穿入組織細(xì)胞。細(xì)菌或病毒攜帶法：選擇一種容易進(jìn)入 某組織器官的細(xì)菌或病毒，去除其繁殖基因，形成繁殖缺陷菌株，將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化到該細(xì)菌或病毒中，將重組的細(xì)菌或病毒轉(zhuǎn)入到組織器官中。由于細(xì)菌或病毒不能繁殖，細(xì)菌或病毒在體內(nèi)裂解釋放出DNA。,1.5.4 核酸疫苗的生產(chǎn),抗體,抗體

10、（antibody,Ab)是B細(xì)胞識別抗原后增殖分化為槳細(xì)胞所產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，主要存在于血清等體液中，能與相應(yīng)抗原特異性地結(jié)合，具有免疫功能。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白?？贵w和免疫球蛋白的關(guān)系: 抗體都是免疫球蛋白，并非所有免疫球蛋白都具有抗體活性。,抗體的分類,根據(jù)生產(chǎn)方法和組成： 多克隆抗體 單克隆抗體 基因工程抗體根據(jù)存在的位置：

11、 分泌型Ig(sIg) 膜型Ig(mIg),單克隆抗體（monoclonal antibody, mAb）：由一個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的、針對某一特定抗原決定簇的高度特異性抗體；多克隆抗體：多個抗原決定基——機(jī)體——多種抗體的混合物基因工程抗體:,人工制備的抗體,單抗制備步驟,抗原的制備；動物的選擇；免疫：如脾內(nèi)一次免疫（在脾內(nèi)注入抗原，一定時間后，取脾細(xì)胞，單細(xì)胞）骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)：融合；培養(yǎng)可分泌特異性抗體雜交瘤細(xì)

12、胞的篩選：,人單克隆抗體制備難題,人-人雜交瘤技術(shù)：由于倫理學(xué)的問題，難于獲得人的B淋巴細(xì)胞的獲得是不允許的，且人的骨髓瘤細(xì)胞性能不好，技術(shù)上仍未突破；人-鼠雜交瘤技術(shù)：小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和人的B淋巴細(xì)胞融合所獲得的雜交瘤，可產(chǎn)生人的單克隆抗體。并可在體外長期產(chǎn)生。關(guān)鍵問題是這種雜交瘤在體外傳代8周至6個月后，停止分泌人的單克隆抗體。,多克隆抗體,用抗原免疫動物后所獲得的免疫動物的血清均為多克隆抗體。通常一個抗原分子具有多個抗原決定

13、簇，不同的抗原決定簇能刺激不同的B淋巴細(xì)胞而產(chǎn)生針對不同決定簇的抗體。這種由不同的B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體。,單克隆和多克隆抗體的比較和用途,特異性,敏感性,均一性,McAb,PcAb,,,低,差,無,高,強(qiáng),有,1、用于免疫學(xué)檢測，輔助臨床診斷,2、McAb用于親和層析，分離微量可溶性抗原,3、標(biāo)記的McAb用于基礎(chǔ)研究，了解細(xì)胞分化等,4、制備生物導(dǎo)彈用于腫瘤、移植等的臨床治療。,應(yīng)用：臨床檢測、抑制器官移植排斥、治