抗體修飾腫瘤細胞疫苗實驗研究.pdf

1、腫瘤疫苗作為生物療法之一被人們廣泛研究，尤其在防止腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移中具有重要價值。腫瘤細胞疫苗含有所有的腫瘤相關(guān)抗原，所以至今腫瘤細胞疫苗仍有不可替代的優(yōu)勢。為了提高腫瘤疫苗的免疫效果，該課題研究了新型的抗體修飾腫瘤細胞疫苗。為了進行臨床前的體內(nèi)實驗研究，我們建立了小鼠模型。通過文獻查閱和抗原抗體結(jié)合空間結(jié)構(gòu)分析，選擇克隆人CD20胞外區(qū)和部分跨膜區(qū)基因與次級淋巴組織趨化因子信號肽基因區(qū)域進行拼接，構(gòu)建了融合基因真核表達質(zhì)粒(pcDNA3f

2、-sig-CD20)。該質(zhì)粒導入B16F10腫瘤細胞后篩選出穩(wěn)定克隆株，經(jīng)流式細胞法和熒光顯微鏡驗證該細胞株(B16/CD20)表達目的蛋白。通過與臨床抗CD20單克隆抗體藥物Rituximab(美羅華)結(jié)合后制備成疫苗，治療同系C57BL/6小鼠人工肺腫瘤轉(zhuǎn)移模型，并對其抗腫瘤效應機制進行了初步探討。此外，應用Rituximab修飾人CD20+腫瘤細胞制備疫苗誘導抗腫瘤特異性T細胞，并用抗HLA-A0201抗體封閉實驗驗證MHC限制性

3、的殺傷腫瘤作用。 研究結(jié)果顯示，在人工肺轉(zhuǎn)移腫瘤實驗動物模型中，該疫苗能有效的干預腫瘤結(jié)節(jié)的生長，延長小鼠生存期，獲得較好的抗腫瘤效果。LDH釋放法測定表明：該疫苗免疫小鼠后顯著提高了脾淋巴細胞特異性殺傷腫瘤的能力。CD8+細胞和NK刪除實驗進一步驗證CD8+T淋巴細胞在抗腫瘤轉(zhuǎn)移過程中是主要的效應細胞。實驗中我們還觀察到抗體修飾瘤苗不僅能誘導針對轉(zhuǎn)染了CD20的腫瘤細胞殺傷反應，而且還提高對野生型黑色素瘤的殺傷效應。共聚焦顯微

4、鏡和流式細胞測定顯示：抗體修飾瘤苗與DC孵育后能明顯增強DC對腫瘤細胞的捕獲率，提示該疫苗通過抗原呈遞細胞Fc受體途徑增強對腫瘤抗原捕捉，從而提高了抗原呈遞效果和誘導了特異性抗腫瘤作用。人體外實驗系統(tǒng)表明：Rituximab修飾人的腫瘤細胞疫苗誘導了抗腫瘤效應細胞。HLA-A2抗體封閉實驗進一步證實了該效應細胞是MHC限制性的細胞毒性T細胞。我們建立的抗體修飾瘤苗制備方法簡單，體內(nèi)使用安全有效，抗體用量較少，因此制備成本低廉。此法為臨床