口蹄疫滅活疫苗免疫豬抗體“灰色區(qū)”細(xì)胞免疫水平差異分析.pdf

1、有研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)物免疫口蹄疫滅活疫苗后，機(jī)體內(nèi)抗口蹄疫病毒抗體水平與攻毒后動(dòng)物的保護(hù)力之間存在密切聯(lián)系。根據(jù)攻毒前機(jī)體內(nèi)抗體水平與攻毒后動(dòng)物保護(hù)力之間的關(guān)系可將抗口蹄疫病毒抗體水平進(jìn)行分類，分別為：抗體白色區(qū)，即完全保護(hù)區(qū)，體內(nèi)抗體水平很高，動(dòng)物感染口蹄疫病毒后處于完全保護(hù)狀態(tài)；黑色區(qū)，即完全不保護(hù)區(qū)，體內(nèi)抗體水平很低，動(dòng)物感染口蹄疫病毒后全部發(fā)?。换疑珔^(qū)，即部分保護(hù)區(qū)，體內(nèi)抗體水平處于白色區(qū)和黑色區(qū)之間，動(dòng)物感染口蹄疫病毒后，有些動(dòng)物處于

2、保護(hù)狀態(tài)，而有些動(dòng)物會(huì)發(fā)病。在灰色區(qū)內(nèi)還會(huì)出現(xiàn)抗體水平高的動(dòng)物會(huì)發(fā)病，而抗體水平較低的動(dòng)物得到保護(hù)的現(xiàn)象。本研究的主要目的是探究抗體灰色區(qū)內(nèi)動(dòng)物保護(hù)力不同的機(jī)制。
　　為探索口蹄疫免疫抗體灰色區(qū)形成的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)選取33頭健康長白豬免疫自行制備的 O型口蹄疫滅活疫苗，于免疫后28天進(jìn)行同源強(qiáng)毒攻毒，隨后連續(xù)觀察十天確定動(dòng)物發(fā)病情況。于免疫前及免疫后第28天采集血液樣品進(jìn)行試驗(yàn)，使用液相阻斷ELISA測定血清中抗體水平，流式細(xì)胞術(shù)測

3、定外周血中淋巴細(xì)胞亞群含量，抗體芯片技術(shù)測定血清中細(xì)胞因子含量。根據(jù)免疫后第28天時(shí)血清中抗體水平與攻毒后動(dòng)物發(fā)病情況的關(guān)系，確定免疫抗體灰色區(qū)的范圍。結(jié)果表明豬免疫口蹄疫滅活疫苗后，灰色區(qū)抗體效價(jià)的范圍為1:6-1:45，灰色區(qū)動(dòng)物在免疫前后CTL細(xì)胞含量及TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-15、IL-18、MIG、GM-CSF、IL-1α、TGF-α、TWEAK-R等細(xì)胞因子的含量均發(fā)生變化?；疑珔^(qū)內(nèi)保護(hù)組動(dòng)物免疫后CTL細(xì)

4、胞含量與免疫前相比出現(xiàn)升高，而發(fā)病動(dòng)物則出現(xiàn)顯著性降低。對(duì)于IFN-γ、IL-12、GM-CSF、IL-1α、IL-15和TNF-α這幾種細(xì)胞因子，其含量在灰色區(qū)保護(hù)組動(dòng)物中免疫后與免疫前相比出現(xiàn)升高，而發(fā)病動(dòng)物則沒有發(fā)生變化或出現(xiàn)不同程度的降低。MIG和TWEAK R在保護(hù)組動(dòng)物中免疫前后沒有明顯變化，但是發(fā)病動(dòng)物其含量出現(xiàn)下降。而對(duì)于IL-18和TGF-α，保護(hù)組動(dòng)物在免疫后其含量低于免疫前，不保護(hù)組動(dòng)物IL-18的含量在免疫后反而

5、出現(xiàn)上升，TGF-α的含量沒有明顯變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫應(yīng)答的CTL細(xì)胞及TNF-α、IFN-γ、 IL-12和IL-15等Th1型細(xì)胞因子能夠提高灰色區(qū)內(nèi)動(dòng)物抗口蹄疫病毒感染的能力，由此可得出免疫后誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答強(qiáng)弱與口蹄疫抗體灰色區(qū)內(nèi)動(dòng)物保護(hù)力的高低有關(guān)。
　　同時(shí)選用另外33頭健康長白豬免疫口蹄疫滅活疫苗，觀察整個(gè)免疫階段外周血淋巴細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)變化。分別于免疫前，免疫后第1、3、5、7、10、14、21、35天

6、采集抗凝血，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測血液中細(xì)胞亞群的分布情況，同時(shí)測定血清中抗體水平。結(jié)果顯示，在整個(gè)免疫期Th細(xì)胞含量變化與B細(xì)胞含量變化存在相關(guān)性，同時(shí)也與抗體水平的變化相關(guān)，這表明了Th細(xì)胞與B細(xì)胞之間存在相互作用的關(guān)系，共同介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。DCs含量在免疫后快速升高，說明其在短期內(nèi)即可被活化發(fā)揮功能。結(jié)果表明，疫苗免疫后DCs能快速發(fā)揮功能，使固有免疫應(yīng)答朝著適應(yīng)性免疫應(yīng)答的方向發(fā)展。B細(xì)胞和 Th細(xì)胞含量的升高說明體液免疫應(yīng)答